Определение массовой доли белковых веществ

Полумикрометодом

Метод основан на окислении органического вещества при сжигании его в концентрированной серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом обратного титрования.

Белковые вещества определяют, умножая количество общего азота на коэффициент 6,25.

Оборудование и реактивы: весы аналитические класса 2 с пределами измерения от 0 до 200 г; электроплитка бытовая или газовые горелки; холодильник шариковый; воронка капельная; бюретка вместимостью 50 см³ с делениями на 0,1 см³; каплеуловитель; колбы для сжигания, вместимостью 100 см³; колба мерная вместимостью 100 см³; колбы плоскодонные или круглодонные вместимостью от 500 до 700 см³; колбы плоскодонные вместимостью от 250 до 300 см³; капельница; вода дистиллированная; кислота серная концентрированная и раствор 0,01 моль/ дм³ (0,02 н); натрия гидроксид, раствор 330 г/ дм³ (33 %-ный) прокипяченный и раствор 0,02 моль/ дм³ (0,02 н); медь сернокислая 5-водная; калий сернокислый; метиловый красный, раствор 0,2 г/ дм³ (0,02 %-ный); растворяют 0,02 г метилового красного в 100 см³ спирта 600 г/ дм³ (60 %-ного); индикатор смешанный (Таширо).

Проведение анализа. Испытаний. Навеску исследуемого продукта массой от 0,2-0,3 г (при исследовании продуктов с повышенным содержанием воды навеску увеличивают до 3 г, жидкой навески берут 5 г) взвешивают с абсолютной погрешностью не более 0,0005 г в закрытую с одной стороны трубочку из фильтровальной бумаги, помещают в колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) вместимостью 100 см³, добавляют несколько кристаллов медного купороса и приливают от 10 до 20 см³ концентрированной серной кислоты плотностью 1840

кг/ м³.

Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть, после чего добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми. Это достигается осторожным взбалтыванием содержимого колбы для смывания со стенок темных обугленных частиц пробы.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и осторожно количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³. Из полученного раствора отбирают пипеткой 10 см³ жидкости и через воронку вносят в колбу прибора для отгонки аммиака, смывая остаток с воронки дистиллированной водой.

Отгонку аммиака водяным паром ведут в приборе, приведенном на рис. 2.2.

Рисунок 3.2. Прибор для отгонки: 1 - парообразователь; 2 - предохранительный клапан; 3 – воронка; 4 – колба-смеситель; 5 – холодильник; 6 – колба-приемник.

Приемником служит коническая колба 6, в которую наливают из бюретки 25-30 см³ раствора серной кислоты 0,01 моль/ дм³ и опускают в нее конец трубки холодильника 5. Затем закрывают нижнее отверстие предохранительного сосуда 2. Через воронку 3 наливают в колбу-смеситель 4 5-6 см³ раствора гидроксида натрия 330 г/ дм³; воронку 3 заменяют стеклянной палочкой или применяют зажим Мора и затем пускают пар.

Отгонку с водяным паром продолжают до тех пор, пока в приемную колбу не отгонится от 50 до 60 см³ жидкости. По окончании отгонки конец холодильника обмывают дистиллированной водой, собирают воду в приемник и титруют избыток серной кислоты раствором 0,02 моль/ дм³ гидроксида натрия в присутствии индикатора.

Массовую долю общего азота в процентах вычисляют по формуле:

, (3.4)

где - объем раствора гидроксида натрия 0,02 моль/ дм³, пошедший на титрование серной кислоты в контрольном анализе, см³; - объем раствора гидроксида натрия 0,02 моль/ дм³, пошедший на титрование серной кислоты в рабочем анализе, см³; - коэффициент пересчета на точный раствор гидроксида натрия, 0,02 моль/ дм³, г; 0,0028 - количество азота эквивалентное 1 см³ гидроксида натрия 0,02 моль/ дм³, г; - навеска исследуемой пробы, г; 6,25 – коэффициент пересчета азота на белковые вещества; - объем, в котором растворена сожженная навеска, см³; - объем раствора, взятый для отгонки, см³.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.