Культуры пекарских дрожжей
Цель работы: получение экспериментальной модели возникновения эпидемии.
Материалы и оборудование: трех суточная культуры пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae (выращенная при 30 °С, хранящаяся при 4 °С) в пробирках на скошенной агаризованной среде Сабуро, пробирки со стерильной водопроводной водой, пустые стерильные пробирки, автоматические пипетки со стерильными наконечниками, микробиологические петли, чашки Петри, агаризованная среда Сабуро, стерильные ватные палочки, микроскоп, покровные и предметные стекла, пинцет.
Основные положения
Эпидемия - относительно кратковременное, быстрое и непрерывное распространение инфекционного заболевания в пределах какой-то совокупности организмов в определенном регионе. При этом регистрируется заболеваемость намного выше обычно существующего уровня. Распространение инфекционного заболевания людей или животных на территории целой страны, континента или всей суши называется пандемией. Инфекционное заболевание, или инфекция (от лат. i n fectio — заражение), представляет собой совокупность физиологических и патологических адаптационных и репарационных реакций, которые возникают и развиваются в макроорганизме в процессе взаимодействия с патогенными микроорганизмами.
Формы инфекции разнообразны и носят различные наименования в зависимости от природы возбудителя, его локализации в макроорганизме и путей распространения. Так, экзогенная инфекция возникает в результате заражения патогенными микроорганизмами, поступившими в организм из окружающей среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека или микробоносителя. Часто распространение инфекционных болезней происходит при несоблюдении элементарных правил гигиены.
Задания
Основным методом работы является получение культуры дрожжей с поверхности ладоней и пальцев человека методом смыва с последующим высевом смытой суспензии на плотную питательную среду.
Группу студентов разделяют на подгруппы по 5 человека в каждой. На подгруппу готовится 10 чашки Петри со средой Сабуро (пептон – 10 г/л, глюкоза – 40 г/л, дрожжевой экстракт - 5 г/л, агар – 20 г/л). Каждую чашку нумеруют. Все студенты подгруппы тщательно моют руки с мылом и стерилизуют их 70%-м этанолом.
1. Контрольный тест для доказательства чистоты рук. Чтобы убедиться в отсутствии дрожжевых клеток на руках студентов, участвующих в эксперименте, делают смыв с ладоней и пальцев их правой руки. Один из студентов с помощью стерильной ватной палочки, смоченной в стерильной водопроводной воде, делает смыв с поверхности ладони и пальцев правой руки, участвующих в эксперименте студентов и проводит ею штрих по поверхности среды в чашке Петри со средой Сабуро (контрольный высев).
2. Моделирование процесса возникновения эпидемии. Делают суспензию из 3-суточной культуры дрожжей S. cerevisiae, выросшей при температуре 30 °С. Для этого в пробирку с выросшей культурой дрожжей, содержащую скошенную агаризованную среду Сабуро, стерильно вносят 3 — 4 мл стерильной водопроводной воды и с помощью бактериологической петли осторожно суспендируют дрожжевую массу с поверхности агара. Полученную суспензию переносят в стерильную пробирку. Студенты, участвующие в эксперименте, еще раз моют руки с мылом, протирают их 70%-м этанолом и дают высохнуть. Затем студент-инструктор протирает с помощью ватной палочки, смоченной суспензией S. cerevisiae, поверхность ладони и пальцев правой руки первого студента. Он обменивается энергичным рукопожатием правой рукой со вторым студентом. Тот пожимает правую руку третьего студента, а он в свою очередь обменивается рукопожатием с четвертым студентом.
3. Выделение культуры возбудителя «инфекционного процесса». Для выделения культуры дрожжей с поверхности ладоней и пальцев правой руки студентов используют стерильные ватные палочки, слегка смоченные стерильной водопроводной водой. Студент-инструктор делает смывы ладоней и пальцев правых рук студентов участвующих в эксперименте и высевает смывы на чашки Петри. Для получения отдельных колоний дрожжей, смытых тампонами с рук, штрих на чашке Петри со средой Сабуро распределяют по всей поверхности чашки бактериологической петлей методом «истощающего штриха». Делают контрольный высев на чашку Петри со средой Сабуро суспензию дрожжей, использованную в эксперименте, бактериологической петлей методом «истощающего штриха». Засеянные чашки со средой инкубируют в течение 3 сут при температуре 30 °С. Выросшие колонии на чашках просматривают, определяют интенсивность роста - скудный, умеренный или обильный. При возможности подсчитывают количество колоний на чашках. Делают препараты «раздавленная капля» из колоний дрожжей в чашках засеянных после эксперимента, а также дрожжей рабочей суспензии и просматривают их с объективом 40х. Делают выводы о способах возникновения и путях распространения экзогенной инфекции.
Контрольные вопросы
1. Дайте определение термина «эпидемия»?
2. Что называют «пандемией»?
3. Что подразумевается под терминами «инфекционное заболевание» или «инфекция»?
4. От чего зависит форма инфекции? Приведите примеры.
Литература
1. Белясова, Н.А. Микробиология [Электронный ресурс]: учебник/ Белясова Н.А.— Электрон. текстовые данные.— Минск: Вышэйшая школа, 2012.— 443 c.— Режим доступа: http://www.iprbookshop.ru/20229.— ЭБС «IPRbooks», по паролю
2. Березовская В.А., Белоусова И.Н., Клочкова Н.Г. Биология и микробиология: Учебно-методическое пособие (практикум). – Петропавловск-Камчатский: КамчатГТУ, 2006. – 92 с.
3. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках: Учебник для вузов/ Н.С.Егоров; МГУ им. М. В. Ломоносова.-6-е изд., перераб. и доп.- М.: Изд-во Моск.ун-та: Наука, 2004.-528с
4. Емцев, В.Т. Микробиология: учебник для вузов/ В.Т.Емцев, Е.Н.Мишустин.-6-е изд.,испр.- М.: Дрофа, 2006.- 444с.
5. Зимоглядова Т. В. И др. Практикум по микробиологии: учебное пособие / Т. В. Зимоглядова, И. А. Карташева, О. Г. Шабалдас. – М.: Колос; Ставрополь: АГРУС, 2007 – 148с.
6. Лебедев, В.Н. Микробиология с основами вирусологии. Часть I. Основы общей вирусологии [Электронный ресурс]: методическое пособие для студентов биологических специальностей/ Лебедев В.Н.— Электрон. текстовые данные.— СПб.: Российский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена, 2014.— 62 c.— Режим доступа: http://www.iprbookshop.ru/22556.— ЭБС «IPRbooks», по паролю
7. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для высш. проф. образования: в 2 т. / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко.— М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010
8. Методы общей и специальной микробиологии: Учебное пособие. /Е.В.Никитина, О.А. Решетник; Казан. гос. технол. ун-т. Казань, 2006, 124 с.
9. Оценка параметров роста микроорганизмов в условиях периодического и непрерывного культивирования: методические указания к выполнению лабораторной работы по курсу «Основы микробиологии и биотехнологии» для студентов специальности 280201.65 «Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов» / сост. Л. А. Гаретова, О. А. Кириенко. – Хабаровск: Изд-во Тихоокеан. гос. ун-та, 2010. – 16 с.
10. Петр С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / С. Дж. Петр. – М.: Издательство «Мир», 1978. - 330 c.
11. Поздеев, О.К. Медицинская микробиология: Учебник для мед.вузов/ О.К.Поздеев; под ред. В.И.Покровского.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005.-768с.
12. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для вузов/ А.И.Нетрусов [и др.]; под ред. А.И.Нетрусова. -М.: Академия, 2005.-608с.
13. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для вузов/ Е.З.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева; Под ред.В.К. Шильниковой.-5-е изд., перераб.и доп. -М.: Дрофа, 2004.-256с.
