ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов

ПЛАН

Актуальность

· Интерпретация результатов ИФА на определение маркеров ВГ

· Интерпретация результатов ПЦР на определение маркеров ВГ

Заключение

Литература

 

Актуальность

Современный этап называют "золотой эрой" изучения проблемы вирусных гепатитов. Благодаря использованию методов вирусологии, молекулярной биологии, генной инженерии, в частности рекомбинантной технологии, раскрылись новые горизонты понимания проблемы и дальнейшего ее изучения. Удостоенное Нобелевской премии открытие "австралийского антигена" (Blurnberg B.S., 1965) было первым в цепи блестящих исследований, сделавших неизвестное известным. Были открыты возбудители вирусных гепатитов -А, В, С. D. Е. Воплотилась давняя мечта клиницистов о раздельной специфической диагностике вирусных гепатитов разной этиологии не путем исключения или косвенных признаков, а на основе прямых исследований с использованием высокоспецифичных и высокочувствительных тест-систем. Метод иммуноферментного анализа (ИФА) стал достоянием широкой клинической и эпидемиологической практики. Разработка метода полимеразной цепной реакции, также удостоенная Нобелевской премии (Mulhs К., 1993). сделала доступной индикацию минимальных количеств вирусной ДНК (РНК) и стала арбитражным методом диагностики вирусных гепатитов. Использование новых методов исследования показа-то, что "гепатитный алфавит" еще далеко не исчерпан. Остается ниша вирусных гепатитов ни А, ни В, ни С, ни D, ни Е, вызываемых иными возбудителями.

 

ИФА – определение маркеров вирусных гепатитов

ИФА означает «иммуноферментный анализ». На внедрение любого микроорганизма иммунная система человека вырабатывает специальные белки крови — антитела. Они специфичны, то есть подходят к каждому микробу, а точнее к антигену микроба (его опознавательному знаку), как ключ к замку. Иммуноферментные анализы на гепатиты и другие инфекции основаны на реакции антиген—антитело, в результате которой в сыворотке крови обнаруживаются либо антитела (с помощью стандартных антигенов), либо антигены (с помощью стандартных антител) микроба.

Чувствительность этих анализов у нас приближается к 100% поскольку они делаются с использованием самого современного оборудования и высококачественных реактивов. Ниже приводится перечень анализов на различные формы вирусных гепатитов методом ИФА, которые можно сделать в нашем медицинском центре.

Вирус гепатита A (HAV)
Anti-HAV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgM
Anti-HAV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита A класса IgG
Вирус гепатита B (HBV)
HBs-Ag	антиген	Поверхностный антиген вируса гепатита B Синоним: Австралийский антиген
Anti-HBs	антитела	Суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B
HBe-Ag	антиген	Антиген оболочки вируса гепатита B
Anti-HBe	антитела	Суммарные антитела к антигену оболочки вируса гепатита B
HBc-Ag	антиген	Антиген ядра вируса гепатита B (core-антиген)
Anti-HBc	антитела	Суммарные антитела к антигену ядра вируса гепатита B
Anti-HBc IgM	антитела	Антитела к антигену ядра вируса гепатита В класса IgM
Вирус гепатита C (HCV)
Anti-HCV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита C
Anti-HCV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита C класса IgM
Вирус гепатита D (HDV)
Anti-HDV	антитела	Суммарные антитела к вирусу гепатита D
Anti-HDV IgM	антитела	Антитела к вирусу гепатита D класса IgM
Вирус гепатита E (HEV)
Anti-HEV IgG	антитела	Антитела к вирусу гепатита E класса IgG

 

ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов

Самый чувствительный и специфичный метод на сегодняшний день для диагностики гепатитов (равно как и любой другой инфекции) — это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Суть его состоит в выявлении самой чужеродной частицы (это могут быть как вирусы, так и любые другие виды микроорганизмов) даже в ничтожно малых количествах за счет повторного копирования в лабораторных условиях генетического набора микроорганизма. Это копирование состоит из нескольких циклов, которые многократно повторяются. Так за 20-30 циклов количество копий нужного фрагмента ДНК микроорганизма достигает нескольких миллионов, что позволяет обнаружить даже один вирус в одной клетке печени. Точность метода во многом зависит от того, насколько качественны реактивы. В нашем медицинском центре ПЦР диагностика инфекций отвечает самым современным требованиям науки и дает наиболее точные результаты. Кроме установления факта наличия вируса в крови важно определять его количество (так называемая вирусная нагрузка), поскольку от результатов этого анализа во многом зависит схема лечения и прогноз заболевания. Кроме того, важным показателем при выборе противовирусного лечения (в частности, гепатита С), его длительности и прогнозировании успеха, является определение генотипа вируса.

ПЦР анализ

Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

ПЦР обнаруживает наличие РНК ВГС в крови, что указывает на наличие активной инфекции. Этот тест является очень чувствительным, он позволяет измерять вирусную нагрузку всего порядка 50 МЕ/мл.

Метод разветвлённой ДНК (р-ДНК)

Этот метод количественного определения вирусной нагрузки (более простой и дешёвый) применяется для большого количества образцов, однако его чувствительность значительно ниже – он позволяет измерять вирусную нагрузку не менее 500 МЕ/мл. Это означает, что при таком тестировании ВГС может присутствовать в крови, но остаться незамеченным.

Метод транскрипционной амплификации (ТМА)

ТМА — технология позволяет обнаруживать нуклеиновые кислоты (компоненты генетического материала) в крови. С помощью этого теста можно измерять вирологические нагрузки порядка 5-10 МЕ/мл. Эта простая и дешёвая новая методика позволяет ускорить процесс тестирования и даёт надёжные и воспроизводимые результаты.