ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 5
Тема: Чувствительность возбудителей заболеваний человека к антимикробным препаратам
Цель: Провести качественную и количественную оценку чувствительности возбудителей заболеваний человека к антимикробным препаратам. Изучить методы культивирования анаэробных микроорганизмов. Дать характеристику методам выделения, идентификации и титрования вирусов.
Знать:
1. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
2. Минимальная подавляющая концентрация, методы определения
3. Способы выделения и условия культивирования анаэробных микроорганизмов
4. Методы фаготипирования и фагодифференцировки бактерий
5. Принципы применения препаратов бактериофагов для лечения и профилактики инфекционных заболеваний
Уметь:
1. Определить чувствительность возбудителей к антибиотикам разными методами
2. Определить МПК антибиотиков
3. Выявить наличие антибиотиков в биологических жидкостях
4. Взять материал при подозрении на анаэробную инфекцию, подобрать среды и осуществить культивирование анаэробов
5. Провести фаготипирование возбудителя
6. Правильно назначить препараты содержащие бактериофаги для профилактики и лечения бактериальных инфекций
Контрольные вопросы:
1. Принципы рациональной антибиотикотерапии
2. Механизмы формирования устойчивости к антибиотикам, пути преодоления
3. Методы определения чувствительности возбудителей заболеваний к антибиотикам
4. Минимальная подавляющая концентрация, методы определения
5. Методы определения концентрации антибиотиков в биологических жидкостях
6. Создание условий для культивирования анаэробных микроорганизмов
7. Среды для культивирования анаэробов
8. Строение и основные морфологические типы бактериофагов
9. Свойства бактериофагов
10. Этапы взаимодействия вирулентного бактериофага с чувствительной бактериальной клеткой
11. Этапы взаимодействия умеренного бактериофага с чувствительной бактериальной клеткой
12. Лизогенизация, профаг, лизогения (фаговая) конверсия и ее примеры
13. Феномен роста бактериофагов в жидкой и на плотной средах
14. Качественные пробы для выявления присутствия бактериофага
15. Способы титрования бактериофагов
16. Фаготипирование и фагодифференцировка
17. Фаготерапия и фагопрофилактика
I. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений
Метод используют для определения минимальной концентрации антибиотика, ингибирующей рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят ряд последовательных разведений в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 часов. Результаты исследования отмечают по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной подавляющей концентрации (МПК) антибиотика.
Рис. 1. Алгоритм определения чувствительности исследуемой культуры к АБП методом разведений в жидкой питательной среде.
За МПК антибиотика для данного штамма принимают ту концентрацию, при которой отсутствуют признаки роста бактерий в жидкой питательной среде.
Определите МПК антибиотика по рисунку выше __________________________
