Оснащение: флаконы с консервированной кровью
Выполнение манипуляции
1. Проверка герметичности сосуда: сосуд должен быть герметичен, недопустимы даже следы нарушения целостности
2. Проверка информации на этикетке, где должны быть указаны группа крови, резус-фактор, название учреждения-заготовителя, дата заготовки, срок годности, регистрационный номер, фамилия и инициалы донора, фамилия врача, заготовившего кровь, отметка «стерильно», отметка о проверке крови на ВИЧ, HBSAg, гепатит В и С
3. Внешний осмотр крови: кровь должна быть разделена на три слоя: внизу красные эритроциты, выше - узкая серая полоска лейкоцитов и тромбоцитов, над ними - желтая прозрачная плазма
4. Плазма не должна содержать пленок и хлопьев, которые свидетельствуют об инфицированности крови, а также сгустков, которые указывают на свертывание крови
5. Плазма может быть непрозрачной, в случае так называемой хиллезной крови, т.е. Крови, содержащей большое количество нейтральных жиров. При нагревании хиллезной крови до 37 градусов с плазма становится прозрачной, если же кровь инфицирована - остается мутной
6. Признаком непригодности крови является окрашивание плазмы в розовый цвет, всегда указывающий на гемолиз. Существует скрытый гемолиз, вызванный переохлаждением или перегреванием. Для определения скрытого гемолиза кровь во флаконе следует перемешать, часть ее отлить в пробирку (5 мл) и отцентрифугировать. Окрашивание плазмы крови в пробирке в розовый цвет после центрифугирования свидетельствует о скрытом гемолизе
Завершение манипуляции:
Сделать отметку о годности переливаемой крови в протоколе гемотрансфузии.
Составление наборов и определение групповой принадлежности и резус-фактора крови.
Определение групповой принадлежности крови по системе АВО
(Эритротестомтм - цоликлонами Анти – А и Анти – В и Анти – АВ)
Оснащение: цоликлоны Анти – А и Анти – В и Анти – АВ, пипетки для взятия и нанесения сывороток, маркированные белые фаянсовые или стандартные планшеты, стеклянные палочки, 0,9% раствор хлорида натрия, песочные часы на 5 мин.
Эритротесттм - цоликлон Анти – А и Анти – В и Анти – АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10мл. Цоликлон Анти – А – бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.
Срок хранения – 2 года при температуре 2 - 8°. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2 - 8°С в течение месяца в закрытом виде.
Выполнение манипуляции
Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемоагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25°С.
1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти – АВ по одной большой капле (0,1мл) под соответствующими надписями.
2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл).
3. Смешайте кровь с реагентом.
4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3мин. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3 – 5сек, но наблюдение следует вести 3мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице
| Результат реакции* с Цоликлном | Исследуемая кровь принадлежит к группе* | ||
| Анти – А | Анти – В | Анти – АВ | |
| - | - | - | О (I) |
| + | - | + | А (II) |
| - | + | + | В (III) |
| + | + | + | АВ (IV) |
* Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - отсутствие агглютинации.
** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.
Контроль специфичности реакции агглютинации
В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителями. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ (IV)только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
Завершение манипуляции:
1. После определения группы крови необходимо сделать отметку о групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус принадлежности.
2. Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.
3. Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии с СаНПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений»
