Химический анализ (качественные реакции).

Для установления подлинности лекарственного растительного сырья используются простейшие качественные реакции и хроматографические пробы на основные действующие или сопутствующие вещества, которые изложены в НД на исследуемый вид сырья, в разделе «Качественные реакции».

По технике выполнения и характеру получаемых результатов химические реакции, применяемые для установления подлинности лекарственного растительного сырья, можно разделить на несколько групп:

Качественные реакции, для проведения которых готовят водные извлечения (реже с добавлением щелочи, кислоты или с использованием органического растворителя) из исследуемого сырья, позволяют открыть наличие того или иного вещества. Результаты реакции наблюдают при добавлении реактива к полученному извлечению. Качественные реакции могут быть двух типов:

1) на действующие вещества (алкалоиды, гликозиды, сапонины, дубильные вещества и др.) например:

Дубильные вещества обнаруживают при реакции с 1% раствором железоаммониевых квасцов (образуется черно-синее или черно-зеленое окрашивание).

Сапонины легко обнаруживаются по образованию стойкой пены при энергичном встряхивании водного отвара.

Алкалоиды открывают в уксуснокислых извлечениях (1-5% растворе уксусной кислоты) по образованию красно – или оранжево-бурого осадка с реактивом Драгендорфа – капельная реакция.

Инулин открывают по реакции Молиша. На соскоб или порошок наносят 1-2 капли спиртового раствора альфанафтола или тимола и одну каплю концентрированной серной кислоты. При наличии инулина образуется характерное фиолетовое или синее окрашивание.

Антрагликозиды открываются по реакции со щелочью появляется кровавокрасное окрашивание.

Слизь определяют следующим образом: на предметное стекло помещают порошкованное сырье, добавляют несколько капель туши. Слизь заметна в виде бесцветных масс на черном фоне.

 

2) на сопутствующие вещества (запасные питательные вещества, пигменты и др.), имеющие диагностическое значение для отдельных видов лекарственного сырья, например:

Крахмал открывают по реакции с раствором Люголя. При соприкосновении с йодом крахмальные зерна окрашиваются в синий цвет. Окраска исчезает при нагревании. Приготовленный препарат надо исследовать тотчас, так как окраска держится недолго.

Жиры (жирное масло) определяют по реакции с Cуданом III, который окрашивает их в оранжево-красный цвет.

Белок определяют, используя одну из двух реакций:

1) биуретовая реакция — под воздействием водного раствора медного купороса и едкой щелочи белки окрашиваются в фиолетовый цвет,

2) ксантопротеиновая реакция — под воздействием крепкой азотной кислоты белок желтеет, желтизна усиливается до оранжевого цвета.

 

Гистохимические реакции – это такие реакции, с помощью которых можно выявить те или иные соединения непосредственно в клетках и структурах, где они локализуются, а также дифференцировать анатомические структуры. Гистохимические реакции проводят на срезах свежего или фиксированного особыми способами материала. В некоторых случаях можно пользоваться высушенным растительным материалом. Результаты реакции наблюдают под микроскопом, вначале при малом увеличении, а затем – при большом. Наиболее четкие результаты получаются, когда в итоге реакции образуется нерастворимое соединение. Если же при взаимодействии реактива с изучаемым соединением образуются растворимые продукты, то реакцию необходимо проводить очень быстро и наблюдать ее результаты в момент проведения или сразу же после нанесения реактива, пока не началась диффузия.

Примером гистохимической реакции может служить реакция на одревесневшую клетчатку, которую обнаруживают по реакции с флороглюцином и соляной кислотой. На предметное стекло помещают объект и наносят 1% спиртовой раствор флороглюцина, через 1-3 минуты добавляют каплю концентрированной соляной или серной кислоты. Одревесневшие элементы приобретают вишнево-красное окрашивание.

 

Микрохимические реакции ставят перед собой задачу только открытие того или иного вещества. Обычно проводят с порошкованным сырьем, часто одновременно с микроскопическим анализом, наблюдая их результаты под микроскопом, что во много раз повышает чувствительность реакции.

Примером микрохимической реакции может служить реакция на берберин с соляной кислотой. Для этого поперечный срез или порошок корня барбариса помещают на предметное стекло в каплю 2% соляной кислоты. Через 1-2 минуты под микроскопом наблюдают сростки желтых игольчатых кристаллов гидрохлорида берберина.

Сублимация (микросублимация) – выделение из растительного материала веществ, которые легко возгоняются при нагревании. После этого проводят качественную реакцию (или микрохимическую) с сублиматом.

Сублимацию проводят в сухой пробирке. Помещая в пробирку измельченный растительный материал, необходимо предварительно защитить стенки пробирки от растительной пыли, для чего внутрь опускают полоску бумаги, свернутую трубочкой. Насыпав исследуемый порошок в пробирку, вынимают из нее бумагу и проводят сублимацию, нагревая над пламенем горелки только нижнюю часть пробирки. Пробирку при этом держат наклонно, чтобы пары сублимата конденсировались на ее холодных стенках. После охлаждения пробирки, держа ее горизонтально за зону сублимата, помещают каплю реактива и слегка покачивают пробирку, чтобы смыть реактивом сублимат. Наблюдают соответствующее окрашивание.

При проведении микросублимации измельченный растительный материал (порошок) нагревают на предметном стекле. Для этого на предметное стекло предварительно кладут стеклянное кольцо высотой 1-1,5 см и диаметром 2 см, в него помещают небольшое количество растительного материала (0,1- 0,2 г), накрывают другим предметным стеклом и нагревают. Сублимат конденсируется на верхнем предметном стекле. Полученный сублимат исследуют под микроскопом (биологическим, люминесцентным или поляризованным), после чего можно провести микрохимическую реакцию с соответствующим реактивом.

Доброкачественность. Под доброкачественностью лекарственного растительного сырья понимают его соответствие фармакологическим требованиям нормативной документации. Доброкачественность ЛРС определяется его чистотой, нормальной влажностью и зольностью, отсутствием плесени и амбарных вредителей, степенью измельченности, надлежащим количеством действующих веществ.

Чистота лекарственного растительного сырья, в свою очередь, определяется по отсутствию недопустимых примесей. Допустимые примеси не должны превышать определенных норм.

Определение измельченности:

 

Пробу сырья помещают на сито, указанное в НД на конкретное сырье, и плавными вращательными движениями просеивают. Пробу сырья не помещающуюся на сите, просеивают порциями. Просеивание считается законченным, если количество сырья, прошедшего сквозь сито, при дополнительном просеивании в течение 1 минуты, составляет менее 1% от сырья оставшегося на сите.

Для цельного сырья частицы, прошедшие сквозь сито, взвешивают и вычисляют их процентное содержание к массе аналитической пробы.

Для просеивания резанного, дробленого, порошкованного сырья берут два сита. Пробу помещают на верхнее сито и просеивают. Затем отдельно взвешивают сырье, оставшееся на верхнем сите и прошедшее сквозь нижнее сито, и вычисляют процентное содержание частиц, не прошедших сквозь верхнее сито, и частиц, прошедших сквозь нижнее сито, к массе аналитической пробы. Взвешивание проводят с погрешностью ± 0.1г при массе аналитической пробы свыше 100 г, и ± 0.05г при массе аналитической пробы 100г и менее.

Определение содержания примесей:

 

Оставшуюся после отсева на сите часть аналитической пробы (для цельного сырья) или сход с верхнего и нижнего сит (для измельченного сырья) помещают на гладкую чистую поверхность и лопаточкой или пинцетом выделяют примеси, допускаемые в НД на конкретное сырье.

Обычно к примесям относят:

- части сырья, утратившие окраску, присущую данному виду (побуревшие, почерневшие, выцветшие и т.д.);

- другие части этого растения, не соответствующие установленному описанию сырья;

- органическую примесь (части других неядовитых растений);

- минеральную примесь (земля, песок, камешки).

Одновременно обращают внимание на наличие амбарных вредителей.

Каждый вид отобранной примеси взвешивают по отдельности с погрешностью не более ±0,1г при массе аналитической пробы не более 100г и не более ±0,05г при массе аналитической пробы менее 100г.

Содержание каждого вида примесей в процентах (Х) вычисляют по формуле

 

где m – масса примеси, m₁ – масса аналитической пробы.