Казахский национальный медицинский университет им.С.Д.Асфендиярова, г. Алматы (Казахстан).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЧИСТОТЫ ГЕЛЯ С ПРОТИВОГРИБКОВЫМ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

Дербисбекова У.Б.*, Датхаев У.М., Шопабаева А.Р.,

Омарова Г.Ж., Сарсенова К.А.

Казахский национальный медицинский университет им.С.Д.Асфендиярова, г. Алматы (Казахстан).

Резюме: В данной работе приведены результаты исследования микробиологической чистоты геля под условным названием "Антикандид"на основе субстанции производного 4H-пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина с противогрибковым и антибактериальным действием.Практическая ценность и новизна заключаются в исследовании микроорганизмов в исследуемых образцов гелей, различными методами. Результаты исследования показали высокое качество исследуемых образцов по показателю «Микробиологическая чистота».

Ключевые слова: гель,соево-казеиновый агар, Сабуро-декстрозный агар, соево-казеиновый бульон, маннит-солевой агар, тестовые штаммы, поверхностный посев, глубинный посев, бактерий.

 

Введение. Микробиологическая чистота - является одним из важных показателей качества при исследовании разработанного лекарственного средства. Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах.

Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах [1].

По микробиологической чистоте, необходимо разработать нормы, ограничивающие уровень микробной контаминации вспомогательного вещества. Однако их микробиологическая чистота находится в прямой зависимости от микробиологической чистоты воздуха производственных помещений, условий транспортировки и времени хранения в открытом виде на стадии фасовки. Большинство лекарственных средств, не подвергнутые стерилизации, могут загрязняться микроорганизмами. Микроорганизмы в вязких средах значительно медленнее развиваются, чем в жидких средах, но при этом они длительное время могут выживать и размножаться в самом лекарственном средстве. При процессе приготовления - первичный контаминации определенное количество разных микроорганизмов могут попасть в готовые лекарственные препараты. Источниками микробного загрязнения могут быть вода, сырье, воздух, оборудование, первичная упаковка и различные внешние факторы. Наиболее рациональными и перспективными направлениями в решении проблемы снижения микробной контаминации лекарственных средств, действующих и вспомогательных веществ являются: повышение культуры производства и совершенствование технологий производства, отвечающих современным требованиям по микробиологической чистоте.

При разработке новых препаратов одним из важных аспектов является оценка показателей качества и их стандартизация, которое гарантирует безопасность и стабильность препарата в течение всего срока годности.

В этой связи, оптимизация состава и поиск новых лекарственных средств в первую очередь за счет выбора оптимальной основы, является актуальной проблемой фармации [2].

Материалы и методы. Для изучение микробиологической чистоты геля под условным названием "Антикандид" были получены модели геля. Образцов определяли сразу же после приготовления, через каждые 6 месяцы хранение в условиях холодильника (температура от 2 ^оС до 8^оС) и при температурной температуре (от 15^оС до 25^оС), в течение 24 месяцев.

При определении микробиологической чистоты образцов геля "Антикандид" использовались методы, предлагаемые в ГФ РК: определение общего числа жизнеспособных аэробных мезофильных бактерий и грибов - метод глубинного посева, метод поверхностного посева, определения наличия бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и семейства Enterobacteriaceae.

Испытания позволяют осуществлять количественное определение мезофильных бактерий и грибов, способных расти в аэробных условиях. В качестве тестовых штаммов использовали микроорганизмы из американской коллекции культур: Staphylococcus aureus АТСС 6538, Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 и Escherichia Coli АТСС 25922.

Согласно рекомендации были использованы следующие плотные и жидкие питательные среды: соево-казеиновый агар (для определения количества живых бактерий), Сабуро-декстрозный агар (определения количества грибов), соево-казеиновый бульон (для предварительного инкубирования при определении наличия определенных видов микроорганизмов), маннит-солевой агар (для идентификации Staphylococcus aureus), цетримидный агар (для идентификации Pseudomonas aeruginosa).

При исследовании использовали с каждой питательной средой больше 6 чашек Петри, результат исследовании определяли как среднее арифметическое значение числа колоний, которые выросли на всех паралельных чашках. Чашки с соево-казеиновым агаром инкубировали при температуре от 30⁰С до 35⁰С 5 суток, чашки из Сабуро-декстрозным агаром - при температуре от 20⁰С до 25^оС - 7 суток.

Отработанную пробу образца 10 г геля растворяли в 100 мл 0,9 % физиологическом растворе, пробу подогревали не больше температуры 40⁰Си тщательноперемешивали, поддерживая температуры на водяной бане. Добавляли необходимое количество заранее подогретого растворителя для получения разведения испытуемого образца 1:10. Затем перемешивали до образования необходимый эмульсии.

В соответствии с требованиями ГФ РК I, т. 1, 2.6.12, допускается наличие: аэробных бактерий не более 1000, грибов (суммарно) не более 100. В 1 г препарата допускается наличие: энтеробактерий и других грамотрицательных не более 100. А так же в 1 г препарата не допускается наличие Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа [3-5].

Результаты и их обсуждение. Состав геля "Антикандид" на основе субстанций производных 4 H -пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина представлен в таблице №1.

Таблица №1: Состав геля "Антикандид" с противогрибковым

действием

I	Действующее вещество:
	Субстанция производных 4H-пиридо[4’,3’:5,6]пирано[2,3-d]пиримидина	3%
II	Вспомогательные вещества:
	Димексид	3%
	Пропиленгликоль	50,0 %
	Карбопол Ultrez 20	1,0%
	Триэтаноламин	1,0%
	Вода очищенная	42,0%

 

Инкубация подготовленных образцов гелей (соотношение 1:10) на маннит-солевой агаре (температура 30⁰С до 35⁰С - 72 часы) показала отстутствие колоний, которое отвечает результату - "отсутствие бактерий Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа в 1 г исследуемой гели". Результаты исследования представлены в таблице под №2.

 

Таблица №2: Результаты исследовании микробиологической чистоты геля "Антикандид"

 

№

Показатель

Метод исследования

Срок хранения, температура, месяц

t от 20С до 8оС

t от 150С до 25оС

Общее число аэробных микроорганизмов, КУО/г.

Глубинный посев

Поверхностный посев

Общее число дрожжевых и плесневых грибов, КУО/г.

Глубинный посев

Поверхностный посев

Наличие энтеробактерий, грам-отрицательных, грам-положительных бактерий

Staphylococcus aureus

Отсутствуют

Pseudomonas aeruginosа

Отсутствуют

Escherichia Coli

Отсутствуют

Примечание: КУО/г - число колониеобразующих единиц в 1 г препарата.

 

Определение микробиологической чистоты методами поверхностного и глубинного посева показало содержание бактерий - от 10 до 20 колониеобразующих единиц в 1 г (КУО/г), дрожжевых и плесневых грибов - от 8 до 10 КУО/г. Полученные результаты показывают отсутствие в образце гелей грамположительных кокков Staphylococcus aureus и грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosа и Escherichia Coli при хранение в течение 24 месяцев в температуре от 2⁰С до 25^оС [5-7].

Выводы. По результатам исследования уровень микробной загрязненности не превышал допустимые пределы: не более 10000 КОЕ аэробных бактерий и 100 КОЕ грибов в 1 г геля при отсутствии Escherichia Coli кишечных бактерий - не более 100 КОЕ в 1 г (мл), и бактерии семейства Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosа обнаружен не был и показали микробиологическую чистоту, а так же стабильность в течение всего срока хранения.

Список литературы:

1. Гунар О.В. Различные модификации среды Сабуро для количественного определения грибов, контаминирующих нестерильные лекарственные средства / О.В. Гунар, К.А. Каграманова// Химико-фармацевтический журнал.- 1992.- №6.- С.67-68.

2. Гунар О.В. Особенности контроля качества некоторых лекарственных средств с противогрибковым действием по показателю «Микробиологическая чистота» / О.В. Гунар, Н.И Каламова., Н.С. Евтушенко // Химико-фармацевтический журнал. - 2003. - Т.37. №1. - С.46-48.

3. Каламова, Н.И. Изменение к статье ГФ XI изд. «Методы микробиологического контроля лекарственных средств»/ Н.И. Каламова, К.А. Каграманова, О.В. Гунар // Фарматека.- 1997.- №1.- C.37-38.

4. Одегова, Т.Ф. Методическое руководство. Микробиологический контроль качества лекарственных средств/ Т.Ф. Одегова, О.В. Гунар// Пермь, Изд. ПГФА, 2008. –68с.

5. Arakawa K., Kawai Y., Fujitani K., Nishimura J., Kitazawa H. Bacteriocin production of probiotic Lactobacillus gasseri LA39 isolated from human feces in milk-based media// Animal Science Journal. 2008. - Vol. 79, Issue 5.- P. 634 - 640.

6. Ивахненко Е. Л. Оценка микробиологической чистоты мягкой лекарственной формы с катиазином / Е. Л. Ивахненко, О. П. Стрилец, Л. С. Стрельников, С. П. Кустова // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье» — Курск, 2013. — № 2. – С. 102 – 105.

7. Стрилец О. П. Исследование влияния вспомогательных веществ на технологические свойства новых комбинированных антигипертензивных препаратов в форме таблеток / О. П. Стрилец, Л. С. Стрельников // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – Курск, 2013. — № 2. – С. 125-130.