Различают реакции, в которых по известным антителам определяют неизвестные антигены, и реакции, направленные на поиск неизвестных антител по известным антигенам. Перспективны методы, основанные на обнаружении в ранний период болезни микробных антигенов в различных субстратах.
Поиска антигена:
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) с антительным эритроцитарным диагностикумом, которая применяется для диагностики дизентерии и некоторых других инфекций. При этой реакции находящийся на поверхности танизированных эритроцитов специфический иммуноглобулин связывается с гомологичным антигеном. Эритроциты человека и животных (нативные и формалинизированные), предварительно обработанные танином, приобретают повышенную способность адсорбировать на своей поверхности белковые субстанции. В качестве адсорбентов кроме эритроцитов используются латекс, коллодий, бентонит и др.
Реакция латекс-агглютинации применяется для выявления антигенов пневмококков, палочки инфлюэнцы, менингококков. При положительной реакции частицы латекса выпадают в осадок.
РИФ (р-я Кунса) позволяет непосредственно наблюдать происходящую реакцию в люминесцентный микроскоп и, следовательно, судить о наличии и локализации антигена.
Прямой ИФА = ELISA (enzymelinked immunosorbent assay) Антитела, связывающиеся с искомым антигеном, помечены ферментом, который делает видимым краситель.
Поиск антител:
используется для постановки ретроспективного диагноза, так как такие реакции становятся положительными к концу 1—2-й недели болезни. В дальнейшем их титр обычно нарастает, что является в диагностическом отношении очень важным показателем. Поэтому серологические реакции рекомендуется повторять с интервалом в 5—10 дней. Реакции считаются положительными в том случае, если титр их повышается при повторном исследовании в 4 раза и более. Однако при длительном заболевании (бруцеллез, туляремия, хроническая пневмония) динамика серологических реакций менее отчетлива, поэтому приходится ориентироваться на высоту титра антител. Диагностическую ценность имеют лишь определенные уровни антител. Например, для диагностики кишечных инфекций в РНГА значение имеет титр 1:320—1:640 и выше (сальмонеллезы, дизентерия). При этом необходимо учитывать эпидемическую обстановку в данной местности и принимать во внимание «нормальный» уровень антител у здорового населения. В РНГА, которая используется для поиска антител, при адсорбции на эритроцитах применяются не иммуноглобулины, а полисахаридные или белковые антигенные субстанции. Такие эритроцитарные диагностикумы называют антигенными. Помимо реакций агглютинации в диагностике бактериальных инфекций используют РСК, реакцию непрямого гемолиза, реакцию непрямой иммунофлуоресценции, непрямой иммуноферментный метод, реакцию нейтрализации и другие серологические методы.
Для более объективной оценки результатов серологических исследований используют дифференцированное исследование антител различной физико-химической природы. Антитела одной и той же иммунологической специфичности могут принадлежать к различным классам иммуноглобулинов и вследствие этого качественно отличаться по функциональной активности.
12. Биологические методы диагностики инфекционных болезней.
состоит в заражении различным материалом (клиническим, лабораторным) лабораторных животных для индикации возбудителя, а также для определения некоторых свойств микроорганизмов, характеризующих их патогенность (токсигенность, токсичность, вирулентность). В качестве лабораторных животных используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов и др.
Воспроизведение заболевания у животного -- абсолютное доказательство патогенности выделенного микроорганизма (в случае бешенства, столбняка и др.). Поэтому биологическая проба на животных является ценным и достоверным диагностическим методом, особенно при тех инфекциях, возбудители которых в исследуемых биологических средах организма человека содержатся в малых концентрациях и плохо или медленно растут на искусственных средах.
Классический метод при ботулизме — биологическая проба на мышах. Для опыта отбирают партию из 5 животных. Первое заражают только исследуемым материалом, остальных — исследуемым материалом с введением 2 мл 200 ME антитоксической сыворотки типов А, В, С и Е. При наличии в материале токсина выживает животное, получившее антисыворотку, нейтрализовавшую токсин соответствующего типа. Для идентификации токсинов также используют РПГА с антительным диагностикумом (эритроциты, сенсибилизированные антитоксинами соответствующих типов).
Биологическая проба представляет «золотой стандарт» в диагностике туберкулёза. Морским свинкам подкожно или внутрибрюшинно вводят 1 мл исследуемого материала (например, мокрота, отделяемое свищей и т.д.).Через 1-2 мес развивается генерализованная инфекция туберкулеза с летальным исходом.
