Этапы репродукции вирусов. Бактериофаги, строение, взаимодействие с чувствительной клеткой. Практическое применение бактериофаг.

Репродуктивный цикл вирусов.

• Адсорбция в клетке.

• Проникновение в клетку.

• Раздевание и высвобождение нуклеиновой кислоты.

• Синтез компонентов дочерних популяции

• Сборка дочерней популяции

• Выход дочерней популяции из клетки.

Первая стадия репродуктивного цикла — адсорбция вириона на поверхности инфицируемой клетки. Адсорбция происходит путём взаимодействия вириона со специфическими клеточными рецепторами.

«Голые» вирусы проникают в клетку путём эндоцитоза — погружения участка клеточной мембраны в месте их адсорбции. Иначе этот процесс известен как виропексис [вирус + греч. pexis, прикрепление]. «Одетые» вирусы проникают в клетку путём слияния суперкапсида с клеточной мембраной при участии специфических F-белков (белков слияния). Кислые значения рН способствуют слиянию вирусной оболочки и клеточной мембраны.

При проникновении «голых» вирусов в клетку образуются вакуоли (эндосомы). После проникновения «одетых» вирусов в цитоплазму происходит частичная депротеинизация вирионов и модификация их нуклеопротеида (раздевание). Модифицированные частицы теряют инфекционные свойства, в ряде случаев изменяются чувствительность к РНКазе, нейтрализующему действию антител (AT) и другие признаки, специфичные для отдельных групп вирусов.

После депротеинизации вирусы невозможно выделить из культуры клеток. Этот этап репродукции известен как теневая фаза, или фаза эклипса [от англ. eclipse, затмение].

Она включает репликацию нуклеиновых кислот вируса и синтез вирусных белков. Теневая фаза не происходит при температуре 0-4 °С (исключая вирус гриппа). Различия в энергетических потребностях для теневой фазы разных групп вирусов указывают на возможное участие в этом процессе различных клеточных реакций. Теневая фаза заканчивается после образования составных компонентов вируса, необходимых для сборки дочерних популяций.

Образование дочерних вирусных частиц в заражённой клетке подразумевает необходимость трёх процессов:

1) экспрессия генетического материала в виде его транскрипции и последующей трансляции, что приводит к появлению вирусных белков;
2) синтез генетического материала вируса (репликация);
3) сборка из генетического материала и вирусных белков дочерних популяций.

Бактериофаги -это вирусы, паразиты, спутники бактерий. Естественной средой обитания фагов является бактериальная клетка. Фаги распространяются всюду,где есть бактерии. Фаг(лизирующий, пожирающий) – явление бактериографии- явление лизиса бактерий пр принципу специфичности. Взаимодействие фага+клетка(бактерии) строго специфично, т.е. бактериофаги способны инфицировать только определенные виды и фаготипы бактерий. Этапы взаим.фаг и бактерий. Различают: 1.вирулентные фаги, способные вызывать продуктивную форму процесса.2.умереннные – вызывают редуктивную фаговую инфекцию, когда геном фага внедряетсяв хромосому клетки хозяина(ДНК в ДНК), фаг превращается в профаг. Это процесс лизогении. Если в этом случае клетка приобретае новые наследуемые признаки, такую форму изменчивости бактерий называют лизогенной конверсией. БК несущую в своем геноме профаг называют лизогенной, поскольку профаг при нарушении синтеза особого белка-репрессора может перейти в литический цикл развития, и вызывать продолжительную инфекцию с лизисом бактерии. Умеренные фага играют большую роль в обмене ген.материалом между бактериями трансдукции(способность выработать экзотоксин способен только тот возбудитель дифтерии, в хромосому которого интегрирован умеренный профаг, несущий ген- тох, который отвечает за синтез дифтерийного токсина, а утрата этого гена приводит к потере способности выработать токсин). По спектру действия бактериофаги делятся: на поливалентные- лизируют близкородственные бак, моновалентные- лизируют бактерии 1говида; типоспецефические – лизируют только определенные фаговары возбудителя. Практич.использование бактериофагов.1) для идентификации МО (опред.фаготипа); 2)для фагопрофилактики в очагах инфекции; 3)для фаготерапии;4)для оценки санит.состояние окр.среды и эпидимиолог.анализа. бактериофаги выпускаются в таблетках, растворах(ампулы, флаконы). Имеют ряд преимуществ перед антибиотиками:специф.действия,отсутствие побочных реакций, возник.устойчмвости, но применении бактериофагов с лечебной целью.

Методы лабораторной диагностики инфекционных заболевании(перечислить). Микроскопический метод: … Общее увеличение и предельная разрешающая способность микроскопа.

Методы: микроскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергический

Темнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые бактерии. Для темнопольной микроскопии используют темнопольный конденсор, выделяющий контрастирующие структуры неокрашенного материала. Перед началом работы свет устанавливают и центрируют по светлому полю, затем светлопольный конденсор удаляют и заменяют соответствующей системой (например, ОИ-10 или ОИ-21). Препарат готовят по методу «раздавленной капли», делая его как можно более тонким (толщина покровного стекла не должна быть толще 1 мм). Наблюдаемый объект выглядит как освещенный на тёмном поле. При этом лучи от осветителя падают на объект сбоку, а в линзы микроскопа поступают только рассеянные лучи. В качестве иммерсионной жидкости пригодно вазелиновое масло.

Фазово-контрастная микроскопия позволяет изучать живые и неокрашенные объекты за счёт повышения их контрастности. При прохождении света через окрашеные объекты происходит изменение амплитуды световой волны, а при прохождении через неокрашенные — фазы световой волны, что используют для получения высококонтрастного изображения в фазово-контрастной и интерференционной микроскопии. Для повышения контрастности фазовые кольца покрывают металлом, поглощающим прямой свет, не влияя на сдвиг фазы. В оптической системе микроскопа применяют специальный конденсор с револьвером диафрагм и центрирующим устройством; объективы заменяют на иммерсионные объективы-апохроматы.

Метод люминесцентной микроскопии основан на способности некоторых веществ светиться при воздействии коротковолнового излучения. При этом испускаемые световые волны длиннее волны, вызывающей свечение. Иными словами, флюоресцирующие объекты поглощают свет одной длины волны и излучают в другой области спектра. Например, если индуцирующее излучение синее, то образующееся свечение может быть красным или жёлтым. Эти вещества (флюоресцеин изоцианат, акридиновый оранжевый, родамин и др.) используют как флюоресцирующие красители для наблюдения флюоресцирующих (люминес-цирующих) объектов.

Просвечивающий электронный микроскоп (рис. 11-7) состоит из колонны, через которую в вакууме проходят электроны, излучаемые катодной нитью. Пучок электронов, фокусируемый кольцевыми магнитами, проходит через подготовленный образец. Характер рассеивания электронов зависит от плотности образца. Проходящие через образец электроны наблюдают на флюоресцирующем экране и регистрируют при помогли фотопластинки. Сканирующий электронный микроскоп применяют для получения трёхмерного изображения поверхности исследуемого объекта.

Иммерсионный метод, метод определения показателей преломления мелких (до 0,001-0,002 мм) зёрен твёрдых тел под микроскопом. В И. м. исследуемые зёрна погружают в нанесённые на предметное стекло капли различных жидкостей с известными показателями преломления n. Наблюдая в микроскоп эти препараты, подбирают жидкость, наиболее близкую по n к данному веществу. Точность И. м. порядка 0,001; существенно, что форма и характер поверхности исследуемого зерна в И. м. почти безразличны. И. м. используют в химическом анализе (так называемом иммерсионном анализе) для установления чистоты соединений и определения соотношения компонентов в смесях веществ. И. м. широко применяется при изучении минералов и горных пород, а также в некоторых отраслях химической технологии.

Общее увеличение, даваемое микроскопом, определяется произведением увеличение окуляра и объектива (например, если объектив дает увеличение 20х, а окуляр— 15х, то общее увеличение микроскопа — 300х).

Предельная разрешающая способность достигается при возможно более всестороннем освещении объекта. Вследствие этого в современных микроскопах для освещения объекта применяются специальные конденсоры, дающие широкие пучки лучей. Предельная разрешающая способность достигается при увеличении микроскопа, равном около 1000.