Количественное определение общих липидов в сыворотке крови. Описание. Спектрофотометр.
2. Количественное определение b-липопротеидов в сыворотке крови. Описание. Спектрофотометр.
3. Реакции на лецитин. Практикум. Верболович П.А. 1973. раб. 225 (3).
Количественное определение b - липопротеидов в сыворотке крови
Принцип метода: Бета-липопротеины осаждают всыворотке с помощью гепаринового реактива. Образующуюся мутность фотометрируют, калибровку проводят определяя содержание холестерина в осадке бета-липопротеинов. Среднее содержание холестерина в бета-липопротеинах около 47 %.
Референтные величины:
бета-липопротеины г/л - до 3,4 Проведение анализа
Длина волны 580-600 нм Кювета 1 см
Температура с +15 до +25С
В пробирке смешивают рабочий раствор в соотношении 50+1 с сывороткой проба и энергично встряхивают)напр. 2,5 мл рабочего раствора смешивают с 0,05 мл сыворотки). Через 15 минут снова интенсивно встряхивают и измеряют оптическую плотность пробы А против дистиллированной воды.
Расчет
С
Калибровочный фактор F = 0,823 ____
А
Количественное определение общих липидов в сыворотке крови.
Референтные величины: (нтБ) С- общие липиды г.л 4-8)
Проведение анализа. Длина (510-550) нм. Кювета 1 см. температура +15 до +25 С
В трех пробирках смешивают серную кислоту конц. (ч.д.а.) в соотношении 75+1 с сывороткой (проба), реактивом 1 (стандарт) или дистиллированной водой, (контрольный раствор), перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане (напр. 1,5 мл серной кислоты конц. (ч.д.а) и 0, 02 мл сыворотки, реактив 1 или дистиллированной воды. После охлаждения пробирок проточной водой смешивают гидролизат с реактивом 2 в объемном соотношении 1 + 15 и оставляют стоять 50 мин. при температуре (с +15 до +25) С (например 0,1 мл гидролизата пробы, и 1,5 мл реактива 2). Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы А1 и стандарта А2 против контрольного раствора.
| Отмерить мл | Проба | Стандарт | Контрольный раствор | |
| Сыворотка Реактив 1 Кислота серная конц. | 0,02 - 1,59 | - 0,02 1,50 | - - 1,50 | |
| Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют. | ||||
| Гидролизат Реактив 2 | 0,10 1,50 | 0,10 1,50 | 0,10 1,50 | |
| Перемешивают и оставляют стоять 50 минут при +15 до +25 С. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы А 1 стандарта А 2 против контрольного раствора | ||||
Расчет А1
Общие липиды (г./л) = 8_________
А2
Рубежный контроль: Основные вопросы темы:
1. Важнейшие липиды тканей. Основные фосфолипиды и гликолипиды тканей человека.
2. Строение и биологические функции липидов.
3. Резервные и структурные липиды.
4. Переваривание жиров, всасывание продуктов гидролиза, роль желчных кислот.
5. Состав, строение и физиологическая роль транспортных липопротеидов крови.
6. Нарушение переваривания и всасывания липидов.
7. Ресинтез триацилглицеринов в стенке кишечника.
8. Обмен жирных кислот. Бета-окисление как специфический путь катаболизма жирных кислот, его физиологическое значение. Карнитиновый челночный механизм транспорта жирных кислот в митохондрии.
9. Биосинтез жирных кислот.
10. Особенности биосинтеза жиров в печени и жировой ткани.
11. Резервирование и мобилизация жиров.
12. Регуляция и физиологическая роль резервирования и мобилизации жиров.
13. Нарушение этих процессов при ожирении.
14. Синтез, использование и физиологическое значение кетоновых тел.
15. Эйкозаноиды и их роль в регуляции метаболизма и физиологических функции. Перекисное окисление липидов, роль возникновении мембранных патологии. Антиоксиданты.
16. Обмен стероидов.
17. Представление о биосинтезе холестерина, регуляция этого процесса. Включение холестерина в ЛПОНП.
18. Синтез желчных кислот. Выведение холестерина и желчных кислот из организма.
19. Гиперхолестеринемия, причины ее возникновения. Внутрисосудистый липолиз.
20. Биохимия атеросклероза.
21. Механизм развития желчнокаменной болезни. Биохимические основы лечения атеросклероза и желчекаменной болезни.
22. Представление о биосинтезе и катаболизме фосфолипидов и гликолипидов.
23. Понятие о сфинголипидозах.
Вопросы СРС
1. Особенности обмена отдельных аминокислот (цистеина, гистидина, триптофана, валина и др.)
2. Биогенные амины.
3. Окисление биогенных аминов (моноаминоксидазы), ингибиторы МАО.
4. Роль гистамина в развитии воспаления и аллергических реакций. Антигистаминные препараты.
