Транскрипция ДНК у прокариот. Кодирующая и антикодирующая цепи ДНК

Док-ва роли ДНК в передаче насл. инф-ции. Оп. Гриффитса, Эвери, Мак-Леода и Мак-Карти. Трансформация.

Гриффитс 1928 – трансформация пневмококков. Полисах. капсула – патогенны, обр-т кр. гладкие колонии, S. Без – непатогенны, мелк. шерох. колонии, R. Вводил мышам убитых S, либо живых R – нет патологии. Живых S – пневмония. Если живых R и мертвых S, тоже пневмония. Док-во «трансформирующего» начала, R в S.

Эвери, МакЛеод, МакКарти 1944. ДНК убитых S смешали с живыми R, те форм-т колонии S. Т.к. думали, что насл-сть в белке, то ДНК /ли на порции и обр-ли азами. ДНК-аза полн. ост-ла трансф-цию. Притом, чем меньше было белка, тем больше трансформация, где все полностью восстановилось, белка в 10к раз <. Значит ДНК – ген. информация.

Опыты Херши и Чейз.

Херши и Чейз 1952. Бактериофаг Т2 из капсида и ДНК. Изотопы ³²Р и ³⁵S. Фаг этот атакует палочку кишечную. Это происходит быстро и резко, перестраивает метаболизм, заставляя её продуцировать белки свои. Фагов выращивали, чтобы изотопами они наполнились, а затем смешивали с палочкой и встряхивали на блендере или смесителе Уоринга. Так отделялось то, что проникло от того, что не проникло. По изотопам поняли, что проникает ДНК. Это трансдукция.

Структура нуклеиновых кислот. Нуклеотиды, их разновидности.

Нужно было понять как ДНК ауто и гетеро каталитирует. (из химии). РНК – 1 цепь. ДНК – 2. 1 пр. Чааргаффа – пурин = пиримидин. 2 пр. A=T; Ц=Г. Уиккинс и Франклин разрезали поперечно ДНК. D= 2 нм, 2 цепи, спиралька, виток 3,4 нм, расстояние 0,34 нм.

Простр. конф--ция мол-лы ДНК. Модель Уотсона и Крика. В и Z формы ДНК.

Уотсон и Крик 1953 созд-т модель. Витки спирали по час. стрелке – В-форма. Участки в 30 ГЦ – Z-форма, хз зачем.. Не получалась модель, т.к. 1 цепь 3'–5', 2 – 5'–3'.

5. Сп-бы репл-ции ДНК: консерв, полуконсерв, дисперс. Оп. Мезельсон и Сталь.

Дельбрих, Гюитерсен 1954. Консерв. – на осн. ДНК возн-т абс. новая без элементов старой. Старая и нов. сущ-т одновременно. Полуконсерв. – на осн. старой возн-т 2 гибр. полустарые-полунов. Дисперс. – ДНК реж-ся на куски, кажд. кусок репл-ся, они сш-ся. Опыты Мезельсона и Сталя 1958. Выр-ли E.Coli с ¹⁵N. ДНК стала плотнее. Потом клетки с ¹⁵N переносили к ¹⁴N. Пл-сть д.б. уравн-ся. ДНК опускали в CsCl₂. Все мол-лы были в центре, т.е. это гибриды ¹⁴N-¹⁵N. Полуконсервативное. V= 60к об/мин. 15 мин.

Направление репликации ДНК. Образование репликативной вилки. Точка ori.

Кернс 1963 – метод авторадиографии. 3Н-тимидин. ДНК выделялись на стекла. Ѳ. Образуются репликативные вилки. В ДНК эукариотов локусов ori много.

Инициация репликации. Факторы инициации. Ферменты репликации.

В локусе ori обр-сь репл. вилки, ДНК раскр-ся, и её цепи разд-ся, стаб-сь ферментом SSB, также участвуют гераза, свевилаза. Репликация идет репликонами, ДНК разр-ся в области фосфатного мостика. ферменты: 1957 Корнберг выделил ДНК-полимеразу, лигаза (ричард и Вейс) сшивает фрагменты 3'–5'.

Элонгация репликации. ДНК - топоизомераза, ДНК - затравка, ДНК - полимераза.

Репл-ция происходит путем непрер. роста нк за нк 2 новых цепей одновр. Матрица сч-ся ДНК-полимеразой только в 3’-5’, доб-ляя своб. н-ды к 3’-концу соб-мой цепочки.. Ни 1 из ДНК-полимераз не м. «с 0»: лишь доб-ть н-ды к уже существующей 3’OH. По этой причине ДНК-полимераза нужд-ся в праймере. Нек. ДНК-полимеразы исправляют ошибки. Если происх. обнаружение неправильной пары н-дов, ДНК-полимераза отк-ся на 1 шаг назад. Топоизомеразы кат-т и обесп-т распл-е ДНК путем создания разрывов в 2 цепях ДНК, при этом катализ осущ-т консерв. остаток тир.

Эл-ция репл-ции. Лид-щая и отст-щая цепи. Фрагм. Оказаки. РНК - затравка.

Cинтез ДНК пр-т непрер. только на 1 из матричных цепей - «лидирующей». Во 2 цепи синтез происх. фрагм-ми праймосомой (праймаза, РНтФ-аза, атеодаза). Они синт-ся РНК-затравкой, называются Оказаки, сшиваются лигазой.

Транскрипция ДНК у прокариот. Кодирующая и антикодирующая цепи ДНК.

Уотсон и Крик думали есть что-то между ДНК и белком, т.к ядро отдельно от цитоплазмы. 3 типа РНК: и, т, р-РНК. 1 уровень экспрессии – решение, что именно с данного гена будем мы сейчас делать белок. Согласно Крику репликация-транскрипция-трансляция. Позднее – обратная транскрипция, синтез ДНК по РНК. Это если РНК-вирус нападет. Но это все равно. 1 цепь ДНК значима, а 1 нет. Антикодонная нужна нам. Радиометки нам дали это понять. Волкин и Астрахан 1962.