Лекція 8-9
ТЕМА: „КУЛЬТУРИ КЛІТИН”
Методика отримання культури клітин
   1 стадія
| 2 стадія | 3 стадія |
  Ізоляція живих клітин із свіжих тканин
| Експлантація клітин | Вирощування клітин | ||
  
| ||||
| 1. Подрібнення тканини 2.Ферментативний гідроліз речовин міжклітинного простору тріпсином для отримання окремих клітин | Висівв спеціальні флакони на рідкі живильні середовища | Проводиться на стінках культуральних флаконів в моношаровій культурі |
Характеристика культур клітин різних видів
В наш час отримують і використовують різні типи культур. Вони можуть походити від ембріональних або пухлинних тканин, тканин нирок, легенів, печінки, тестікул тощо. В основному культуриклітин поділяють на певні групи не за місцем отримання, а за кількістю поділів до загибелі. Вік організму, з якого було взято клітини та їх тип визначає життєздатність клітин.
Орган чи тканина, взяті безпосередньо з макроорганізму
 |  |
| “Старі“ за віком організми | “Молоді“ за віком організми, ембріональні тканини |
| Клітини розвиваються в культурі декілька діб. Пересівів не витримують, гинуть | Термін життя сягає декількох тижнів або місяців. Ростуть при пересівах без втрати біохімічних та морфологічних властивостей. Техніка пересіву: клітини первинної культури знімають зі стінок флакону, промивають і пересівають в свіже поживне середовище. Можлива кількість пересівів 2-5 разів. Є дані, що звичайні клітини витримують 20 пересівів, а ембріональні – 50. | |
 
| ||
| Первинна культура | Вторинна культура, субкультура, клітинна лінія |
Позитивними рисами субкультур є:
ü Можна отримати практично з усіх видів клітин, які використовуються у вірусології (крім курячих фібробластів).
ü Мають таку ж чутливість до вірусів, як і первинні культури.
ü При пересівах виключаються мертві або ненормальні клітини.
Клітинна лінія має клітини з генотипами, які трохи або значно відрізняються від генотипу вихідних клітин.
| Клітинна лінія | ||
  
| ||
| Диплоїдна лінія | Гетероплоїдна лінія | Штам клітин |
| 75% клітин зберігають генотип вихідних клітин | Менше 75% клітин зберігають генотип вихідних клітин | Клітини з однорідним генотипом. Більше 75% клітин зберігають генотип вихідних клітин. Мають специфічні властивості (виділення ферментів та ін.) |
Одною з головних особливостей вторинної культури як клітинної лінії є зміна генетичного матеріалу. І хоча вторинна культура на даному етапі може і загинути, певні зміни генотипу (мутації) можуть принципово змінити строки життя клітин.
| Зміна генотипу у вторинній культурі | ||||
| Спонтанна зміна | Індукована зміна | |||
  Найчастіше відбувається з клітинами тканин мишей та щурів
| Дослідники опромінюють клітини вторинної культури або обробляють їх хімічними мутагенами | |||
| В результаті природної або штучної трансформації утворюються клітини, що здатні витримувати сотні пересівів без втрати морфологічних та фізіологічних властивостей. Коли клітини вторинної лінії витримують 70 пересівів з інтервалом в 3 дні, вважають, що перетворились на постійну, перевивну або перещеплювану лінію. | ||||
Американська колекція типових культур налічує 400 штук від 40 видів тварин. Всі трансформовані клітини мають необоротні генетичні зміни, здатність ло безсмертя, знижені харчові потреби, тому і розмножуються в умовах, несприятливих для клітин первинних культур.
Клітини постійних ліній можна вирощувати в таких умовах:
1. Моношарова культура. Вирощують в скляних або пластикових матрасах, ролерних пробірках та ін. Швидкість обертання ролерних пробірок складає від 0,25 до 0,5 обертів/хв (культура на початкових стадіях росту) або 1 оберт/хв (зріла культура).
2. Суспензійна культура. Вирощують у реакторах з перемішуванням. В таких умовах клітини постійної лінії рівномірно розподілені у всьому шарі рідкого живильного середовища. До розвитку в суспензійній культурі здатні лімфобласти та мієломні клітини.
