Складні та спеціальні способи фарбування бактерій засновані на властивостях фізико — хімічної будови мікробної клітини. Вони використовуються для диференціації мікроорганізмів та вивчення їх клітинної структури.
В зв'язку з тим, що хімічний склад цитоплазми і оболонки мікробів відрізняється, вони по-різному сприймають одні і тіж фарби та неоднаково віддають їх при наступному знебарвленні спиртом, кислотами і.т.п. Частини мікробної клітини вибірково реагують на дію фарбуючих розчинів.
Техніка фарбування за методом Грама. На знежирене предметне скло, поділене на дві частини наносять окремо грампозитивні та грамнегативні мікроорганізми. Мазки висушують та фіксують. На препарат наносять смужку фільтрувального паперу з генціанвіолетом на 2 хвилини, знімають папір пінцетом, зливають рідину і наливають розчин Люголя на 2 хвилини. Після цього розчин зливають і препарат обробляють 96% етиловим спиртом протягом 30секунд, похитуючи. Змивають водою і фарбують карболовим фуксином 2 хвилини. Фарбу змивають, препарат висушують фільтрувальним папером і мікроскопують.
Грампозитивні мікроби забарвлюються в синьо-фіолетовий колір, грамнегативні в червоний колір.
Сутність фарбування за методом Грама заснована на особливості фізико — хімічної будови мікробної клітини.
Грампозитивні мікроби містять в цитоплазмі магнієву сіль РНК і поліпептид муреін, які з гінціанвіолетом в присутності йоду, а також кислої реакції (РН- 2-3) цитоплазми утворюють стійкий комплекс (спиртонерозчинний), який зберігається при послідуючому впливу спирту і карболового фуксину і тому мають синьо-фіолетовий колір.
Грамнегативні мікроорганізми не містять вище перелічувані компоненти в оболонці і протоплазмі клітини, або містять в невеликій кількості, тому в них не утворюється стійке з'єднання фарби з оболонкою і протоплазмою, в результаті чого вони знебарвлюються спиртом. При додатковому фарбуванні карболовим фуксином, вони сприймають червоний кольор фуксину.
Фарбування спор за методом Пєшкова. Спори - це овальні світлозаломляючі тільця, які утворюються всередині мікробної клітини при несприятливих умовах. Вони мають щільну багатошарову оболонку (3-5 шарів), тому простим способом не фарбуються. Для їх фарбування застосовують спеціальні методи, які засновані на попередньому руйнуванні оболонок, шляхом протравлення (хромовою, карболовою, соляною кислотами), чи підігрівання над полум'ям спиртівки.
Сутність способу фарбування спор за методом Пєшкова складається в том, що на зафіксований препарат наносять метиленову синьку і тримають над полум'ям спиртівки протягом 15-20 секунд, доводячи до кипіння. Потім фарбу змивають водою, після чого додатково фарбують 0,5% водним розчином нейтральроту (30 секунд), змивають водою і мікроскопують. Спори фарбуються в блакитний або синій; вегетативні форми - рожевий колір.
КОНТРОЛЬНІ ПИТАННЯ.
1. Яке значення в мікробіології має фарбування мікробних клітин за методом Грама?
2. Сутність фарбування мікробів за методом Грама;
3. Які фарби і розчини застосовуються під час фарбування за методом Грама?
4. Техніка фарбування мікробів за методом Грама;
5. Складові частини бактеріальної клітини;
6. Будова клітинної оболонки бактерій
7. Спори бактерій і умови спороутворення;
8. Сутність фарбування спор і капсул мікроорганізмів;
9. Методи фарбування спор і капсул.
Заняття № 4
Тема: Обладнання мікробіологічної лабораторії та методи стерилізації.
Мета заняття:
Познайомити студентів з:
а) обладнанням і апаратурою мікробіологічної лабораторії;
б) методами стерилізації та принципами роботи стерилізаційної апаратури;
в) лабораторним посудом, технікою його підготування і стерилізацією.
ЛІТЕРАТУРА
IV 69-96; V. 62-66; VI. 52-57;VІІ.72-75
ЗМІСТ ЗАНЯТТЯ
Викладач:
- проводить опитування студентів з пройденого та наступного матеріалу;
- знайомить з обладнанням, апаратурою та посудом мікробіологічної лабораторії;
- пояснює методи стерилізації, їх сутність і демонструє апаратуру, яка застосовується для стерилізації;
- знайомить з технікою підготовки посуду, матеріалів до стерилізації.
