Принципы работы гематологических анализаторов

Наибольшее распространение получили приборы, подсчет клеток в которых основан на кондуктометрическом способе, который получил также название метода Култера. На более сложных приборах применяются оптические и радиочастотные детекторы.

Кондуктометрические приборы считают клетки путем пропускания их суспензии через отверстие малого диаметра (апертуру) и определения значений электрического сопротивления, вызванных прохождением клеток. Пропуская через апертуру строго определенное количество суспензии и регистрируя число импульсов, осуществляется подсчет клеток, а анализ амплитуды импульсов позволяет оценить размеры микрообъектов.

Кондуктометрический тип счетчиков приспособлен для точного подсчета эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Для подсчета эритроцитов пробу крови разбавляют в изотоническом растворе. Поскольку в норме число эритроцитов значительно превышает количество лейкоцитов, наличие последних в растворе обычно не влияет на результат исследования.

Для подсчета лейкоцитов необходимо лизировать эритроциты. Слишком высокое содержание клеток в растворе может привести к тому, что две частицы или более будут проходить через апертуру одновременно. Этот источник ошибок может быть корректирован использованием большого количества растворителя на одну пробу или электронным путем.

Подсчет тромбоцитов проводят после седиментации эритроцитов или, на более новых моделях приборов, одновременно с подсчетом эритроцитов.

Кондуктометрические счетчики обладают возможностями не только подсчитывать клетки, но также измерять их объем. Зная средний объем эритроцита и содержание этих клеток в крови, легко вычислить гематокрит. На таких приборах можно определять до 18 параметров крови:

1. RBC - количество эритроцитов,

2. HGB - гемоглобин,

3. HCT - гематокрит,

4. MCV - средний корпускулярный объем эритроцита,

5. RDV - ширина распределения эритроцитов по объему,

6. МСН - среднее содержание гемоглобина в эритроците,

7. MCHC - средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах,

8. WBC - количество лейкоцитов,

9. GRA - гранулоциты, % и содержание в 10³ кл/мм³,

10. LYC - лимфоциты, % и содержание в 10³ кл/мм³,

11. MON - моноциты, % и содержание в 10³ кл\мм³,

12. PLT - количество тромбоцитов,

13. MPV - средний объем тромбоцитов,

14. PDW - ширина распределения тромбоцитов по объему,

15. PCT - тромбокрит.

Кроме того, прибор, регистрирующий 3 гистограммы распределения клеток по объему (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты). С появлением анализаторов крови, регистрирующих множество параметров, интерпритация результатов анализа крови претерпела некоторые изменения. Некоторые из новых параметров, хотя и были приняты и исполняются на практике, до сих пор не имеют надежной шкалы показателей нормы.

Диагностика анемий

Квалифицированная интерпретация полученных результатов позволяет диагностировать и определить характер анемии, ориентировать врача на проведение дополнительных исследований, таких как определение сывороточного железа, ферритина, витамина В₁₂. Это очень актуально, учитывая, что распространенность железодефицитных состояний у женщин детородного возраста и детей в некоторых регионах России достигает 30-60%, а по данным ВОЗ число лиц с дефицитом железа в мире составляет 500 - 600 млн. человек (Lechner К./ Gadner Н., 1993).

Железо относится к разряду так называемых облигатных биометаллов и является необходимым биохимическим компонентом в процессах транспорта кислорода и тканевого дыхания, роста и пролиферации клеток, в обеспечении иммунологической резистентности организма. Известно существование двух форм дефицита железа: латентного (дефицит железа без анемии) и железодефицитной анемии (ЖДА). Обе формы являются причиной снижения трудоспособности у взрослых, повышения восприимчивости к острым респираторным вирусным инфекциям у детей, вызывают задержку их роста и развития. В соответствии с этим важное значение имеет своевременная диагностика ЖДА, мониторинг в процессе лечения и профилактика железодефицита у населения, особенно у беременных женщин. Для оценки состояния метаболизма железа в клинической практике наиболее часто используются такие показатели, как содержание сывороточного железа, общей железосвязывающей способности, насыщение трансферрина железом и содержание ферритина в сыворотке крови. В зависимости от формы железодефицита и стадии железодефицитной анемии эти показатели, такжекак и гематологические параметры, могут быть различны. Преимуществом автоматического анализа крови является возможность получения не только количественных показателей, но и данных о распределении клеток по объему в виде гистограмм.

В начальной стадии ЖДА количество эритроцитов находится в пределах нормы, а содержание гемоглобина может быть на нижней границе нормы или сниженным, что отражает нормальную пролиферативную активность костного мозга в ответ на недостаток железа в организме. По данным, полученным С.А. Луговской и соавт. (1996) на гематологическом счетчике Система 9000. (Serono), это сопровождается незначительным уменьшением MCV при нормальном RDW, что свидетельствует о преобладании однородных клеток с малым объемом. Эритроцитарная гистограмма имеет обычную форму и лишь смещается влево. По мере дальнейшего нарушения процессов гемоглобинообразования происходит еще большее снижение MCV, МСН, МСНС, увеличение RDW. Эритроцитарная гистограмма приобретает вид одиночного широкого пика, значительно сдвинутого влево, а на тромбоцитарной гистограмме появляется второй пик в области 30—38 фл, соответствующий микроэритроцитам.

На фоне лечения ЖДА препаратами железа происходит нормализация HGB, МСН, МСНС, однако RDW остается увеличенным. Эритроцитарная гистограмма характеризуется широким основанием за счет разнородности эритроцитов по объему. Изменения гематологических показателей коррелируют со снижением сывороточного железа, насыщением трансферрина сыворотки, повышением общей железосвязывающей способности и сниженным сывороточным ферритином. Вместе с тем, латентный дефицит железа характерными изменениями со стороны эритроцитов не проявляется и может быть диагностирован только на основании результатов исследований параметров метаболизма железа.

Помимо железодефицитной анемии, эритроцитарная гистограмма с двумя пиками эритроцитов между 50 и 140 фл, указывающих на присутствие гетерогенной популяции клеток, может наблюдаться после гемотрансфузий.

При В₁₂-дефицитной анемии в результате замедления процессов синтеза ДНК и деления клеток образуется популяция эритроцитов с резко увеличенным объемом. Эритроцитарная гистограмма растянута, смещена вправо в зону макроцитов, чему соответствует повышение RDW и MCV при низких показателях RBC, HGB, НСТ, высоком МСН и нормальной МСНС. Диагноз В₁₂-дефицитной анемии подтверждается исследованием миелограммы, определением в сыворотке крови концентрации витамина В₁₂ или фолиевой кислоты. Имеет значение морфологическое исследование периферической крови (макроцитоз, гиперхромия, тельца Жолли, базофильная пунктация эритроцитов, гиперсегментация нейтрофилов).

При хронической почечной недостаточности анемия, в патогенезе которой лежит нарушение синтеза эритропоэтина, часто имеет нормохромный, нормоцитарный характер с нерезко выраженным анизоцитозом. Подобные изменения могут наблюдаться при острых кровопотерях, гемолизе, на фоне химиотерапии.

При рефрактерной сидеробластной анемии на фоне нормохромной нормоцитарной анемии отмечается резкое увеличение RDW, что отражается в растянутой с широким основанием эритроцитарной гистограмме. При исследовании окрашенного мазка наблюдается выраженный смешанный анизоцитоз за счет присутствия микроцитов, макроцитов, мегалоцитов, овалоцитов, мишеневидных эритроцитов, шизоцитов. Диагноз подтверждается исследованием пунктата костного мозга с цитохимической окраской на сидеробласты. Таким образом, автоматизированный анализ крови сольных с различными видами анемий должен дополняться морфологическим исследованием мазков крови, а затем необходимыми биохимическими, иммунологическими методами исследования.

При эритремии на фоне повышенного содержания эритроцитов, гемоглобина и гематокрита отмечаются изменения со стороны эритроцитарных индексов, сходные с железодефицитной анемией, т.е. снижение MCV, MCH MCHC и увеличение RDW, а эритроцитарная гистограмма смещена в зону микроэритроцитов. Поскольку основным методом лечения этих больных является кровопускание, многократные потери крови ведут к развитию дефицита железа в организме. В связи с этим актуальным является ранняя диагностика развития этого состояния, что и позволяет осуществить автоматизированный анализ крови.

По данным зарубежных авторов, в большинстве случаев железодефицитной анемии RDW становится выше нормы раньше, чем изменяются остальные параметры (MCV и гемоглобин). Предлагается изолированное снижение RDW расценивать в качестве раннего предположительного признака развития дефицита железа (Бессман Дж.Д., 1989; Wintrobe М.М., 1993). Кроме того, этот показатель может оказывать помощь при дифференциальной диагностике микроцитарных анемий. Так, у пациентов с малой b-талассемией отмечается низкий MCV, а показатель RDW обычно нормален, тогда как при дефиците железа MCV — низкий, а RDW — высокий.

Использование современных гематологических счетчиков позволяет быстро, с более высокой точностью и воспроизводимостью, чем при мануальных методах, оценить состояние кроветворной системы, определить направление дальнейшего исследования, оценить динамику изменений красной крови в процессе проводимой терапии. Пока рано говорить, какое место будет занимать новая аппаратная технология в диагностической гематологии, но, вероятно, она вытеснит или дополнит многие аспекты традиционного исследования мазка крови.

Диагностика острых лейкозов.

Острые лейкозы — опухолевое заболевание гемопоэтической системы, при котором лейкемические изменения происходят на уровне коммитированной уни- или бипотентной костномозговой клетки-предшественницы. В зависимости от того, предшественник какого ряда гемопоэза подвергается опухолевой трансформации, наблюдаются различия в особенностях гематологической картины, клиническом течении и прогнозе у больных острым лейкозом.

Диагностика острых лейкозов включает исследование периферической крови, костного мозга и в отдельных случаях проведение трепанобиопсии. Определение варианта острых лейкозов базируется на данных комплексного исследования бластных клеток костного мозга и крови. Все лейкозы делятся на две большие группы: острые миелоидные или нелимфобластные (ОНЛЛ) или острые лимфобластные (ОЛЛ) лейкозы.

Анемия, тромбоцитопения и нейтропения в крови — характерные признаки, выявляющиеся у большинства больных при постановке диагноза.

Степень снижения показателей красной крови (эритроцитов, ретикулоцитов и содержания гемоглобина) у больных значительно колеблется. Анемия у большинства больных носит нормохромный, нормоцитарный характер. Содержание гемоглобина в одном эритроците (МСН) сохраняется в пределах нормальных колебаний (27—31 пг), так же как концентрация гемоглобина — МСНС (0,33— 0,37 г/дл) и объем эритроцитов (80—96 фл). Однако если у больного наблюдается кровоточивость, то можно констатировать наличие дефицита железа и гипохромию эритроцитов. Анемия сильнее выражена при ОНЛЛ, чем при ОЛЛ. Самые низкие показатели содержания гемоглобина (до 50 г/л) и количества эритроцитов (до 1,0- 10¹² /л) наблюдаются при эритромиелозе. У этих больных отмечаются макроцитоз эритроцитов и нормоцитоз в периферической крови.

Тромбоцитопения определяется у подавляющего большинства больных. Самые низкие показатели тромбоцитов отмечаются при остром промиелоцитарном лейкозе (до 10—15Х10⁹/л). Однако в 1—2% случаев при ОНЛЛ отмечается тромбоцитоз в периферической крови (более 400X109/л), иногда сочетающийся с мегакариоцитозом в костном мозге. Подобная картина чаще всего наблюдается у больных ОНЛЛ с нарушениями 3, 5 и/ или 7 хромосом.

Количество лейкоцитов в периферической крови больных острым лейкозом может колебаться в очень широких пределах — от 1х10⁹/л до 200х10⁹/л.

В гемограмме в большинстве случаев выявляются бластные клетки. Их число широко варьирует (1—95%) у разных больных. Однако следует иметь в виду, что в отдельных случаях в момент постановки диагноза бласты в крови могут не обнаруживаться.

Пунктат костного мозга обычно содержит достаточное количество ядросодержащих элементов (30—400Х10⁹/л миелокариоцитов). В редких случаях отмечается низкая клеточность. Обычно гипоклеточный костный мозг в сочетании с лейкопенией наблюдается при промиелоцитарном лейкозе. Число мегакариоцитов в костном мозге у большинства больных снижено, или они отсутствуют.

В миелограмме определяются увеличение числа бластных клеток и сужение нормальных ростков гемопоэза. Содержание бластных клеток в костном мозге является величиной, на основании которой проводится дифференциальная диагностика между острым лейкозом и миелодиспластическим синдромом (МДС). При количестве бластных клеток более 30% констатируется острый лейкоз, менее 30% — МДС.

Трепанобиопсия костного мозга проводится тем больным, у которых содержание миелокариоцитов в костном мозге чрезвычайно низко и подсчет миелограммы в скудных препаратах затруднителен. Исследование трепаната позволяет получить точное представление о клеточности костного мозга и о количестве мегакариоцитов. Подобные ситуации встречаются крайне редко. Диагностика вариантов острых лейкозов имеет решающее значение для выбора терапии и определения прогноза заболевания. Основой современного разделения острых лейкозов на варианты послужила классификация, предложенная в 1976 г. группой французских, американских и британских гематологов. Она получила название ФАБ-классификации. Классификация базировалась на морфологических и цитохимических параметрах характеристики бластных клеток костного мозга и крови.

В период 80-х годов в диагностике острых лейкозов важное значение приобрело иммунофенотипирование бластов. С помощью гибридомной техники была получена широкая панель моноклональных антител (МКА), которые позволили выявить признаки дифференцировки клеток, не обнаруживаемые при исследовании морфоцитохимическими методами. Использование иммунологических подходов сыграло ведущую роль в диагностике отдельных вариантов ОНЛЛ (эритроидного, мегакариоцитарного) и характеристике всех типов бластов при В- и Т-линейных ОЛЛ.

В тот же период с помощью цитогенетических исследований были выявлены закономерные изменения кариотипа бластов при разных вариантах острых лейкозов. Полученные данные оказались важными как для уточнения диагностики варианта лейкоза, так и для прогноза заболевания.

Накопленные сведения позволили установить, что в настоящее время при диагностике вариантов острых лейкозов необходимо использовать данные морфоцитохимического, иммунологического и цитогенетического исследования бластных элементов. Такой комплексный подход способствует значительному повышению эффективности современных схем терапии больных острым лейкозом.

Диагностика хронических лейкозов.

Хронические лейкозы (ХЛ) представляют собой группу опухолей кроветворной ткани, возникающих вследствие опухолевой трансформации стволовых полипотентных клеток или коммитированных клеток-предшественников ХЛ подразделяют на две подгруппы миелоидные и лимфоидные (миело- и лимфопролиферативные заболевания) Наиболее частой формой миелоидных опухолей является хронический миелолейкоз, при котором все клеточные линии принадлежат к опухолевому клону Клеточные элементы при хронических миелоидных лейкозах долгое время сохраняют способность к дифференцировке и созреванию.

Течение хронических лейкозов характеризуется прогрессированием лейкемического процесса, которому сопутствует неизбежное накопление клеточной массы опухоли в костном мозге и периферической крови. Постепенное увеличение количества опухолевых элементов костного мозга приводит к вытеснению элементов нормального кроветворения, которое сначала носит относительный, а затем приобретает абсолютный характер, к замене жирового костного мозга на активный лейкозный (опухолевый). Этим изменениям гемопоэза, как правило, сопутствуют клинические симптомы, свойственные лейкозам, такие как анемия, инфекционные осложнения, геморрагический синдром. Завершается лейкоз чаще развитием бластного криза либо гематосаркомы. Все формы хронических лейкозов сопровождаются недостаточностью костномозгового кроветворения.

Хронический миелолейкоз. Хронический миелолейкоз (ХМЛ) — опухоль миелоидной ткани. Морфологический субстрат опухоли составляют преимущественно созревающие и зрелые гранулоциты. ХМЛ встречается обычно в возрасте 20—60 лет, реже в старческом и совсем редко у детей до 10 лет, с одинаковой частотой у мужчин и женщин.

Патогенез. ХМЛ развивается в результате злокачественной трансформации стволовой кроветворной клетки, сохраняющей способность к дифференцировке и созреванию до зрелых клеточных элементов Хромосомным маркером опухолевого клона при ХМЛ является филадельфийская хромосома (Ph-хромосома). Патологическая хромосома образуется в результате транслокации t(9,22). При этом происходит перенос протоонкогена с-abl из обычного положения на 9-й хромосоме в расположение гена bcr на 22-й хромосоме в результате образуется химерный ген bcr/abl. Белок, продукт этого химерного гена, функционирует как тирозинкиназа, идентичная продукту гена с-abl, но с повышенной ферментативной активностью. Аномальная хромосома обнаруживается почти во всех клетках миелопоэза (до 88%) и в В-лимфоцитах, поэтому все потомство — гранулоциты, моноциты, эритрокариоциты и мегакариоциты — принадлежит к опухолевому клону. Это объясняет разнообразие клеточных вариантов бластной трансформации. До 95% случаев ХМЛ — Ph позитивные и лишь 5—8% наблюдений регистрируются как Ph-негативные. Ph хромосома выявляется в большей части клеток миелоидной ткани костного мозга с момента развития болезни, как при прогрессировании лейкоза, так и в период ремиссии.

Для ХМЛ свойственно первичное поражение костного мозга с постепенным нарастание опухолевой массы, которое сопровождается увеличением количества лейкозных миелокариоцитов, замещением жирового костного мозга и инфильтрацией лейкозными клетками органов и тканей.

Вытеснение нормальных ростков кроветворения неэффективный эритропоэз, появление аутоантител к эритрокариоцитам и тромбоцитам приводят к развитию анемии и тромбоцитопении. В ряде случаев гиперлейкоцитоз вызывает лейкостазы в сосудах с нарушением мозгового кровообращения либо развитием ДВС синдрома и сопутствующей кровоточивости. Большая опухолевая масса, особенно в период цитостатической терапии, сопровождается распадом клеток вследствие чего в крови (моче) повышается уровень мочевой кислоты и уратов. Инфильтрация опухолевыми клетками селезенки сопровождается быстрым увеличением ее размеров что способствует развитию тяжелых осложнений.

По мере прогрессирования заболевания в опухолевом клоне возникают дополнительные мутации, которые приводят к развитию новых субклонов, обладающих высокой пролиферативной активностью. Появление их указывает на клональную эволюцию заболевания, переход его в терминальную стадию. Опухолевые клетки теряют способность к созреванию. Блок в дифференцировке происходит на стадии бластных клеток (миелобластов, В-лимфобластов, эритробластов, мегакариобластов).

Клиника. В течении ХМЛ можно условно выделить 3 стадии (периода): начальную с незначительными гематологическими признаками, развернутую с выраженной клинико-гематологической симптоматикой и терминальную стадию, характеризующуюся прогрессированием дистрофических изменений.

Начальная стадия. Заболевание чаще развивается постепенно, исподволь и первоначально может клинически ничем не проявляться либо наблюдается потливость, слабость, повышенная утомляемость. Иногда отмечаются "летучие" боли в суставах или тяжесть в левом подреберье в связи с увеличением селезенки. Течение болезни, особенно в отсутствие цитостатической терапии, может быть как медленным, так и прогрессирующим в зависимости от скорости роста опухоли, а также от степени сохранности нормального кроветворения. Ведущее место среди клинических симптомов занимает спленомегалия как следствие миелоиднои метаплазии (инфильтрации) селезенки.

Развернутая стадия ХМЛ характеризуется прогрессированием болезни увеличиваются размеры селезенки, позже печени, иногда лимфатических узлов, нарастает выраженность астенического синдрома. Спустя 1—1,5 года развивается анемия, могут присоединяться интеркуррентные заболевания, например пневмония, при прогрессировании процесса может возникнуть ДВС-синдром. Возможна гиперурикемия и гиперурикозурия. Лейкозная инфильтрация может наблюдаться в любом органе, в частности в легком, коже (лейкемиды) и др.

Терминальная стадия ХМЛ характеризуется внезапным появлением новых проявлений болезни в виде быстрого увеличения размеров селезенки, приводящего к периспле-ниту или инфаркту, болей в костях, лихорадки, резкой потливости, слюнотечения, увеличения лимфатических узлов (с трансформацией в гематосаркому). Нарастают интоксикация и дистрофические изменения в органах, кахексия.

Лабораторная диагностика. Костный мозг при ХМЛ вначале заболевания гиперклеточный, соотношение лейко/эритро может достигать 10:1 (норма 3—4:1) при нормальном или относительном снижении количества эритрокариоцитов. Увеличение миелокариоцитов происходит главным образом за счет незрелых и зрелых форм гранулоцитов. Количество бластных клеток не превышает 5%. Изредка в начальной стадии заболевания обнаруживается эритробластоз костного мозга достигая 30—50% всех миелокариоцитов. Эритрокариоциты при этом характеризуются выраженными морфологическими аномалиями и повышенным содержанием ШИК-положительного вещества, что свидетельствует о развитии неэффективного эритропоэза. Наличие эритробластоза в костном мозге дает некоторым авторам основание выделять эритроидный вариант ХМЛ.

В начале заболевания приблизительно у 1/3 больных ХМЛ наблюдается гиперплазия мегакариоцитов костного мозга с относительно невысоким тромбоцитозом крови.

В начальной стадии заболевание чаще сопровождается сублеикемическим нейтрофильным лейкоцитозом со сдвигом до миелоцитов. При тщательном просмотре могут обнаруживаться единичные бласты. Частым симптомом является увеличение количества базофилов и/или эозинофилов. Эритроцитопения и снижение уровня гемоглобина в на чальной стадии, как правило, не наблюдаются. Обычно в этой стадии ХМЛ количество тромбоцитов в крови нормальное. Однако приблизительно у 30% больных может отмечаться тромбоцитоз, который иногда достигает 1,5 млн/ мкл. Редко ХМЛ дебютирует с бластного криза.

В развернутой стадии ХМЛ костный мозг гиперклеточный, соотношение лейко/эритро достигает 20:1 и более в результате увеличения количества гранулоцитов. Число незрелых форм увеличивается, что постепенно сопровождается уменьшением содержания зрелых гранулоцитов и свидетельствует о нарушении клеточного созревания. По мере развития заболевания уменьшается количество эритрокариоцитов, абсолютное их уменьшение приводит к анемии. Содержание мегакариоцитов чаще бывает нормальное. Однако в тех случаях, когда в начале заболевания в костном мозге имел место гипермегакариоцитоз, последний может сохраняться довольно продолжительное время. Иногда в развернутой стадии лейкоза отмечается уменьшение количества мегакариоцитов.

Основные показатели гемограммы в динамике развития лейкоза характеризуются нарастающим лейкоцитозом, увеличением незрелых и уменьшением числа зрелых гранулоцитов в основном за счет сегментоядерных нейтрофилов, увеличением количества эозинофилов и/или базофилов. Значительное их увеличение наблюдается редко. Количество бластных клеток может варьировать от 5 до 10%.

Лейкозные гранулоциты характеризуются аномальными морфологическими признаками, свойственными опухолевым клеткам: анизоцитозом, полиморфизмом, особенно миелоцитов и метамиелоцитов, атипичными формами. Почти постоянным признаком является нарушение гранулогенеза: в клетках обнаруживаются грубая грануляция, снижение специфической зернистости, иногда последняя отсутствует Довольно частый признак — асинхронное созревание ядра и цитоплазмы, которое проявляется базофилией цитоплазмы, возникают дистрофические изменения в клетках (вакуолизация ядра и цитоплазмы). Отмечается полиморфизм ядер (анизоцитоз, анизохромия, увеличение площади ядра, дегенеративные изменения ядер — гипосегментация (по типу аномалии Пельгера) или гиперсегментация.

Цитохимические особенности лейкозных нейтрофилов: низкие показатели активности щелочной фосфатазы и миелопероксидазы, ШИК-положительной реакции и концен трации липидов.

Анемия при ХМЛ в отсутствие кровотечения носит нормо- или гиперхромный характер и чаще развивается на 8 — 12 м месяце болезни. В случае развития в более ранние сроки нельзя исключить аутоиммунное ее происхождение. Развитие метапластической анемии и недостаточности костномозгового кроветворения сопровождается снижением уровня гемоглобина (менее 110 г/л). В мазках крови обнаруживается анизоцитоз и макроцитоз эритроцитов, встречаются единичные ядросодержащие эритроциты. Количество ретикулоцитов нормальное или пониженное.

По мере течения болезни количество тромбоцитов по степенно уменьшается (менее 100,0 • 10⁹/л), но тромбоцитопения в развернутой стадии наблюдается редко при появлении в крови аутоантител к тромбоцитам (аутоиммунная тромбоцитопения). Патология тромбоцитов характеризуется анизоцитозом (макро, микро, гигантскими) и уродливыми формами (пойкилоцитоз), нарушением гранулогенеза. В мазках обнаруживается выраженная агрегация тромбоцитов, встречаются фргаменты ядер мегакариоцитов.

Обострение ХМЛ (стадия акселерации) характеризуется появлением предвестников бластного криза, симптомов, указывающих на прогрессию лейкоза. В клинической картине отмечается ухудшение общего состояния больных, появление лихорадки, увеличение размеров селезенки, печени, развитие экстрамедуллярных очагов кроветворения, например в лимфатических узлах.

В крови обнаруживается увеличение количества лейкоцитов, снижение уровня гемоглобина, содержания эритроцитов и тромбоцитов, резкое увеличение незрелых форм гранулоцитов и бластов, снижение зрелых нейтрофилов. Возможно увеличение содержания эозинофилов и базофилов, в том числе незрелых клеток этого ряда. Наблюдаются признаки дисгранулоцитопоэза.

Костный мозг гиперклеточный, с выраженными морфологическими признаками дисгранулоцитопоэза, дисэритропоэза, количество бластных клеток достигает 15—30%.

В терминальной стадии наиболее часто развивается бластныи криз который характеризуется нарастанием количества бластных клеток в костном мозге и крови (более 30%). Содержание бластов в костном мозге может варьировать от 15 до 99% соответственно резко снижается количество элементов грануло-, эритро- и тромбоцитопоэза. Этим изменениям сопутствуют анемия, тромбоцитопения и нейтропения. Бластный криз, клеточный субстрат которого отличается полиморфизмом, характеризуется нарушением дифференцировки клеток, появлением разных форм бластов имеющих признаки морфологической и химической анаплазии: анизоцитоз выраженный полиморфизм размеров и формы ядер клеток, появление уродливых форм, фрагментация и сегментация ядер.

В редких случаях в терминальной стадии возможна бластная трансформация по типу гематосаркомы в лимфатических узлах и селезенке.

Для идентификации бластных клеток и/или для суждения о гетеро- или гомогенности клеточной популяции используются дополнительные цитохимические методы и иммунофенотипирование опухолевых клеток.

Эозинофильныи вариант миелолейкоза характеризуется преобладанием преимущественно зрелых эозинофилов при отсутствии или малом количестве незрелых форм. Однако иногда возможно большое число эозинофильных миелоцитов.

Базофильный вариант миелолейкоза определяется преобладанием базофилов в клеточном субстрате.

Ph-негативный вариант ХМЛ составляет 5—8% всех случаев ХМЛ. Характеризуется быстрым развитием выраженным фиброзом в костном мозге и тенденцией к анемии и тромбоцитопении.

Клиническая картина представлена менее выраженной спленомегалией, чем при Ph- позитивном ХМЛ, отличается неблагоприятным течением.

Костный мозг при Ph-негативном варианте ХМЛ гиперклеточный, увеличено содержание бластных клеток (до 30%), незрелых гранулоцитов, эозинофилов, базофилов, моноцитов. Количество мегакариоцитов у 30% больных снижено.

В периферической крови отмечается умеренный лейкоцитоз с увеличением количества зрелых и незрелых форм нейтрофилов. Эозинофилия и базофилия встречаются реже, а моноцитоз — чаще, чем при Ph-позитивном ХМЛ.

Исходы ХМЛ: наиболее часто болезнь завершается бластным кризом, миелофиброзом либо гематосаркомой.

Сублейкемический миелоз. Сублейкемический миелоз (миелофиброз, остеомиелофиброз) — опухоль миелоидной ткани в основе которой лежит трехростковая пролиферация миелоидных элементов и соединительной ткани. При миелофиброзе опухолевая трансформация происходит на уровне стволовой кроветворной клетки или клетки предшественницы миелопоэза.

Вариабельность патоморфологических изменений болезни привела к множеству ее названий — до 47 (И. А. Кассирский). Однако, исходя из клинико-гематологической и патоморфологической ее сущности эту болезнь правильнее всего классифицировать как хронический сублейкемический миелоз, хотя длительное время (с 1914 г.) существовал термин алейкемический миелоз (Hirchfeld).

Морфологический субстрат заболевания составляют клетки грануло-, эритро-, тромбоцитопоэза.

Патогенез. Заболевание характеризуется нарушением костномозгового кроветворения которое проявляется гиперплазией миелокариоцитов, замещением жирового костного мозга и появлением неоднородных очагов фиброза. Развитие миелофиброза происходит в различных костях скелета и распространяется на все кости. Возможна редукция гемопоэза в плоских костях. В трубчатых костях, селезенке и печени кроветворение может наблюдаться в разном объеме. Опухолевая пролиферация касается преимущественно гранулоцитарного и мегакариоцитарного ростков кроветворения, что сопровождается развитием лейкоцитоза и тромбоцитоза. Анемия при миелофиброзе является следствием неэффективного эритропоэза, аутоиммунного гемолиза эритроцитов, редукции эритропоэза или недостаточности костномозгового кроветворения. Иногда отмечается активация эритропоэза.

В костном мозге наряду с выраженной клеточной гиперплазией наблюдается пролиферация фибробластов, ретикулярных клеток и волокон. По мере развития болезни количество фиброзной ткани увеличивается с последующим превращением ее в склеротические тяжи. В местах сохранного костномозгового кроветворения имеются очаги клеточной пролиферации с резким увеличением количества мегакариоцитов. Степень фиброза варьирует, он может иметь очаговый или диффузный характер. При развитии интенсивного фиброза в костном мозге уменьшается количество миелокариоцитов, фиброзная ткань заполняет межбалочные пространства.

Патогенетические механизмы развития фиброза при сублейкемическом миелозе достаточно сложны. Его возникновение связывают с воздействием факторов роста секретируемых мегакариоцитами и тромбоцитами (PDGF, TGF), которые вызывают пролиферацию фибробластов костного мозга и синтез ими коллагена. Кроме того мегакариоциты продуцируют IV фактор, ингибирующий активность коллагеназы, тем самым способствуя накоплению коллагена и развитию фиброза. Рассматриваются также аутоиммунные механизмы формирования фиброза в костном мозге. Молекулярно-генетическими исследованиями доказана неопухолевая природа фибробластов костного мозга.

Сублейкемический (алейкемический) характер лейкоза объясняют нарушением координации между костной и кроветворной тканью и элиминации лейкоцитов на периферию вследствие развития фиброза.

Помимо лейкозной трансформации кроветворной ткани, заболевание характеризуется наличием лейкозной инфильтрации в других органах и в первую очередь в селезенке, а также в лимфатических узлах и печени, дисплазией костной ткани в виде патологического костеобразования. Увеличение кроветворных органов происходит не только в результате миелоидной метаплазии, но и вследствие разрастания в них фиброзной ткани.

Клиника. Заболевание встречается чаще в пожилом возрасте. Сублейкемический миелоз проходит те же стадии развития, что и ХМЛ. Преобладает доброкачественное многолетнее течение болезни с медленным увеличением размеров селезенки.

Основные симптомы болезни:

• спленомегалия при сублейкемической (алейкемической) картине крови;

• миелофиброз или остеомиелофиброз костного мозга;

• миелоидная метаплазия селезенки, печени, редко лимфатических узлов;

Начальная стадия отличается скудностью симптомов, из которых наиболее частым и ранним является спленомегалия, возникающая в результате трехростковой миелоидной метаплазии.

Развернутая стадия. Прогрессирование заболевания сопровождается увеличением количества лейкоцитов, размеров селезенки, последние могут быть значительными. Обычно в процесс метаплазии помимо селезенки вовлекается печень, что приводит к гепатомегалии у 40% больных. Очаги экстрамедуллярного кроветворения обнаруживаются в различных органах.

Развитие анемии является следствием недостаточности костномозгового кроветворения. Тромбоцитопения приводит к появлению геморрагического синдрома в виде кровотечений, чаще в желудочно-кишечный тракт. Возможно присоединение интеркуррентных инфекций вирусной и бактериальной этиологии. При миелофиброзе описаны различные аутоиммунные заболевания, в том числе аутоиммунная гемолитическая анемия Заболевание может осложниться развитием тромбозов, ДВС синдрома.

Костный мозг. В зависимости от преобладания одно-, двух- или трехросткового поражения кроветворения и миелофиброза в костном мозге наблюдается большая вариабельность изменений гематологических показателей. Возможна первичная пролиферация мегакариоцитарного ростка, нередко гиперплазия трех ростков — панмиелоз.

В ранние сроки заболевания клеточность костного мозга варьирует в зависимости от степени гиперплазии преимущественно клеток гранулоцитарного и эритроидного ряда. Соотношение лейко/эритро колеблется в основном за счет клеток лейкопоэза. В миелограмме имеет место увеличение количества незрелых и зрелых гранулоцитов. Содержание эритрокариоцитов может быть в пределах нормы или незначительно увеличено. Количество мегакариоцитов обычно сохранено.

В периферической крови длительное время могут сохраняться нормальные показатели количества лейкоцитов, но чаще бывает небольшой лейкоцитоз (10,0—20,0 х 10⁹/л), реже — гиперлейкоцитоз, возможна лейкопения. Изменения в лейкограмме, особенно в ранний период болезни, незначительные, иногда имеется сдвиг до миелоцитов, отмечаются анизоцитоз нейтрофилов, асинхронное созревание ядра и цитоплазмы, нарушение гранулогенеза в нейтрофилах и конденсация хроматина ядер, а также гипо- и гиперсегментированные нейтрофилы. Прогрессирование лейкоза сопровождается нарастанием числа лейкоцитов со сдвигом до промиелоцитов и миелобластов. В клетках ней-трофильного ряда наблюдается высокая активность щелочной фосфатазы и концентрация ШИК-положительного вещества.

У большинства больных имеется нормохромная или гиперхромная анемия. В мазках крови обнаруживают анизоцитоз, пойкилоцитоз, нормобласты, невысокий ретикулоцитоз.

Количество тромбоцитов может быть нормальным или повышенным. Тромбоцитоз, часто выявляемый в начальной стадии заболевания (400—600 • 10⁹/л), по мере развития лейкоза имеет тенденцию к росту, достигая в крови 1 млн и более, держится долго и может являться причиной нарушений гемостаза. Вследствие фиброзных изменений в костном мозге происходит постепенное уменьшение количества тромбоцитов до нормальных показателей и развитие тромбоцитопении.

Морфология тромбоцитов характеризуется большим разнообразием: анизоцитозом преимущественно с тенденцией к появлению макро- и гигантских форм, уродливыми пластинками в результате нарушения деления цитоплазмы мегакариоцитов и нарушения гранулогенеза.

В крови и моче возможно повышение уровня мочевой кислоты и уратов, особенно в период цитостатической или лучевой терапии.

Терминальная стадия миелофиброза характеризуется увеличением количества лейкоцитов, незрелых гранулоцитов, бластов, реже выявляется эритробластемия. Иногда как следствие фиброза и остеосклероза костного мозга, заболевание завершается развитием аплазии костного мозга, которая сопровождается лейкопенией, эритроцитопенией и тромбоцитопенией.

Исходом миелофиброза могут быть бластный криз по типу острого миелолейкоза, острого миеломоноцитарного лейкоза, острого мегакариобластного лейкоза, аплазия кроветворения, трансформация в ХМЛ либо развитие гематосаркомы селезенки и лимфатических узлов.

Эритремия. Эритремия (истинная полицитемия, болезнь Вакеза—Ослера) — клональная опухоль миелоидной ткани, субстратом которой преимущественно являются эритрокариоциты. Эритремия развивается в результате опухолевой трансформации как эритроидных предшественников на уровне бурстобразующей единицы (БОЕ-Э), так и клеток предшественников миелопоэза с той лишь разницей, что в последнем варианте гемопоэз характеризуется большей вариабельностью, так как, помимо эритропоэза, в опухолевый процесс возможно вовлечение грануло- и мегакариоцитопоэза.

Патогенез. В костном мозге наблюдается тотальная гиперплазия трех ростков миелопоэза, преимущественно эритрокариоцитов. Клеточные элементы сохраняют способность к дифференцировке и созреванию. Накопление опухолевой массы приводит к увеличению количества эритроцитов как в сосудистом русле, так и в синусах костного мозга, селезенке и других органах, вызывает нарушение реологии крови и как следствие гипоксию тканей и тромботические осложнения. Эритремии свойственна определенная стадийность процесса. В результате несостоятельности костномозгового кроветворения болезнь сопровождается резкими патоморфологическими изменениями. В основе их лежат смена гиперпластической стадии на гипопластическую, постепенное снижение пролиферативной активности клеток 1, 2 или 3 ростков с развитием анемии, тромбоцитопе-нии или нейтропении. Патогенез анемии при эритремии различен, она может развиться вследствие кровопотерь (дефицит железа), неэффективного эритропоэза, выраженного миелофиброза, гипоплазии, аутоиммунного гемолиза и под влиянием других факторов. Следует отметить, что содержание эритропоэтина в сыворотке крови больных остается в пределах нормы или снижено.

В кроветворных органах обнаруживается фиброз, распространенность которого со временем увеличивается. В исходе болезни костный мозг может оказаться фиброзно-перерожденным с редуцированным гемопоэзом или с выраженной гиперплазией гранулоцитов по типу ХМЛ. В селезенке и печени наблюдаются полнокровие, миелоидная ин фильтрация (метаплазия).

Клиника. Заболевание встречается преимущественно у лиц пожилого возраста. Клиническая симптоматика развивается постепенно, в зависимости от стадии, длительности течения заболевания и сопутствующих осложнений.

В начальной стадии болезни обычно имеются симптомы астении, затем присоединяются симптомы, обусловленные повышенной нагрузкой на сердечно-сосудистую систему (боли в области сердца, одышка, сердцебиение). Отмечается цианоз кожных покровов и слизистых оболочек, нередко кровоточивость десен.

Развернутая — эритремическая стадия — более продолжительная по времени, характеризуется миелоидной метаплазией селезенки, которая может наблюдаться в разные сроки болезни, и в меньшей мере гепатомегалией. На этой стадии заболевания возможны тромботические осложнения, чаще проявляющиеся образованием флеботромбозов. Не редко развиваются эритромелалгии — изменения трофики тканей голеней, сопровождающиеся сильными постоянны ми болями в ногах. Нарушается обмен мочевой кислоты с развитием гиперурикемии и урикозурии.

В период миелоидной метаплазии селезенки и развития миелосклероза эритремическая стадия сменяется на анемическую. Возможно присоединение геморрагического синдрома и интеркуррентных инфекций.

Костный мозг. Стернальная пункция при эритремии не имеет большого диагностического значения, так как пунктат обычно содержит преимущественно эритроциты. Более информативно исследование материала, полученного с помощью трепанобиопсии, которая позволяет выявить гиперплазию красного ростка, уменьшение лейко-эритробласти-ческого соотношения, увеличение количества мегакариоцитов и различной степени выраженности фиброз.

Основные гематологические показатели заболевания

• увеличение массы эритроцитов,

• увеличение концентрации гемоглобина,

• повышение гематокрита (Ht),

• повышение вязкости крови (ВК),

• низкая СОЭ,

• нарушение ретракции кровяного сгустка.

При нарастании клеточной массы в кровяном русле (сосудистых депо) Ht достигает 60—85%, а ВК может составлять 8—16 ед и более, характерна низкая СОЭ (до 4 мм/ч и ниже). Концентрация гемоглобина и количество эритроцитов обычно варьируют, но как правило повышение происходит постепенно и может достигать соответственно 170 г/л и 6—7 х 10¹²/л и более. В ранний период более возможен тромбоцитоз (500 х 10⁹/л и выше). Лейкоцитоз с нейтрофильным сдвигом чаще наблюдается в развернутой стадии заболевания при появлении миелоидной метаплазии селезенки. В этот период лейкоцитоз может достигать 15 - 20 х 10⁹/л со сдвигом до миелоцитов реже миелобластов и незначительной эритробластемией.

Морфология нейтрофильных лейкоцитов в начальной и развернутой стадиях заболевания мало отличается от нормальной. Цитохимические показатели, такие как активность щелочной фосфатазы и ШИК реакция в нейтрофилах, высокие по сравнению с нормой. Количество ШИК положительных нейтрофилов увеличивается по мере прогрессирования эритремии. Морфологические и цитохимические изменения нейтрофилов в виде анизоцитоза, полиморфизма ядер, грубой зернистости, а также снижения концентрации гликогена и активности щелочной фосфатазы и пероксидазы в нейтрофилах отмечаются преимущественно при миелоидной метаплазии селезенки, трансформации эритремии в хронический или острый миелолейкоз. По мере прогрессирования заболевания пролиферативная активность эритрокардиоцитов снижается. Прослеживается постепенная тенденция к уменьшению количества эритроцитов и гемоглобина до нормальных показателей с последующим развитием нормо или гиперхромной анемии.

Терминальная стадия характеризуется наличием в клинической картине осложнений, связанных с поражением органов и сосудов: цирроза печени, тромбоза сосудов головного мозга, коронарных сосудов. Эритремия может завершиться развитием бластного криза. Наиболее часто бластные клетки представлены миелобластами, недифференцированными бластами, эритробластами.

Исходом эритремии могут быть гематосаркома ХМЛ гипоплазия кроветворения и миелофиброз.

Хронический лимфолейкоз. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) относится к опухолям, первично возникающим в костном мозге в результате опухолевой трансформации чаще В-лимфоцитов, реже Т-лимфоцитов и последующей их моноклональной пролиферацией.

ХЛЛ впервые описан в 1845 году, а в середине 60-х гг. охарактеризован Gallon и Dameshek как заболевание, сопровождающееся пролиферацией аномальных лимфоцитов. ХЛЛ составляет 30% всех регистрируемых случаев лейкозов в Европе и Америке, значительно реже выявляется в Азии. Частота встречаемости заболевания - 2,7-3,0 на 100 тысяч населения. Болеют в основном лица старше 50 лет, мужчины в два раза чаще, чем женщины. В детском и юношеском возрасте заболевание встречается крайне редко. Заболеваемость ХЛЛ наблюдается в 2 раза чаще у представителей белой расы, чем негроидной.

Большинство случаев ХЛЛ составляет В-клеточная форма (95%). На долю Т-клеточной формы приходится около 5% от всех наблюдений ХЛЛ, в основном регистрируемых в странах Азии.

Среди этиологических факторов рассматривается воздействие химических веществ, вирусов. Доказана роль человеческого Т-клеточного вируса I типа (HTLV-I) в развитии Т-клеточного варианта ХЛЛ.

Патогенез. Опухолевая трансформация происходит на уровне ранних В-лимфоцитов с последующим блоком их дальнейшей дифференцировке и пролиферацией клона опухолевых клеток. Лимфоидные элементы при ХЛЛ как бы «заморожены» на данном этапе дифференцировки и вся лейкозная популяция является практически мономорфной. Накопление опухолевых клеток связано с нарушением процессов регуляции программированной клеточной смерти (апоптоза). В экспериментальных работах доказана сверхэкспрессия генов семейства Bcl-2 в опухолевых В-лимфоцитах, блокирующих апоптоз, что способствует удлинению продолжительности жизни этих клеток. ХЛЛ относится к медленно прогрессирующим заболеваниям. Опухоль постепенно вытесняет нормальные гемопоэтические клетки, что со временем приводит к развитию недостаточности костномозгового кроветворения. Пролиферация опухолевых В-лимфоцитов в костном мозге, лимфатических узлах, селезенке, реже в других органах (кожа, желудочно-кишечный тракт, почки, легкие и др.) обуславливает клиническую картину заболевания.

Клиника. На протяжении нескольких лет заболевание протекает бессимптомно. Лишь выявление абсолютного лимфоцитоза при исследовании клеточного состава периферической крови может привлечь внимание врача. Заболевание сопровождается общими для многих злокачественных опухолей неспецифическими симптомами - слабостью, быстрой утомляемостью, повышенным потоотделением, потерей массы тела, связанными с опухолевой интоксикацией.

По мере нарастания опухолевой массы отмечается постепенное увеличение лимфатических узлов: в первую очередь шейных и подмышечных. В последующем процесс может распространиться практически на любую группу лимфоузлов. Пораженные лимфатические узлы при ХЛЛ безболезненны, не имеют местной кожной гиперемии, эластичные, подвижные, не спаяны с кожей. Внезапный рост лимфатического узла, изменение его консистенции («деревянной плотности») требует цитологического исследования с целью возможного выявления трансформации ХЛЛ в лимфосаркому. Увеличение лимфатических узлов при ХЛЛ обычно происходит медленно, но со временем их увеличение может приводить к сдавлению близлежащих органов и нарушению их функции. По мере прогрессирования процесса выявляется гепатоспленомегалия.

Для больных ХЛЛ характерна повышенная восприимчивость к инфекции вследствие нарушений в системе клеточного и гуморального иммунитета. Наиболее часто встречаются бактериальные и вирусные инфекции со стороны дыхательной и мочевыводящей систем, вызванные стафилококками, стрептококками, различными грамнегативными микроорганизмами. В развернутой стадии заболевания могут наблюдаться инфекции, вызванные Candida и Aspergillus, а также вирусом герпеса и цитомегаловирусом.

Дефект противоопухолевого иммунитета является причиной повышенной склонности больных ХЛЛ к развитию вторичных опухолей. Наиболее часто при ХЛЛ встречается рак кожи и кишечника.

Существуют различные клинические классификации ХЛЛ. В зависимости от локализации опухоли, особенностей течения заболевания в классификации, предложенной А.И. Воробьевым и М.Д. Бриллиант (1985 г., с изменениями и дополнениями 1999 г.), выделено несколько форм ХЛЛ - доброкачественная, прогрессирующая, опухолевая, селезеночная, абдоминальная, костномозговая. Согласно классификации, предложенной Rai К. с соавт., выделяют 5 стадий болезни.

Таблица 2. Классификация ХЛЛ (Rai, 1975)
Стадия	Характеристика	Группа риска	Медиана выживаемости
	Лимфоцитоз в крови (>15x109/л) и костном мозге (>40%)	Низкая	Более 10 лет
I	Лимфоцитоз и лимфаденопатия	Промежуточная	9 лет
II	Лимфоцитоз, сплено-и/или гепатомегалия, +/- лимфаденопатия	Промежуточная	6 лет
III	Лимфоцитоз и анемия (НЬ<100г/л), +/-лимфаденопатия, гепатоспленомегалия	Высокая	Менее 3 лет
IV	Лимфоцитоз, тромбоцитопения (<100х109/л ) независимо от увеличения лимфатических узлов и органов	Высокая

Классификация Binet J. с соавт. предусматривает 3 стадии ХЛЛ, обозначаемые буквами А, В и С, которые коррелируют со средней продолжительностью жизни больных.

А. Помимо предусмотренного диагнозом лимфоцитоза крови и костного мозга, имеется одностороннее или двухстороннее увеличение лимфатических узлов в 1-2 областях, анемия и тромбоцитопения отсутствуют.

В. Увеличение лимфатических узлов в 3 областях и более. Анемия и тромбоцитопения отсутствуют.

С. Независимо от количества зон с увеличением лимфатических узлов и наличия увеличения органов имеется анемия и тромбоцитопения.

Таблица 3. Классификация ХЛЛ (Binet J., 1981)
Стадия	Характеристика	Выживаемость
А	Гемоглобин >100г/л; тромбоциты > 100,0х109/л; менее 3 групп лимфатических узлов вовлечены в процесс	Более 10 лет
В	Гемоглобин >100г/л; тромбоциты > 100,0х109/л; более 3 групп лимфатических узлов вовлечены в процесс	5 лет
С	Гемоглобин <100 г/л и/или тромбоциты < 100,0х109/л	2 года

Лабораторная диагностика

В зависимости от стадии заболевания костный мозг может быть нормо- или гиперклеточным. Процент лимфоцитов в стернальном пунктате колеблется в широких пределах от 20-30% вплоть до тотальной мономорфной лимфоидной инфильтрации. По данным трепанобиопсии поражение костного мозга носит очаговый или диффузный характер. Независимо от стадии заболевания диффузная инфильтрация костного мозга лимфоидными клетками сочетается с малой продолжительностью жизни больных (менее 43 мес.) по сравнению с очаговой инфильтрацией (100 мес.).

В начальной стадии заболевания картина периферической крови обычно представлена нормальным или незначительно повышенным количеством лейкоцитов. Как правило, анемия и тромбоцитопения отсутствуют. Основным гематологическим показателем при ХЛЛ является абсолютный лимфоцитоз.

Согласно рекомендациям экспертов ФАБ группы диагноз ХЛЛ считается установленным при абсолютном количестве лимфоцитов в крови, превышающем 10х10⁹/л, наличии более 30% лимфоцитов в костном мозге и иммунологическом подтверждении существования В-клеточного клона лейкемических клеток.

Имеет место относительная или абсолютная нейтропения. Лимфоциты периферической крови при ХЛЛ характеризуются небольшими размерами (7-10 мкм), округлым ядром, грубым, тяжистым распределением хроматина, отсутствием нуклеол, узкой, базофильного цвета, цитоплазмой. Встречаются клетки цитолиза.

В развернутой стадии заболевания нарастает лейкоцитоз, относительный и абсолютный лимфоцитоз, нейтропения, наблюдается нормохромная анемия и/или тромбоцитопения. В лейкоцитарной формуле пролимфоциты составляют менее 10%, встречаются при просмотре препарата лимфобласты.

Обнаружение лимфоцитов с расщепленными, перекрученными, неправильной формой ядрами, грубой тяжистой или волокнистой структурой хроматина свидетельствует о возможной лейкемизации лимфосаркомы или Т-клеточном варианте ХЛЛ. В периферической крови могут обнаруживаться единичные миелоциты и метамиелоциты, обычно на фоне инфекционных заболеваний, а также нормобласты.

Примерно у 15% больных ХЛЛ наблюдается развитие аутоиммунной гемолитической анемии, реже тромбоцитопении за счет образования аутоантител к эритроцитам или эритрокариоцитам костного мозга, тромбоцитам. Развитие анемии сопровождается раздражением красного ростка в костном мозге, ретикулоцитозом, появлением нормобластов в периферической крови, повышением содержания неконъюгированного (непрямого) билирубина в сыворотке крови. Аутоиммунный генез анемии подтверждается положительной прямой пробой Кумбса и другими тестами, выявляющими аутоантитела.

Цитограмма лимфатических узлов (ЛУ) при ХЛЛ характеризуется пролиферацией мономорфной популяции морфологически зрелых лимфоцитов. Подобная цитограмма ЛУ наблюдается при лимфоцитарной (зрелоклеточной) лимфосаркоме (лимфоме из малых лимфоцитов), но при этом, в отличие от ХЛЛ, отсутствуют изменения в периферической крови. В то же время, при лейкемизации лимфоцитарной лимфосаркомы картина крови, костного мозга и цитограмма лимфатических узлов аналогичны ХЛЛ.

Морфологический субстрат и иммунологический фенотип лимфоцитов идентичен при ХЛЛ и лимфоцитарной лимфосаркоме, поэтому высказывается точка зрения о различных проявлениях одного и того же опухолевого процесса.

Иммунологический фенотип. В 95% случаев ХЛЛ имеет В-клеточный иммунологический фенотип с экспрессией поверхностных В-клеточных антигенов CD 19, CD20, CD24, CD79a и активационных антигенов CD5, CD23, CD43. Экспрессия CD5 считается обязательной для иммунологического подтверждения В-ХЛЛ. Однако описаны редкие наблюдения ХЛЛ (7%>) с отсутствием CD5 на В-лимфоцитах. CD23 используют для дифференциальной диагностики В-ХЛЛ и лейкемизации лимфомы из клеток зоны мантии лимфатического узла, имеющей аналогичный В-ХЛЛ иммунофенотип, но без экспрессии CD23. Для ХЛЛ в отличие от нормальных В-лимфоцитов и лимфосарком характерна слабая экспрессия поверхностных иммуноглобулинов (чаще sIgM, реже IgM +IgD с одинаковыми легкими цепями).

Практически у всех больных наблюдается гипогаммаглобулинемия со снижением концентрации нормальных иммуноглобулинов (IgM, IgG, IgA), что отражает нарушение гуморального иммунитета и повышает чувствительность больных ХЛЛ к инфекциям. При использовании современных методов электрофореза можно обнаружить белок Бенс-Джонса в моче, значительно реже встречается моноклональный иммуноглобулин в сыворотке крови.

Цитогенетика. У 50-60% больных ХЛЛ обнаруживают клональные хромосомные аберрации, наиболее часто - трисомия 12, структурные дефекты в 13, 14 хромосомах. Изучение цитогенетических особенностей клеток имеет прогностическое значение. Средняя продолжительность жизни больных с хромосомными аномалиями значительно короче (7,7 лет), чем без таковых (до 15 лет).

Прогноз. ХЛЛ является достаточно медленнотекущим заболеванием. Средняя продолжительность жизни составляет около 10 лет.

Исход ХЛЛ. Наиболее часто встречается трансформация ХЛЛ в пролимфоцитарныи лейкоз, что характеризуется нарастанием лейкоцитоза, числа пролимфоцитов, анемии и тромбоцитопении. Эти изменения сопровождаются резкой лимфаденопатией, спленомегалией, развитием рефрактерности к проводимой терапии.

В 3-10% случаев наблюдается синдром Рихтера (крупноклеточная анапластическая лимфосаркома). Он характеризуется ухудшением общего состояния больных, развитием общих симптомов, таких как лихорадка, потеря веса, потливость, генерализацией экстрамедуллярного опухолевого процесса с резким увеличением лимфатических узлов и/или экстранодальной локализацией очагов опухолевого роста. Возможна трансформация ХЛЛ в острый лейкоз (чаще острый лимфобластный лейкоз, L2 вариант), реже в миеломную болезнь.

Литература.

1. Руководство по гематологии (под ред. Воробьева А.И.) – М.: Медицина, 1985 г, в 2-х томах.

2. Исследование системы крови в клинической практике (под ред. Г.И. Козинца и В.А. Макарова). – М.: Триада – Х, 1997 г. – 480 с.

3. Клиническая лабораторная аналитика (под ред. В.В.Меньшикова) – М.: Лабинформ – РАМЛД, 1999 г. – 2 т.

4. Фред Дж. Шиффман Патофизиология крови – М. – СПб.: «Издательство БИНОМ» – «Невский Диалект», 2000 г.-448 с.

5. Вуд М., Банн П. Секреты гематологии и онкологии. – М.: «Издательство Бином», 1997 г. –560 с.

6. Долгов В.В., Луговская С.А., Почтарь М.Е., Шевченко Н.Г. Лабораторная диагностика нарушений обмена железа. – М., РМАПО, 1996 г. – 42 c.

7. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е. Лабораторная диагностика лейкозов. - М., РМАПО, 1999 г. – 80 c.