Классификация диагностикумов
1. Бактериальные - во всех реакциях серодиагностики бактериальных инфекций, кроме РПГА.
2. Вирусные - во всех реакциях серодиагностики вирусных инфекций, кроме реакции нейтрализации
вируса (РН).
3. Эритроцитарные - только в РПГА в серодиагностике бактериальных и вирусных инфекций.
Получение диагностикумов
Бактериальный диагностикум - это стандартная взвесь убитых бактерий (исключая живой леп-тоспирозный диагностикум), реже - отдельные антигены микроорганизмов (О-, Н-, Vi-атигены брюшнотифозных бактерий, гонококковый антиген).
Эритроцитарный диагностикум - это антигены микроорганизмов, адсорбированные на эритроцитах I группы крови человека, предварительно обработанные танином или формалином для улучшения адсорбционных свойств последних.
РЕАКЦИИ СЕРОИНДИКАЦИИ
Реакция иммунофлюореспенции (РИФ) - проводится с целью сероиндикации бактериальных инфекций. Компонентами реакции являются исследуемый материал и диагностическаясыворотка - люминесцирующая. Ставится на стекле. Учет в люминесцентном микроскопе.
Реакция пассивной (непрямой) гемаггл ютинации (РПГА, РИГА) - проводится с целью серо-
индикации бактериальных инфекций. Компонентами реакции являются исследуемый материал и диагнос-
тическая сыворотка - суспензионные антитела. Ставится на стекле. Учет визуальный по выпадению
хлопьев.
Реакция преципитации (термокольцепреципитации) - проводится с целью сероиндикации бактериальных инфекций. Используется для диагностики сибирской язвы у животных - реакция Ас коли. Компонентами реакции являются термоэкстракт из шерсти животного (исследуемый материал, подготовленный специальным образом - кипятится шерсть животного в физ. растворе, разрушаются термолабильные антигены микроорганизмов, но сохраняется термостабильный соматический О-антиген) и диагностическая сыворотка - преципитирующая. Ставится в узких пробирках. Учет визуальный по кольцу преципитации на границе двух сред.
РЕАКЦИИ СЕРОИДЕНТИФИКАЦИИ
Реакция агглютинации - проводится с целью сероидентификации чистой культуры в Ш этапе бактериологического метода (идентификация по антигенным свойствам). Компонентами реакции являются чистая культура (неидентифицированная) и диагностическая сыворотка - агглютинирующая. Ставится настекле. Учет визуальный по выпадению хлопьев.
Реакция преципитации (в геле) - используется в диагностике дифтерии для определения токси-генности штамма. Компонентами реакции являются чистая культура (идентифицированная) и диагностическая сыворотка - антитоксическая. Ставится в чашках Петри с питательной средой. В центр чашки помещается полоска фильтровальной бумаги, пропитанная антитоксической противодифтерийной сывороткой, а по бокам от нее засеваются чистьте культуры. Учет визуальный по образованию усов преципитации рядом с чистой культурой,
1. Просмотр и запись вакцин и лечебно-профилактических сывороток по схеме: что содержит, как получен и для чего применяется данный препарат. Вакцины Живые:
вакцина чумная ЕВ живая
вакцина сибиреязвенная СТИ живая
вакцина бруцеллезная живая
вакцина туляремийная Гайского-Эльберта живая вакцина туберкулезная БЦЖ живая
вакцина туберкулезная БЦЖ-м живая
вакцина гриппозная аллантоисная живая
вакцина коревая культуральная живая
вакцина краснушная живая вакцина кори, краснухи и паротита живая
вакцина полиомиелитная культуральная живая вакцина паротитная культуральная живая
Корпускулярные (убитые, инактивированные):
вакцина лептоспирозная инактивированная
вакцина холерная инактивированная корпускулярная
вакцина брюшнотифозная спиртовая
вакцина брюшнотифозная, обогащенная ВИ-антигеном
вакцина антирабическая культуральная инактивированная вакцина гепатита А культуральная инактивированная
вакцина герпетическая инактивированная
вакцина гриппозная инактивированная
вакцина клещевого энцефалита культуральная инактивированная
вакцина полиомиелитная культуральная инактивированная
Химические и анатоксины:
секста-анатоксин тетра-анатоксин три-анатоксин
вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная (АКДС-вакцина, АКДС-м-вакцина)
анатоксин дифтерийно-столбнячный адсорбированный (АДС-анатоксин, АДС-м-анатоксин)
вакцина тифозно-паратифозно-столбнячная химическая сорбированная (ТАВте-вакцина)
анатоксин столбнячный адсорбированный
анатоксин дифтерийный адсорбированный
вакцина брюшнотифозная ВИ-полисахаридная
вакцина холерная бивалентная химическая (холероген-анатоксин + О-антиген) вакцина менингококковая группы А полисахаридная
вакцина менингококковая групп А и С полисахаридная
вакцина гриппозная полимер-субъединичная тривалентная
Генно инженерные:
вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая
Лечебные вакцины:
лечебная бруцеллезная вакцина гоновакцина
Гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины:
иммуноглобулин противосибиреязвенный лошадиный иммуноглобулин противолептоспирозный воловий
сыворотки противоботулинические типов А, В и Е моновалентные антитоксические
сыворотка противостолбнячная антитоксическая
сыворотка противогангренозная поливачентная антитоксическая
иммуноглобулин против клещевого энцефалита лошадиный
иммуноглобулин антирабический лошадиный
сыворотка противодифтерийная лошадиная
Гомологичные иммуноглобулины:
иммуноглобулин донорский нормальный
иммуноглобулин противостолбнячный человека антитоксический иммуноглобулин против клещевого энцефалита иммуноглобулин антирабический иммуноглобулин человека против гепатита В иммуноглобулин противококлюшный антитоксический
ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ
Серодиагностика - это определение неизвестных специфических антител в сыворотке крови боль-
ного с помощью заведомо известных антигенов (диагностикумов)
Реакции серодиагностики
Для серодиагностики применяют РА, РПГА, РСК, нРИФ, ИФА.
Реакция связывания комплемента (РСК). Предложена Ж. Бордэ и О. Жангу в 1901 году. Используется для серодиагностики бактериальных инфекций. Для постановки РСК требуется предварительная подготовка ингредиентов реакции, особенно комплемента, в качестве которого используют сыворотку крови морской свинки с установкой рабочей дозы. В последние десятилетия выпускается сухой оттитрованный комплемент, что значительно облегчило постановку реакции. Исследуемые сыворотки крови и антигены обязательно контролируются на антикомплементарность. Постановку основного опыта производят в пробирке путем внесения в нее определенного объема сыворотки крови, антигена (диагностикума) и рабочей дозы комплемента. Смесь инкубируют в термостате при 37°С в течение часа. Регистрацию результатов реакции проводят по гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана. Их приготавливают при смешивании гемолитической сыворотки кролика с эритроцитами барана. При внесении комплемента в эту смесь происходит реакция гемолиза. Таким образом, в тех случаях, когда комплемент не связывается с исследуемой системой антиген-антитело, т.е. остается свободным, наблюдается полный гемолиз бараньих эритроцитов, который свидетельствует об отрицательной реакции. Отсутствие гемолиза указывает на связывание комплемента с системой антиген-антитело, т.е. на положительную реакцию, которая обозначается крестами. Интенсивность задержки гемолиза оценивается по четырехкрестной системе, при этом полное отсутствие гемолиза обозначается ++++.
Реакция иммунного лизиса. В основе реакции лежит способность специфических антител образовывать иммунные комплексы с клетками, в том числе с эритроцитами, бактериями, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и лизису клеток. Из реакций иммунного лизиса чаще других применяется реакция гемолиза и редко - реакция бактериолиза.
Реакция гемолиза. Под влиянием реакции с антителами в присутствии комплемента мутная взвесь эритроцитов превращается в ярко-красную прозрачную жидкость - «лаковую кровь» вследствие выхода гемоглобина. При постановке диагностической реакции связывания комплемента реакция гемолиза используется как индикаторная: для тестирования присутствия или отсутствия свободного комплемента.
Реакция агглютинации (РА). С целью серодиагностики компонентами РА являются исследуемая сыворотка и бактериальный диагностикум. Повысить специфичность и чувствительность реакции можно путем разведения (титрования) исследуемой сыворотки. Для большинства инфекций существует диагностический титр, по которому судят о текущей инфекции. При некоторых заболеваниях необходимо проводить РА с парными сыворотками, т.е. двукратно через временной интервал, для того чтобы увидеть нарастание титра антител в динамике. Ставится в пробирках, в развернутом виде, с учетом диагностического титра. Учет реакции визуальный по выпадению хлопьев.
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА, РИГА). С целью серодиагностики компонентами реакции являются исследуемая сыворотка и эритроцитарный диагностикум. Ставится в планшетах в развернутом виде, с учетом диагностического титра. Учет реакции визуальный («зонтики» -положительная реакция, << пуговки (диски) >> - отрицательная реакция).
Существуют реакции, основанные на выявлении взаимодействия антигена с антителом с образованием иммунного комплекса по метке одного из участников реакции (РИФ, ИФА).
С целью серодиагностики применяют непрямую р еак цию иммуно флюорес пенпии (нРИ Ф). Компонентами реакции являются сыворотка больного, диагностикум и меченная флюорохромом (люминофором) антитлобулиновая сыворотка. Учет реакции производится с помощью люминесцентного микроскопа.
Аналогично нРИФ проводится нммуноферментный анализ (ИФА). Компонентами реакции являются сыворотка больного, диагноситкум и антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом. Учет реакции визуальный по изменению окраски соответствующего субстрата.
ИММУНОПРОФИЛАКТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ
Одним из важнейших направлений прикладной микробиологии является создание эффективных препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.
Иммунопрофилактика - применение иммунологических препаратов для создания искусственного иммунитета (активного или пассивного).
Иммунотерапия - применение иммунологических препаратов для лечения больных.
Среди препаратов для иммунопрофилактики и иммунотерапии различают:
• вакцины - содержат антигены, индуцируют в организме развитие гуморального и клеточного им мунного ответа, то есть формируют активный иммунитет, который, как правило, развивается через сколько недель и сохраняется достаточно долго (от 6 месяцев до 10 и более лет);
•гипериммунные сыворотки и иммуноглобулины - содержат готовые антитела, при их введении возникает пассивный иммунитет, который возникает немедленно после введения препарата, но сохраняется недолго (период полувыведения гетерологичных антител составляет около 2 недель, а гомологичных -около 4 недель).
Вакцинотерапия - введение лечебных вакцин - антигенных препаратов для перевода хронической формы инфекции в обострение при хронических вялотекущих инфекциях (гонорея, бруцеллез).
Вакцинопрофилактика - введение профилактических вакцин - антигенных препаратов для создания искусственного активного приобретенного иммунитета. Обладают высокой иммуногенностью (обеспечивают надежную противоинфекционную защиту), ареактивностью (не дают выраженных побочных реакций), безвредностью для макроорганизма и минимальным сенсибилизирующим действием.
По назначению вакцины делятся на:
• профилактические
• лечебные
По характеру микроорганизмов, из которых они созданы:
• бактериальные
• вирусные
• риккетсиозные
По способу приготовления:
• живые
• убитые
• химические
• анатоксины
• искусственные
• генноинженерные
• антиидиотипические (в стадии разработки)
• липосомальные (в стадии разработки)
Серопрофилактика и серотерапия - введение лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобулинов - биологических препаратов, содержащих антитела, для лечения и экстренной профилактики путем создания пассивного антитоксического, антибактериального или антивирусного иммунитета.
