Работа 2. Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Принцип работы основан на реакции Либерманна – Бурхардта (см. выше).

Материальное обеспечение: сыворотка крови, уксусный ангидрид, концентрированная серная кислота, пипетки, пробирки, мерные цилиндры, термостат, ФЭК, кюветы.

Ход работы: на дно сухой мерной пробирки вносят 0,1 мл сыворотки крови. Отмеривают цилиндром 2,1 мл реактива 1 (смесь ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты) и переливают в пробирку с сывороткой, перемешивают, встряхивают и помещают в термостат при температуре 37 град. С на 20 минут (или при комнатной температуре). При этом развивается зеленое окрашивание. Затем фотометрируют на ФЭКе в кювете на 5 мм против воды при красном светофильтре. Для определения содержания холестерина по найденной оптической плотности пользуются готовым калибровочным графиком. Найденную концентрацию холестерина умножают на 1000, т.к. сыворотки в опыт берется 0,1 мл. Коэффициент пересчета в единицы СИ (ммоль/л) равен 0,0258.

Норма – 2,97 – 8,79 ммоль/л холестерина в сыворотке крови

Клинико-диагностическое значение.

Гиперхолестеринемия наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, гипотиреозе, механической желтухе. Гипохолестеринемия наблюдается при голодании, туберкулезе, гипертиреозе.

Работа 3. Качественные реакции на ацетон и ацетоуксусную кислоту

Проба Люголя на ацетон

Принцип работы. Ацетон и ацетоуксусная кислота в щелочной среде образуют с нитропруссидом натрия оранжево-красное окрашивание.

Материальное обеспечение: моча, 10% раствор щелочи, нитропруссид натрия, ледяная уксусная кислота, пробирки, пипетки.

Ход работы. В пробирку наливают 5 капель мочи, 5 капель 10% раствора щелочи и 5 капель свежеприготовленного нитропруссида натрия. Появляется оранжево-красное окрашивание, которое после добавления 10 капель ледяной уксусной кислоты переходит в вишнево – красное окрашивание.

Реакция Герхардта на ацетоуксусную кислоту

Принцип работы Ацетоацетат с хлорным железом при кипячении образует раствор вишнево-красного цвета.

Материальное обеспечение: моча, 5% раствор хлорного железа, пробирки, пипетки

Ход работы К 5 каплям мочи прибавляют по каплям 5% раствор хлорного железа. При этом выпадает осадок – сульфат фосфорно-кислого железа. При наличии ацетатоацетата от дальнейщего прибавления хлорного железа появится вишнево – красное окрашивание. При кипячении процесс протекает быстро.

Клинико-диагностическое значение.

Гиперкетонемия и кетонурия наблюдаются при сахарном диабете, голодании, гиперпродукции гормонов – антагонистов инсулина.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя:

Приложение 1

Граф логической структуры

ТЕМА 1.14. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОСИНТЕЗА ЖИРНЫХ КИСЛОТ, ТРИАЦИЛГЛИЦЕРИДОВ И ФОСФОЛИПИДОВ. НАРУШЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА: ОЖИРЕНИЕ, ЖИРОВАЯ ИНФИЛЬТРАЦИЯ ПЕЧЕНИ

Актуальность темы

Липиды организма, выполняющие различные функции, постоянно включаются в метаболические превращения, регулируемые гормонами. Тесная взаимосвязь крови со всеми тканями организма позволяет выявить изменения в обмене липидов через специфические компоненты крови - плазменные липопротеиды. В плазме крови их обнаружено несколько классов. Найдено, что при ряде заболеваний липопротеидный спектр сыворотки крови может изменяться. Для врача наблюдения за липопротеидным спектром сыворотки крови позволяет судить о динамике патологического процесса, а также эффективности терапевтических мероприятий.

Общая цель

Уметь интерпретировать липопротеидный спектр сыворотки крови в зависимости от состояния липидного обмена организма для использования на клинических кафедрах при объяснении нарушений метаболизма и их клинических проявлений.

Основные теоретические вопросы, позволяющие выполнить целевые виды деятельности:

1. Механизм синтеза жирных кислот.

Синтез и депонирование нейтральных жиров.
Синтез фосфолипидов, его отличие от синтеза триацилглицеридов.
Взаимосвязь углеводного и липидного обменов.
Регуляция жирового обмена.
Липопротеины сыворотки крови.
Нарушения липидного обмена:

а) ожирение

б) жировая инфильтрация печени.