1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Способ может быть применен ко всем образцам меда.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Единицей активности, диастаза блока Готе, определяется как количество фермента, которое будет
преобразовать 0,01 грамм крахмала в установленном конечной точки в течение часа при 400 ° в условиях
Тест. Результаты выражены в Готе единиц (или единиц) SCHADE на грамм меда.
3. ПРИНЦИП
Стандартного раствора крахмала, способны развивать, йодом, цвет в определенном диапазоне
Интенсивность, действует с помощью фермента в образце при стандартных условиях. Уменьшение в
синий цвет измеряется интервалом. Участок поглощения от времени, или регресс
Уравнение, используется для определения времени TX, необходимое для достижения указанной поглощения, 0,235 *.
Диастаза Количество рассчитывается как 300, деленное на TX, предложен способ следует точно. Это
Метод основан на оригинальной работы Шаде и др (1), модифицированный Хадорн и Zürcher (2) и
Белый и Pairent (3), как представлено с помощью метода Codex Alimentarius.
* - Примечание: метод немецкий DIN использует 0,301 как фактор поглощения.
4. РЕАГЕНТЫ
Раствора хлорида натрия: растворить 2,9 г хлорида натрия в воде и разбавляют до 100 мл.
Ацетатного буфера (рН 5,3): растворить 43.5g ацетата натрия
(СН3. COONa. 3 Н2О) в воде, доведени рН раствора до 5,3 с примерно 5 мл ледяной
уксусной кислоты и разбавляют до 250 мл водой.
Крахмал решение:
а). Определение крахмала сухого веса:
Распространение примерно 2 г воздушно-сухой растворимый крахмал в тонком слое на дно взвешивания бутылка (диаметр 5 см, высота 3 см) с крышкой.
Точно взвесить (± 0,1 мг) и сухой в течение 90 минут при 130 ° С.
Дайте закрытой бутылке взвешивания остыть в течение приблизительно 1 часа в эксикаторе и повторно взвешивают точно.
б). Подготовка раствора крахмала:
Взвешивание в 250 мл конической колбе количество крахмала, которое эквивалентно 2,000 г безводного крахмал. Добавить 90 мл воды и перемешать закрученного. Принесите подвеска быстро до кипения, встряхните колбы постоянно и варить на медленном огне 3 минуты. Сразу передачи горячего раствора до 100 мл мерная колба. Охладить быстро до комнатной температуры в проточной воде, составляют до объема воды и тщательно перемешать.
Примечание:
Решение должно быть сделано в день использования.
Используйте только растворимый крахмал получают прозрачный синий раствор (см пункт "Калибровка крахмала Решение").
Йод раствор: растворить 11,0 г дважды сублимированного иода и 22,0 г йодида калия в
От 30 до 40 мл воды и разбавьте до 500 мл. Исходный раствор может храниться в течение приблизительно 1 года
в закрытом, темном бутылки.
Йод раствор, развести: растворить 20,0 г йодистого калия в воде, добавить 2 мл йода складе
Решение и разбавить до 500 мл. Это разбавленный раствор иода должно быть сделано в день использования и
должны быть защищены от как можно больше воздуха, сразу закрытия колбу после использования.
5. ОБОРУДОВАНИЕ
Все оборудование должно быть свободно от моющих средств!
Ванна термостатируют воды (40,0 ± 0,2 ° С).
1 см спектрометр клетки.
Фильтр или спектрофотометр с небольшой группой помех фильтром установлен на 660 нм.
Таймер.
6. ПОРЯДОК
Подготовка образцов
При необходимости, подготовить мед в соответствии с разделом Отбор проб ВВЕДЕНИЕ И
Общие замечания по методам.
Определение
Взвешивают 10,0 г меда, подготовленном для отбора проб в стакан и полностью растворяются в
приблизительно в 15 мл воды и 5 мл ацетатного буфера без нагревания. Перенесите раствор
количественно в 50 мл мерную колбу, содержащую 3 мл раствора хлорида натрия и регулировать
Объем до метки водой (раствора образца).
Примечание:
Важно, что мед должен быть буферный до вступления в контакт с хлоридом натрия,
в качестве значений рН ниже 4,0, в присутствии хлорида натрия быстро уменьшить диастаза активность.
Тестовый образец может храниться в течение всего лишь нескольких часов. Поэтому готовить непосредственно перед
определение.
Калибровка раствора крахмала / Регулировка значение синего
Эта процедура выполняется для определения количества воды, которое должно быть добавлено к реакции
Смесь, так что поглощение диапазон йода раствор крахмала является 0,745 до 0,770.
Внести в 6 подходящих стеклянных флаконах или пробирках 20, 21, 22, 23, 24 и 25 мл воды и 5 мл
разбавить раствор йода.
Начиная с первой пробирке, добавить 0,5 мл смеси, содержащей 10 мл воды и 5 мл крахмала
Решение, хорошо перемешать встряхиванием и сразу читать оптическую плотность при 660 нм против воды
пробел в 1 см ячейке.
Проследует таким же образом с другими пробирках, пока оптической плотности в диапазоне 0.770 с до 0,745
получается.
Количество воды определяется таким образом, является стандартным для каждого разбавления определения осуществляется
с крахмальным раствором.
Примечание:
Время от добавления разбавленного раствора крахмала в определении оптической плотности
должно быть как можно более постоянным в калибровке, а также в определении диастазы деятельности
потому что интенсивность цвета зависит от времени. Если оптическая плотность менее 0,745 в первом
стадию разбавления (20 мл) или выше, чем поглощение 0,770 в последней стадии разбавления (25 мл) получают,
крахмал не подходит для этого метода определения диастазы активности.
Определение в растворе образца меда
Пипеток 10 мл раствора меда в колбу 50 мл и поместите его в C водяной бане 40 ° с секунду
Колбу, содержащую около 10 мл раствора крахмала. Через 15 минут, пипетки 5 мл раствора крахмала в
мед решение, перемешать и запустить таймер. Периодически, в первый раз после 5 минут,
удалить 0,5 мл аликвоты и быстро добавить в 5 мл разбавленного раствора йода. Добавьте количество воды,
(как определено в "Калибровка раствора крахмала"), хорошо перемешать и сразу же читать
Поглощение каждой отдельной раствора при 660 нм против воды в заготовке в 1 см ячейке.
Примечание:
Интервалы после первого удаления из реакционной колбы должны быть рассчитаны таким образом, что от 3 до 4
Значения получены в диапазоне оптических плотностей двух 0,456 0,155 и (линейный диапазон).
В следующей таблице приведены значения временных интервалов:
Если плотность при Т = 5 мин меньше, чем 0.350 рекомендуется времени реакции для
первое измерение сводится соответствующим образом.
Реакция пустым
Добавьте 10 мл раствора образца, приготовленные по "Подготовка испытательных образцов" в 5 мл воды
и тщательно перемешать. Удалить 0,5 мл этого раствора и добавить к 5 мл разбавленного раствора йода. Добавить
количество воды определяется в "Калибровка раствора крахмала", хорошо перемешать и прочитать
Поглощение при 660 нм против заготовки воды в 1 см ячейке. Если есть поглощение это поле пустым
Значение должно быть вычтено из значений, полученных при «Определение исследуемого раствора".
7. РАСЧЕТ и выражение результатов
Диастаза активность рассчитывают как диастазы числа (DN) следующим образом:
Тх = время реакции в минутах, полученных следующим образом: -
При необходимости значения поглощения образцов растворов образцов приведены против
соответствующие времени реакции в минутах на прямолинейном бумаги после вычитания поглощения
пустое значение (см "пустое значение Control"). Линия регрессии проходит через измерения
точки в диапазоне А = 0,155 к 0,456 в целях определения времени TX для А = 0,235 *. Там
должно быть по крайней мере три точки в диапазоне поглощения 0,155 на 0,456. Время A = 0,235 банке
Также быть рассчитана из уравнения регрессии, и это обычно считается предпочтительным
Графический интерполяции.
* - Примечание: метод немецкий DIN использует 0,301 как фактор поглощения.
8. ТОЧНОСТЬ
Значения повторяемости (г) и воспроизводимости (R) были получены два межлабораторном
испытания:
а) В соответствии с DIN-10750 норме (4) из результатов по девять видов меда анализируемого всем
лаборатории, сотрудничающие в исследовании.
Они действительны с вероятностью 95%. Это означает, что, в среднем, в 20 проведения
определения одной выброс можно ожидать.
г = -1,4244 х 10-5 DN2 + 0,0241 х DN + 0,17999
R = 0,00682 х DN2 -0,237 х DN + 3,4906
б) межлабораторное испытание было проведено в 1992 году в 14 лабораториях ЕС (5,6) с Codex
Метод Алиментариус Шаде. Следующие гиг значения были рассчитаны на 9 меда с DN в
диапазон между 7,7 и 37,7:
Следующие корреляционные уравнения были рассчитаны из этих данных:
г = - 0721 + 0126 DN
R = - 0,0571 + 0587 DN
