Определение суммарного содержания тиоловых соединений в сыворотке крови человека

Петрова Е.В.,¹ Дорожко Е.В.²

¹ Национальный исследовательский Томский политехнический университет,

Томск, Россия.

Студент VI курса.

² Национальный исследовательский Томский политехнический университет, Томск, Россия. Молодой учёный.

Научный руководитель: Короткова Е.И.

Глутатион – одно из многих органических соединений, содержащий реактивную сульфгидрильную группу, способную к окислению и участию в окислительно-восстановительных реакциях. Все тиоловые соединения обладают более или менее выраженной антиоксидантной активностью. На долю глутатиона приходится 90–95% всех небелковых тиоловых соединений.

Исследование серосодержащих групп имеет диагностическую ценность, например, определение содержания сульфгидрильных групп в сыворотке крови у больных с заболеваниями центральной нервной системы показало зависимость их уровня от вида заболевания (опухолевые, воспалительные) и его активности [1]. Активность патологического процесса при заболеваниях печени, в частности при циррозах, соответствует снижению содержания сульфгидрильных групп в сыворотке крови по сравнению с нормой [2]. Эффективно проводимая терапия и достижение ремиссии при этих заболеваниях сопровождаются повышением уровня свободных сульфгидрильных групп.

В настоящее время существует много методов определения тиоловых соединений в разных биологических объектах, в том числе в сыворотке и плазме крови человека: спектральные, электрохимические и хроматографические.

В работе использовался вольтамперометрический метод электрохимического определения глутатиона в сыворотке крови человека, основанный на съемке вольтамперограмм в анодной области потенциалов от -1.2 до 0 В без добавления и с последующим добавлением разного объема сыворотки крови. Минимальный объем пробы 0,5 мл.

Все измерения проводились на анализаторе ТА-2 с подключенной к нему трехэлектродной электрохимической ячейкой, состоящей из рабочего электрода (ртутно-пленочный), электрода сравнения (хлорид-серебрянный) и вспомогательного электрода (хлорид-серебрянный), погруженных в фоновый раствор электролита (боратный буфер 0,025 М, РН=9,18). Аналитический сигнал глутатиона в крови был получен в области потенциала Е = -0,2 В до Е = -0,4 В, при скорости развертки потенциала W = 60 mB/c, общую концентрацию тиоловых соединений в сыворотке крови человека рассчитывают по высоте анодного пика методом градуировочного графика по глутатиону в интервале концентраций 1,0 ∙10^-4 – 10,0 ∙ 10^-4моль/л.

Для построения градуировочного графика по глутатиону регистрировали анодные пики окисления глутатиона в интервале концентраций 1,0 ∙10^-4 – 10,0 ∙ 10^-4моль/л (рис. 1,2).

Рис.1.Вольтамперограммы окисления глутатиона на РПЭ в боратном буферном растворе (рН 9,18).

Рис. 2.Зависимость тока окисления глутатиона на РПЭ от его концентрации в растворе (боратный буфер рН 9,18; W = 60 мВ/с)

По результатам исследований можно сделать выводы о том, что содержание глутатиона в сыворотке крови, пациентов с диагнозом алкоголизм второй стадии, значительно меньше, чем в сыворотке крови здоровых людей. По всей видимости, это связано с тем, что восстанавливается окисленный глутатион под действием фермента глутатионредуктаза, который постоянно находится в биологических жидкостях в активном состоянии и индуцируется при оксидативном стрессе. Отношение концентраций С (GSH)/С (GSSG) – есть показатель токсичности внутриклеточной среды, в нашем случае сыворотки крови.

Литература:

[1] Мороз Л.А. Вопросы клинической лабораторной диагностики, 133-136 (1973)

[2] Плаксина Г.В. Вопросы клинической лабораторной диагностики, 140-142 (1973)

Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (ГК № 14.740.11.1369) и гранта РФФИ (10-08-00306-а)