Крахмал с раствором Люголя дает синее окрашивание (реакция с йодом). При кипячении крахмала в присутствии соляной кислоты происходит его последовательный гидролиз, что отмечается по реакции с йодом.
Приготовить штатив с рядом пробирок (5-8 шт.). Впервую пробирку ввести 2-3 мл раствора крахмала, добавить 1 каплю раствора Люголя, появляется синее окрашивание.
В колбу налить 20 мл раствора крахмала, добавить 16-18 капель концентрированной НCL и поставить на электроплитку (спиртовку) греть. После начала кипения, осторожно, не прекращая кипения смеси, через каждые минуты, из колбы пипеткой брать по 1 мл раствора и последовательно носить в пробирки с водой, добавляя по 1 капле раствора Люголя. Наблюдать за изменением окрашивания растворов в пробирках. Фиолетовое окрашивание указывает на наличие амилодекстринов, красно-бурое - эритродекстринов, желтое - ахродекстринов и мальтозы. При появлении желтого цвета в пробирке кипячение остановить. С раствором в последней пробирке провести реакцию Троммера. По полученным результатам сделать вывод.
Кислотный гидролиз клетчатки.
Клетчатка является полисахаридом, но в отличие от крахмала с йодом синее окрашивание не дает, это связано с ее структурой.
В органах пищеварения у жвачных и моногастричных животных клетчатка расщепляется до летучих жирных кислот микроорганизмами рубца и пых отростков кишечника.
В пробирку внести кусочек ваты и раствор серной кислоты в отношении 3:1. После полного растворения ваты (через 15-20 минут) смесь перенести в колбу и поставить ее кипятить. Периодически (в 5 минутные интервалы) отбирать пробу 1-2 мл в пробирку, нейтрализовать его 40%-ным раствором NaOH до выраженной щелочной реакции (контроль по лакмусовой бумаге) и добавив 1-2 капли CuSO4 (1% раствор) нагреть. Появление желто-красного или оранжево-красного окрашивания свидетельствует о прекращении гидролиза. По полученным результатам сделать вывод.
Контрольные вопросы
- Природа ферментов.
- Свойства ферментов.
- Особенности ферментативных реакций.
- Механизм действия ферментов.
- Применение в практике ферментных препаратов.
Лабораторная работа №2.
«Качественные реакции на дегидрогеназы»
1.1 Цель работы: изучить действие дегидрогеназ молока и мышц.
1.2 Реактивы: молоко или кефир, мышечная кашица (0,5 гр. мышц растертых в ступке с 3 - 4 мл физраствора); 0,4% раствор формальдегида, метиленовая синь, янтарная кислота (3% раствор нейтрализованный едким натром до слабо щелочной реакции на лакмус).
2.3 Оборудование - штатив с пробирками, водяная баня, термометры, электроплитки или спиртовки.
2.4 Ход работы:
Опыт 1 - действие альдегидоксидазы (ксантиноксидазы) молока.
В молоке содержится фермент, ускоряющий дегидрирование различных альдегидов (формальдегида, ацетальдегида и др.). Если реакция дегидрирования протекает в присутствии газообразного кислорода, то водород переносится на кислород с образованием перекиси водорода. В присутствии метиленовой сини она служит акцептором, на которой альдегидоксидаза переносит водород с окисляемого субстрата.
Налить в две пробирки по 4 - 5 мл молока или кефира, содержимое одной пробирки прокипятить и охладить. Добавить в обе пробирки по 8 - 10 капель раствора формальдегида и по 1 - 2 капли метиленовой сини, перемешать и поставить в водяную баню при 37 - 40°С. Через некоторое время наблюдается обесцвечивание метиленовой сини в одной пробирке и отсутствие обесцвечивания в другой (кипяченной).
Записать схему опыта результаты и выводы занести в таблицу 2.
Опыт 2 - наблюдение действия сукцинатдегирогеназы мышц.
Сукцинатдегидрогеиаза окисляет янтарную кислоту (сукцинат) в фумаровую (фумарат). При наличии метиленовой сини последняя восстанавливается в бесцветное лейкосоединение.
В две пробирки внести по 3 - 4 мл. мышечной кашицы и в одну из них добавить 6-8 капель нейтрализованного раствора янтарной кислоты. Затем в обе пробирки прилить по 2 капли раствора метиленовой сини, встряхнуть и поставить в баню с температурой 37 - 40°С. Через некоторое время происходит обесцвечивание метиленовой сини в пробирке с янтарной кислотой, Во второй пробирке окраска сохраняется. Написать схему опыта, объяснить его результаты и сделать выводы. Данные занести в таблицу 2.
Таблица 2. Результаты действия дегидрогеназ.
| № пробирки | Условие опыта | Результат опыта | Выводы |
| Опыт 1 Формалин, молоко, метиленовая синь Формалин, кипяченое молоко, метиленовая синь | |||
| Опыт 2 Янтарная кислота, мышечная кашица, метиленовая синь Мышечная кашица, метиленовая синь |
Контрольные вопросы
- Характеристика двухкомпонентных ферментов.
- Строение НАД и НАДФ.
- Биологическая роль дегидрогеназ.
- Аэробные и анаэробные дегидрогиназы.
Лабораторная работа №3
«Определение активности каталазы крови и пероксидазы молока»
Часть окислительных процессов, происходящих в клетке, протекают без участия убихинона и цитохромной системы, когда флавиновый фермент напрямую переносит водород на кислород. Данный путь получил название «короткая дыхательная цепь». В этих реакциях не образуются молекулы АТФ, но образуется перекись водорода. Это вещество чрезвычайно опасно для многих соединений, более всего для хромопротеидов (гемоглобин). Он превращает Fe2+ в Fe3+. Это значит, что гемоглобин утрачивает свои свойства для транспорта кислорода. В эритроцитах, в клетках печени и др. содержатся ферменты способные разрушать Hz02.
3.1 Цель работы. Определить активность каталазы крови и рассмотреть характер действия перокендазы молока. На основе этих исследований рассмотреть главную и короткие дыхательные цепи клетки, их роль в организме.
