Экспресс-тесты. В основе экспресс-тестов (рис.2) диагностики лежит метод иммунной хроматографии. Чувствительность данных тестов варьирует в пределах 20-50%.
Рис. 2 Экспресс-тест для диагностики хламидиоза
Бактериоскопический метод. Чувствительность данного метода применительно к обнаружению хламидий невысока, и составляет лишь 15-30%.
Серологические методы - РСК, ИФА, РИФ.
Молекулярно-биологические методы – полимеразная цепная реакция (ПЦР), лигазная цепная реакция (ЛЦР), метод ДНК-зондов и транскрипционной амплификации (ТА).
| Систематическое положение микоплазм согласно классификации Берджи, 2001 |
Микоплазмы
| |
| Домен | BACTERIA | |
| Тип | TENERICUTES | |
| Класс | MOLLICUTES | |
| Порядок | MYCOPLASMATALES | |
| Семейство | Mycoplasmataceae | |
| Род | Mycoplasma | Ureaplasma |
| Вид | M. gallisepticum, M. hominis, M. genitalium, M.haemofelis, M. hyopneumoniae, M. laboratorium, M. ovipneumoniae, M. pneumoniae | U. canigenitalium, U. cati, U. diversum, U. felinum, U. gallorale, U. loridis, U. parvum, U. urealyticum |
Микоплазма (Mycoplasma) -- род мелких аспорогенных, не имеющих ригидной клеточной стенки грам- хемоорганотрофных аэробных или анаэробных организмов из семейства Mycoplasmataceae.
Отличительные черты микоплазм:
1. Отсутствует клеточная стенка, микоплазмыне способны синтезировать её компоненты. Функции клеточной стенки у микоплазм выполняет трёхслойная цитоплазматическая мембрана, богатая холестерином, который сообщает ей некоторую ригидность, поэтому микоплазмы устойчивы к осмотическому лизису, что отличает их от дефектных по клеточной стенке форм – сферопластов и протопластов.
2. Из-за отсутствия формообразующего каркаса – клеточной стенки, микоплазмы плеоморфны и могут образовывать кокковидные, нитевидные, шаровидные, ветвящиеся формы, что обусловило их название от греч. mykes, гриб, + plasma, нечто имеющее форму.
3. Микоплазмы не способны к образованию холестерина и получают его из животных тканей или питательных сред. Для культивирования микоплазм нужны питательные среды, содержащие холестерин (желточные среды).
4. Отсутствие клеточной стенки отражено в систематике этих микроорганизмов. Микоплазмы относят к типу Tenericuies (буквально «нежнокожие»), классу Mollicutes (буквально «мягкокожие»). Семейство микоплазм объединяет: микоплазмы, и уреаплазмы, включающих патогенные и сапрофитические виды.
5. M.genitalium — это самая мелкая из известных на сегодняшний день бактерий; ее геном составляет 580 т.п.о.
6. Микоплазмы считаются поверхностными паразитами клеток слизистых оболочек. Их часто рассматривают как оптимальных паразитов, так как вызываемые ими инфекции редко приводят к летальному исходу.
7. Микоплазмы размножаются бинарным делением, способны к почкованию и сегментации. По Граму окрашиваются отрицательно, но лучшие результаты даёт окраска по Романовскому-Гимзе.
Биологические свойства.
Микоплазмы растут на питательных средах богатых стеролами, жирными кислотами, являются факультативными анаэробами, не способны к синтезу пептидогликана, в связи с чем устойчивы к бета-лактамным препаратам, в т.ч. к пенициллину.
Микоплазмы относятся к привередливым микроорганизмам, они растут на средах с добавлением нативной сыворотки, холестерина, нуклеиновых кислот, углеводов, витаминов и различных солей. На плотных средах образуют характерные мелкие полупрозрачные колонии с приподнятым зернистым центром, придающим им вид «яичницы-глазуньи». На средах с кровью некоторые виды микоплазм дают а- и бета-гемолиз.
В организме человека они прикрепляются к мембране клетки, выделяя продукты метаболизма и токсические субстанции, они нарушают функции клетки, приводят к развитию воспаления (мембранные паразиты). Рост микоплазм подавляют тетрациклины, макролиды; не действуют антибиотики, подавляющие синтез клеточной стенки (бета-лактамы), а также рифампицин, налидиксовая кислота.
Микоплазмы имеют адгезины, ответственные за прикрепление к клеткам хозяина. Некоторые компоненты микоплазменной клетки могут действовать как суперантигены, и в литературе описано несколько случаев аутоиммунных реакций. Микоплазмы имеют факторы ускользания от действия иммунной системы. Микоплазмы способны проникать в клетки хозяина и вызывать слияние клеток, апоптоз.
РЕСПИРАТОРНЫЕ МИКОПЛАЗМЫ
Мicoplasma pneumoniae имеют типичную морфологию микоплазм. На питательных средах дают видимый рост на 5-10-е сутки. Для формирования характерных колоний типа глазуньи необходимо несколько пересевов. У М. pneumoniae выявлен группоспецифический антиген.
Основные факторы патогенности:
Адгезины – поверхностные белки обусловливают взаимодействие с гликопротеиновыми рецепторами, содержащими нейраминовую кислоту, на поверхности клетки хозяина, что имеет ведущее значение в развитии начальной фазы инфекционного процесса.
Эндотоксин - проявляет пирогенный эффект, вызывает тромбогеморрагические поражения, коллапс и отёк лёгких.
Гемолизины и экзотоксины -.вызывают блокаду мукоцилиарного транспорта, а затем и гибель эпителия воздухоносных путей.
Перекрёстно реагирующие антигены приводят к аутоиммунным поражениям (артритаи и кожнымпоражениям) и ускользанию от действия иммунной системы.
Мелкие размеры способствуют проникновению через ГЭБ с развитием менингита.
Механизм передачи. Аэрозольный. Эпидемическое распространение часто получают в закрытых коллективах – домах престарелых, домах инвалидов, детских домах.
Приводят к развитию респираторного микоплазмоза: 1) в виде ограниченной инфекции верхних дыхательных путей; 2) в виде пневмонии.
Микоплазменные пневмонии носят обычно очаговый характер, реже — сегментарные, долевые. Обычно имеют субклиническое течение и переносятся на ногах. Внереспираторные проявления микоплазменной пневмонии включают гемолитическую анемию, менингиты, мио- и эндокардиты, реактивные артриты и др.
Микробиологическая диагностика. Применяют бактериологические и серологические методы.
Материал для исследований — слизь из глотки, мокрота, плевральный выпот, биоптаты легочной ткани.
Антигены М. pneumoniae в исследуемом материале выявляют с помощью РИФ, РПГА, ИФА и др. Выделение возбудителя микоплазменной пневмонии проводят посевом на питательные среды.
Лечение. Антибиотикотерапиямакролидами и тетрациклинами. Средства специфической профилактики микоплазменной пневмонии находятся на стадии разработки.
УРОГЕНИТАЛЬНЫЕ МИКОПЛАЗМЫ
M.genitalium рассматриваются как патогенные микроорганизмы. Другие виды микоплазм (M.hominis, M.fermentans, U.urealyticum) относятся к условно-патогенным. M.hominis и U.urealyticum присутствуют в уретре, влагалище, прямой кишке у 20–75% здоровых людей. Обязательному лечению подлежит урогенитальная микоплазменная инфекция, вызванная M .genitalium, другими же видами микоплазм – при наличие показаний.
Пути инфицирования. Генитальные микоплазмы передаются при половом контакте, при прохождении плода через половые пути матери.
M. hominis, U.urealyticum, М. genitalium вызывают:
1. Микоплазмозы (уреаплазмоз) – воспалительные заболевания органов мочеполовой системы у мужчин и женщин;
2. Патологию беременности, плода и новорожденного: неразвивающаяся беременность, выкидыши, преждевременные роды, раннее излитие околоплодных вод, лихорадку во время родов и в послеродовой период у матерей. При интранатальном заражении могут приводить к поражениям глаз, у новорожденных девочек может развиться микоплазмоз органов мочеполовой системы. У новорожденных детей M.hominis u U.urealyticum могут быть выделены из полости рта, носа, глотки, гениталий, мочи, причем у девочек чаще, чем у мальчиков. Колонизация мочеполовых путей у детей транзиторна и исчезает довольно быстро, но у 5–20% она сохраняется и в пубертатном возрасте.
3. Изменения в структуре сперматозоидов, приводя к мужскому бесплодию (уреаплазмы прикрепляются к головке сперматозоида в средней его части, что может снижать их подвижность и фертильность);
4. Женское бесплодие.
M. hominis обычно вызывает: 1) бактериальный вагиноз в ассоциации с другими микроорганизмами гарднереллами, превотеллами; 2) воспалительные заболевания органов малого таза.
U.urealyticum обычно вызывает: 1) осложнения беременности (аборты, мертворождения и рождения детей с низкой массой тела) и инфекцию у новорожденных; 2) уретрит у мужчин (негонококковый уретрит); 3) уреаплазменный простатиты.
M.genitalium— вызывет ИПП: уретрит, цервицит, эндометрит, воспалительные заболевания органов малого таза. M. genitalium открыт позднее, чем остальные генитальные микоплазмы, — в 1981 году, изучен хуже, чем другие генитальные микоплазмы из-за трудности выращивания на питательных средах. Данные об этиологической роли этого микроорганизма в развитии воспалительных заболеваний урогенитального тракта как женщин, так и мужчин стали накапливаться в связи использованием ПЦР.
Микробиологическая диагностика. Классический метод выявления генитальных микоплазм— культуральный метод. Этот метод дает возможность оценить количество микоплазм, которые содержатся в исследуемом материале. Многие исследователи используют количественные критерии в диагностике, полагая, что концентрация уреаплазм более 104 КОЕ/мл имеет диагностическое значение, в то время как более низкие концентрации не должны учитываться, поскольку в таких количествах микоплазмы/уреаплазмы могут находиться у здоровых людей
ПЦР и ПЦР в реальном времени позволяют выявлять ДНК микоплазм, использование ПЦР в реальном времени предпочтительнее, так как позволяет определять концентрацию микоплазм или уреаплазм в материале.
