Санитарно-микробиологическое исследование воды
Через воду могут передаваться самые различные инфекционные заболевания. При решении вопроса снабжения населения доброкачественной водой необходимо учитывать возможность водного пути передачи инфекций, в частности, брюшного тифа (паратифов), дизентерии, холеры, лептоспироза, туляремии, полиомиелита, вирусных гепатитов А и Е.
В зависимости от предназначения вода может быть классифицирована на:
ü питьевую воду централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения;
ü воду подземных и поверхностных источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения;
ü децентрализованную питьевую воду (из колодцев, артезианских скважин и родников);
ü воду объектов в зонах рекреации;
ü воду плавательных бассейнов с пресной и морской водой;
ü хозяйственно-бытовые сточные воды после обеззараживания и очистки.
Для всех видов водопользования имеется нормативно-техническая документация — государственные стандарты (ГОСТы), санитарные нормы и правила (СанПиНы), методические указания, методические рекомендации, информационные письма. Эта нормативно-техническая документация (НТД) включает гигиенические требования, нормативы качества воды и методы исследования.
Среди многочисленных нормируемых показателей следует особо выделить микробиологические и паразитологические. Косвенно данные показатели отражаются и при проведении химического анализа воды. Например, органические соединения азота — показатель загрязнения воды органическими веществами белковой природы, в том числе и за счёт сапрофитных и патогенных мик-ов. Ионы аммония, азотной и азотистой кислот также являются конечными продуктами распада микроорганизмов. Окисляемость воды и биохимическая потребность её в кислороде косвенно свидетельствует о возможном загрязнении воды патогенными микроорганизмами.
Санитарно-микробиологическое исследование воды централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения
Включает определение как патогенных микроорганизмов, так и СПМО (косвенно свидетельствующих о возможном присутствии в воде патогенных микроорганизмов). Определение патогенных микроорганизмов проводят по эпидемиологическим показаниям, а при плановых санитарно-микробиологических исследованиях воды анализ включает в себя следующие показатели по требованиям СанПиН 2.1.4.1074-01
Санитарно-показательные микроорганизмы в воде централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения
| Показатель | Единица измерения | Норматив |
| ОМЧ | Колониеобразующие единицы (КОЕ) в 1 см3 | меньше или равно 50 |
| Общие колиформные бактерии (ОКБ) | Число бактерий в 100 см3 | Отсутствует |
| Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) | Число бактерий в 100 см3 | Отсутствует |
| Коли-фаги | Бляшкообразующие единицы (БОЕ) в 100 см3 | Отсутствует |
| Споры сульфитредуцирующих клостридий | Число спор в 20 см3 | Отсутствует |
| Цисты лямблий | Число цист в 50 см3 | Отсутствует |
При этом, оценивая количество ОКБ и ТКБ в 100 см3 воды, следует анализировать не менее трёх объёмов воды (по 100 см3 каждый). При оценке ОКБ и ОМЧ превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в течение года. Коли-фаги определяют только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть, то же касается и наличия цист лямблий. Содержание спор сульфитредуцирующих клостридий определяют только при оценке эффективности технологии обработки воды. В случае обнаружения ТКБ, ОКБ, коли-фагов вновь проводят экстренное исследование воды на ТКБ, ОКБ и коли-фаги обжиганием.
Определяемые показатели кол-ва и периодичность исследования зависят от типа источника волоснабжения, типа населения. МУК по анализу воды 4.2.1018-01. В данных методических указаниях регламентированы методы санитарно-микробиологического котроля качества питьевой воды.
2.1.1. Отбор, хранение и транспортировка проб воды
Пробы воды отбирают в стерильную одноразовую посуду или ёмкости многократного применения с плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми), снабжёнными защитным колпачком из алюминиевой фольги или плотной бумаги. Многоразовая посуда, в том числе пробки, должны выдерживать стерилизацию сухим жаром и автоклавирование. Для нейтрализации присутствующего в воде хлора в ёмкость (до стерилизации) вносят серноватисто-кислый натрий из расчёта 10 мг на каждую половину объёма исследуемой воды. Если вода гиперхлорированная, то количество нейтрализатора увеличивают: при концентрации остаточного хлора 2 мг на литр хлора добавляют 20 мг нейтрализатора, 3 мг/л — 30 мг и так далее.
Стерильную ёмкость открывают непосредственно перед отбором воды, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края ёмкости не должны соприкасаться с посторонними предметами. При отборе проб из распределительной сети металлический кран стерилизуют обжиганием. Затем воду спускают в течение 10 минут при полностью открытом кране, при постоянном изливании воды или наличии на кране резинового силиконового шланга, отбор проб проводят без предварителного обжигания. Между пробкой и уровнем воды в емкости должно оставаться пространство, чтобы пробка не смачивалась при транспортировке. После отбора пробы емкость закрывают стерлиьной пробкой и колпачком. Пробу маркируют и в сопроводителньом документе указывают место, дату и время отбора пробы, фамилию специалиста и дополнительные сведения при необходимости. Анализ необходимо провести в течение 2 ч после отбора пробы. Если нет возможности доставитьдоставить в эти срокия, то при условии транспортировки и хранения пробы в контейнерах-холодильниках при температуре +4-10градусов, время можно увеличить до 6 часов.
Определение общего числа микроорганизмов
Общее число микроорганизмов (ОМЧ) — это общее число видимых при двукратном увеличении мезофильных, аэробных и факультативно анаэробных мик-ов, которые способны образовывать колонии на питательной среде при температуре +37 °С в течение 24 ч.
определения их количества могут быть использованы бактериологический и микроскопический методы.
Основные этапы бактериологического исследования: гомогенизация образца, десорбция микроорганизмов с плотных частиц, приготовление разведений, посев на питательные среды, идентификация выделенных культур.
Гомогенизацию образца проводят для равномерного распределения бактерий в анализируемом объекте. При исследовании жидких, плотных, сыпучих продуктов, в зависимости от характеристик испытуемого материала, используют перемешивание простым встряхиванием или специальные приборы.
Десорбция бактерий с плотных частиц необходима для анализа объектов твёрдой консистенции. Для этого материал суспензируют в жидкости или с поверхности объекта берут смывы и отпечатки. При суспензировании к навеске образца массой 10г добавляют 90 см3 воды и интенсивно перемешивают (вручную или в гомогенизаторе). В дальнейшем условно принимают 1 см3 полученной суспензии эквивалентным 0,1 г исходного материала.
Для определения количества бактерий чаще используют метод 10-кратных разведений, когда концентрация микроорганизмов каждого последующего разведения в 10 раз меньше предыдущего, затем разведения высевают на питательные среды.
Несмотря на кажущуюся техническую простоту, этот этап — один из наиболее существенных источников ошибок при определении количества микроорганизмов в объекте, поэтому в процессе подготовки разведений необходимо строго выполнять регламентированные процедуры.
В стерильные пробирки, соблюдая правила асептики, разливают стерильную воду или специальный раствор по 9 см3. Заранее стерилизовать мерно разлитую жидкость не рекомендуется, так как при автоклавировании её объём может измениться.
Для приготовления 1-го разведения 1:10 1 см 3 анализируемого материала стерильной пипеткой переносят в пробирку с 9 см3 жидкости для разведения. Пипетку нельзя погружать в воду более чем на 3 мм, во избежание смывания микроорганизмов с её наружной поверхности. Новой стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержимое пробирки путём многократного заполнения и опорожнения пипетки, набирают 1 см3 разведения 1:10 и переносят в следующую пробирку с 9 см3 жидкости, получая разведение 1:100 (10-2). Эти операции повторяют до получения необходимого ряда разведений.
В случаях когда идентификация не требуется используют метод глубинного посева в плотные питательные среды. С этой целью питательную среду расплавляют и охлаждают до температуры 45±5 С. В пустые стерильные чашки Петри, соблюдая правила асептики, стерильной пипеткой вносят 1 см3 образца (после его перемешивания) или заранее приготовленного разведения. Чашки предварительно маркируют со стороны горлышка, а не крышки.
Разведения выбирают с таким расчётом, чтобы на чашке выросло от 30 до 300 колоний. Из каждой пробы засевают два разведения. Не позднее чем через 15 мин после внесения материала в чашку наливают 10-12 см3 питательного агара или питательнуой среды, толщина слоя которого должна быть не менее 4—5 мм. Расплавленную среду и посевной материал незамедлительно тщательно перемешивают круговыми движениями, чтобы микроорганизмы равномерно распределились в массе среды. Чашки после этого оставляют на холодной горизонтальной поверхности на 10—15 мин для охлаждения и застывания среды, после чего посевы помещают в термостат и инкубируют при заданной температуре и экспозиции.
Для дальнейшей работы выбирают чашки, на которых выросло от 30 до 300 колоний, а при посеве нативного материала — от 1 до 300 колоний. Количество колоний на поверхности и в глубине агара подсчитывают визуально или при помощи лупы с 2—5-кратным увеличением (для этого чашку помещают вверх дном на поверхность чёрного цвета) либо специального прибора для счёта бактерий, с помощью которого подсчёт колоний осуществляется за 0,2 сек. Если на чашке с посевом максимального разведения выросло более 300 колоний, допустимо вести их подсчёт при помощи пластинки с лупой и сетки из оргстекла со стороной квадрата 1 см при сильном боковом освещении. Колонии считают не менее чем в 20 квадратах, определяют их среднее число на 1 см2 и умножают на площадь поверхности питательной среды в чашке.
В тех случаях, когда после подсчёта колоний может возникнуть необходимость в выделении чистой культуры и её идентификации, для определения кол-ва жизнеспособных мик-ов используют метод поверхностного посева. Питательную среду разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают, переворачивая чашки вверх дном и выдерживая их открытыми в термостате 30 минут при температуре 48-50 градусов.
В центр маркированной чашки Петри вносят заданное количество исследуемого материала или его разведения (например, 0,01—0,001 см3) и немедленно равномерно распределяют по поверхности среды стерильным стеклянным или пластиковым шпателем до тех пор, пока на агаре не останется видимых следов жидкости. Засеянные чашки немедленно переворачивают и быстро помещают в термостат, установленный на соответствующий температурный режим. В период нахождения чашек в термостате допускают кратковременные колебания температуры, в частности, при загрузке или разгрузке.
Учёт посевов проводят непосредственно после извлечения чашек из термостата, если это невозможно, их хранят в холодильнике не более 24 ч. При подсчёте колоний учитывают рост микроорганизмов только с заданными культуральными свойствами, а при использовании дифференциальных сред — с соответствующими биохимическими характеристиками.
Из каждой пробы делают посев не менее двух объёмов по 1 см3. Кол-во колоний на обеих чашках суммируют делят на два. Результат выражают в КОЕ 1 см3 пробы. Если на одной из двух чашек подсчёт колоний невозможен, то учитывают колонии, выросшие на одной чашке.
