Лекции.Орг


Поиск:




Категории:

Астрономия
Биология
География
Другие языки
Интернет
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Механика
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Транспорт
Физика
Философия
Финансы
Химия
Экология
Экономика
Электроника

 

 

 

 


Лабораторное оборудование, используемое для микробиологических исследований




ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1

по курсу «Основы биотехнологии»

 

ПОДГОТОВКА ЛАБОРАТОРНОГО ОБОРУДОВАНИЯ И ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

 

Методические указания

 

Волгоград 2003

 

 

УДК 576.6:579.6

 

Методические указания к лабораторной работе по курсу «Основы биотехнологии»

/Cост. И.В.Владимцева, Т.В.Хохлова, О.В.Колотова, Л.В.Федотова

 

Волгоградский государственный технический университет.

Волгоград, 2003. - 12 с.

 

 

Методические указания включают сведения о методах подготовки лабораторной посуды к работе с микроорганизмами в стерильных условиях, видах питательных сред и методах стерилизации, применяемых в микробиологическом производстве.

 

 

Печатаются по решению редакционно-издательского Совета Волгоградского государственного технического университета.

 

Табл. 1. Библиография 6 назв.

 

Рецензент

д.т.н., проф. О. И. Тужиков

 

 

С Волгоградский

государственный

технический

университет, 2003

 

 

1. ЦЕЛЬ РАБОТЫ:

 

1) Ознакомиться с особенностями подготовки лабораторной посуды для работы с микроорганизмами в стерильных условиях. Подготовить пипетки, пробирки, флаконы и чашки Петри к стерилизации. Изготовить ватно-марлевую пробку.

2) Изучить принципы составления питательных сред для микробиологической работы. Приготовить физиологический раствор и плотную питательную среду для выращивания бактерий.

3) Ознакомиться с методами стерилизации посуды и питательных сред. Провести стерилизацию приготовленной питательной среды дробным методом.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ

Лабораторное оборудование, используемое для микробиологических исследований

 

Для работы с микроорганизмами в лабораторных условиях используют стеклянную посуду: пробирки, флаконы, колбы, бактериологические матрацы (плоские бутыли). Новая посуда часто имеет щелочную реакцию. Поэтому новое стекло заливают 1-2% соляной кислотой и кипятят в ней в течение 2 часов или выдерживают в автоклаве при 120º в течение 40 мин.. Посуда при такой обработке частично теряет щелочность и питательные среды. приготовленные в ней, не изменяют свою реакцию. Бывшую в употреблении посуду моют теплой водой с помощью ерша или щетки, после чего ополаскивают 2-3 раза дистиллированной водой и сушат. Лабораторная посуда после обработки должна быть прозрачной, нейтральной реакции, хорошо обеззаражена, высушена, без следов дезинфицирующих растворов и сильно действующих веществ (кислот, щелочей). Для работы в стерильных условиях посуду необходимо подготовить - укупорить ватно-марлевыми пробками (пробирки, флаконы, матрацы) или завернуть в плотную бумагу (чашки Петри, ампулы).

Ватно-марлевые пробки готовят следующим образом. На стол кладут продолговатую четырехугольную пластинку ваты соответствующей величины, загибают внутрь все четыре края (рис.1) так, чтобы получилась ленточка, по ширине равная длине пробки, и скатывают валик по диаметру пробирки или колбы. Валик должен быть достаточно плотным и не сминаться при нажатии. Пробку обертывают кусочком марли в один слой, края марли связывают над пробкой ниткой.

 

 

 

Рис.1. Скатывание ватно-марлевой пробки.

 

В микробиологической лаборатории широко пользуются стеклянными пипетками. Пипетки бывают пастеровские и градуированные. Первые не имеют делений, и расчет жидкости при работе с ними ведется на капли; вторые имеют деления, и количество вытекающей из них жидкости определяется в миллилитрах и десятых долях миллилитра. Один конец пипетки широкий, другой – узкий. Для набирания жидкости и регулирования быстроты ее вытекания на широкий конец пипетки надевают резиновый шланг, снабженный грушей. Широкое отверстие пипетки закрывают ватным тампоном. Комочек ваты не должен быть очень плотным, но и не должен свободно двигаться в пипетке. Волокна ваты не должны торчать из-за края пипетки. Подготовленные пипетки по одной или по несколько штук заворачивают в бумажную ленту шириной 2,5 см, длиной до 70 см.

 

2.2. Сырье и питательные среды, применяемые в биотехнологии

 

Основным сырьем для микробного синтеза является углеродсодержащее сырье. Наиболее доступны для микроорганизмов моносахара, особенно гексозы (глюкоза, галактоза), многоатомные спирты (глицерин, маннит) и карбоновые кислоты. Низкомолекулярные спирты (метанол, этанол) также относятся к перспективному сырью для микробиологического синтеза. Некоторые виды микроорганизмов способны использовать в н-алканы и другие фракции нефти. Наибольшую рентабельность имеют биотехнологические производства, использующие ценные виды побочной продукции пищевой, химической, деревообрабатывающей, целлюлозно-бумажной промышленности: мелассу, молочную сыворотку, зерновую и картофельную барду, сульфитный щелок, гидрол, смесь карбоновых кислот и т.д. Особенно широко применяются меласса и гидрол – побочные продукты производства сахара и крахмала.

Питательная среда является сложной трехфазной системой, содержащей жидкие, твердые и газообразные компоненты. По составу среды подразделяют на две группы: естественные и синтетические. Естественными называют среды, которые состоят из продуктов животного и растительного происхождения и имеют сложный неопределенный химический состав. Их основа – различные части растений, животные ткани, солод, дрожжи, навоз, почва, вода морей, озер, минеральных источников. Большинство таких сред используют в виде экстрактов или настоев.

На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, поскольку в них имеются все компоненты, необходимые для роста и развития. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологических особенностей бактерий, поскольку не позволяют учесть потребление компонентов среды и выяснить какие вещества синтезируются микроорганизмами. Указанные недостатки связаны с тем, что состав естественных сред сложен и непостоянен, зависит от сырья и способа приготовления питательной среды. Это заметно влияет на рост микроорганизмов Естественные среды используют главным образом для поддержания культур микроорганизмов и накопления клеточной биомассы.

Синтетические питательные среды – это такие, в состав которых входят в точно указанных концентрациях только известные химически чистые соединения. Данные среды по составу часто бывают многокомпонентными и содержат сложный набор химических веществ. Синтетические среды широко используют для исследований, связанных с изучением обмена веществ микроорганизмов.

Существуют так называемые полусинтетические среды, относящиеся к средам с неопределенным составом. В них, наряду с соединениями известной химической природы, входят вещества неопределенного состава. Например, в мясопептонную среду, кроме сложных и неопределенных по химическому составу веществ (мясной бульон), иногда входят глюкоза или сахароза, хлорид натрия, фосфат калия. Полусинтетические среды широко используют в микробиологической практике для получения витаминов, антибиотиков, аминокислот и других продуктов жизнедеятельности микроорганизмов.

С.Н. Виноградским в практику микробиологии введены элективные, или избирательные, среды, предназначенные для определенных групп микроорганизмов. Зная физиологические особенности соответствующей группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования (состав, кислотность среды, температура, аэрация и т.д.), при которых будут развиваться представители лишь данной группы. Элективные среды позволяют вести биологические процессы в лаборатории и на производстве без предварительной стерилизации среды. Эти смеси применяются главным образом для выделения микроорганизмов из мест их естественного обитания.

Питательные среды могут быть различной консистенции: жидкие, плотные, полужидкие. Жидкие среды представляют водные растворы питательных веществ в определенной концентрации. Они применяются для выращивания биомассы микроорганизмов глубинным методом. Плотные питательные среды используют для учета количества бактерий, выделения чистой культуры и других целей. Такие среды готовят из жидких, добавляя 1,5-2,5% агар-агара или 10-15 % желатины. Агар-агар – это растительный коллоид, получаемый из некоторых морских водорослей. В его состав входят главным образом полисахариды. Желатина – кислый азотсодержащий продукт, получаемый при выварке костей и хрящей животных. Плотными средами могут служить также гелевые пластины.

При приготовлении полужидких сред, применяемых для определения физиологических особенностей микроорганизмов, например, подвижности, в жидкую основу среды вносят 0,2-0,5 % агар-агара.

 





Поделиться с друзьями:


Дата добавления: 2017-01-28; Мы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 3215 | Нарушение авторских прав


Поиск на сайте:

Лучшие изречения:

Два самых важных дня в твоей жизни: день, когда ты появился на свет, и день, когда понял, зачем. © Марк Твен
==> читать все изречения...

2282 - | 2105 -


© 2015-2025 lektsii.org - Контакты - Последнее добавление

Ген: 0.012 с.