Орган чи тканина, взяті безпосередньо з макроорганізму

Лекція 8-9

ТЕМА: „КУЛЬТУРИ КЛІТИН”

Методика отримання культури клітин

 

1 стадія

2 стадія

3 стадія

 

Ізоляція живих клітин із свіжих тканин		Експлантація клітин		Вирощування клітин
1. Подрібнення тканини 2.Ферментативний гідроліз речовин міжклітинного простору тріпсином для отримання окремих клітин	Висівв спеціальні флакони на рідкі живильні середовища	Проводиться на стінках культуральних флаконів в моношаровій культурі

Характеристика культур клітин різних видів

В наш час отримують і використовують різні типи культур. Вони можуть походити від ембріональних або пухлинних тканин, тканин нирок, легенів, печінки, тестікул тощо. В основному культуриклітин поділяють на певні групи не за місцем отримання, а за кількістю поділів до загибелі. Вік організму, з якого було взято клітини та їх тип визначає життєздатність клітин.

Орган чи тканина, взяті безпосередньо з макроорганізму

“Старі“ за віком організми

“Молоді“ за віком організми, ембріональні тканини

Клітини розвиваються в культурі декілька діб. Пересівів не витримують, гинуть		Термін життя сягає декількох тижнів або місяців. Ростуть при пересівах без втрати біохімічних та морфологічних властивостей. Техніка пересіву: клітини первинної культури знімають зі стінок флакону, промивають і пересівають в свіже поживне середовище. Можлива кількість пересівів 2-5 разів. Є дані, що звичайні клітини витримують 20 пересівів, а ембріональні – 50.
Первинна культура	Вторинна культура, субкультура, клітинна лінія

Позитивними рисами субкультур є:

ü Можна отримати практично з усіх видів клітин, які використовуються у вірусології (крім курячих фібробластів).

ü Мають таку ж чутливість до вірусів, як і первинні культури.

ü При пересівах виключаються мертві або ненормальні клітини.

 

Клітинна лінія має клітини з генотипами, які трохи або значно відрізняються від генотипу вихідних клітин.

 

	Клітинна лінія
Диплоїдна лінія	Гетероплоїдна лінія	Штам клітин
75% клітин зберігають генотип вихідних клітин	Менше 75% клітин зберігають генотип вихідних клітин	Клітини з однорідним генотипом. Більше 75% клітин зберігають генотип вихідних клітин. Мають специфічні властивості (виділення ферментів та ін.)

 

Одною з головних особливостей вторинної культури як клітинної лінії є зміна генетичного матеріалу. І хоча вторинна культура на даному етапі може і загинути, певні зміни генотипу (мутації) можуть принципово змінити строки життя клітин.

 

	Зміна генотипу у вторинній культурі
Спонтанна зміна		Індукована зміна
Найчастіше відбувається з клітинами тканин мишей та щурів		Дослідники опромінюють клітини вторинної культури або обробляють їх хімічними мутагенами
В результаті природної або штучної трансформації утворюються клітини, що здатні витримувати сотні пересівів без втрати морфологічних та фізіологічних властивостей. Коли клітини вторинної лінії витримують 70 пересівів з інтервалом в 3 дні, вважають, що перетворились на постійну, перевивну або перещеплювану лінію.

 

Американська колекція типових культур налічує 400 штук від 40 видів тварин. Всі трансформовані клітини мають необоротні генетичні зміни, здатність ло безсмертя, знижені харчові потреби, тому і розмножуються в умовах, несприятливих для клітин первинних культур.

Клітини постійних ліній можна вирощувати в таких умовах:

1. Моношарова культура. Вирощують в скляних або пластикових матрасах, ролерних пробірках та ін. Швидкість обертання ролерних пробірок складає від 0,25 до 0,5 обертів/хв (культура на початкових стадіях росту) або 1 оберт/хв (зріла культура).

2. Суспензійна культура. Вирощують у реакторах з перемішуванням. В таких умовах клітини постійної лінії рівномірно розподілені у всьому шарі рідкого живильного середовища. До розвитку в суспензійній культурі здатні лімфобласти та мієломні клітини.