Реакция непрямой гемагглютинации. РНГА используется для определения концентрации вируснейтрализующих антител в сыворотке крови и смывах со слизистой оболочки дыхательных путей

 

РНГА используется для определения концентрации вируснейтрализующих антител в сыворотке крови и смывах со слизистой оболочки дыхательных путей. Возможность применения РНГА для серологической диагностики гриппа была обоснована Э. П. Корнеевой и соавт. (1972), которые разработали современную микрометодику этой реакции. Она предусматривает использование стандартных лиофилизированных эритроцитарных диагностикумов, получаемых путем присоединения к формализированным эритроцитам барана целых вирионов с помощью бидиазотированного бензидина.

 

РНГА специфична, высокочувствительна, техника ее выполнения исключительно проста, реакция не выявляет сывороточные ингибиторы. Благодаря использованию одной и той же серии лиофилизированного диагностикума для исследования значительного количества проб результаты определений стандартны. Для выполнения реакции необходимы микрообъемы исследуемого материала (не более 0,05 мл). Результаты могут быть учтены в ближайшие часы после постановки. РНГА основана на принципе непрямого иммунологического анализа. Формалинизированные эритроциты диагностикума, несущие на своей поверхности прочно фиксированные с помощью бидиазотированного бензидина вирусные частицы, обладают способностью склеиваться между собой при наличии в исследуемом материале антител, гомологичных вирусу. Результат проявляется наличием или отсутствием агглютинации эритроцитов в лунках панели.

 

 

ВОПРОС 48

Иммуноферментный анализ (ИФА) - лабораторное исследование основаное на высокой избирательности и специфичности иммунологических реакций “антиген-антитело”.

Различают несколько десятков модификаций ИФА.Наибольшее распространение получил твердофазный гетерогенный иммунный анализ - ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). ИФА применяют для двух целей - для определения наличия антигенов возбудителей различных инфекций,но значительно чаще метод ИФА применяется для определения наличия антител классов (IgA IgM IgG) к антигенам различных возбудителей болезней.С помощью ИФА можно определить антитела к любой половой инфекции (при условии,конечно,что организм их выработал) подробнее в статье Иммуный ответ при половый инфекциях.

 

Как проводится исследование методом ИФА

Механизм реакции

В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом,а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.В упращенном виде механизм реакции можно представитьследующим образом:

Первая реакция происходит между определяемым Ig (Ab) и очищенным антигеном возбудителя (Ag), фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета

Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологичесую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему — коньюгат, представляющий собой Ig (Ab) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом -пероксидазой (K)

Далее происходит ферментативная реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата.Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество — хромоген, который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе иммуноглобулинов.

После остановки реакции проводят фотометрирование лунок с помощью специальных приборов.для учета результатов используют специальные приборы.При сравнении со значений оптической плотности контрольных проб проводят математическую обработку результатов анализа. Чем выше оптическая плотност в данной ячейки, тем большее количество специфических антител содержится в пробе