Подсчет формулы крови по мазку.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ

ПО ДИСЦИПЛИНЕ

ИММУНОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ

2012 г.

1. Тема занятия «Структурно-функциональная организация иммунной системы» 4 часа.

Цель. Изучить клетки, ткани и органы иммунной системы

Познакомиться с иммунокомпетентными клетками.

Задачи

1.Определение значения иммунной системы и иммуннокомпетентных клеток

2.Освоить методы подсчета формулы крови и лейкоцитов в камере Горяева

2. Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы.

Иммунология, иммунитет, клетки иммунной системы, центральные и периферические органы иммунитета, иммунокомпетентные клетки

Вопросы к занятию

a. Клетки, ткани и органы иммунной системы.

b. Центральные органы иммунной системы: костный мозг, тимус. Строение органов и их характеристика. Роль в развитии и селекции лимфоцитов.

c. Периферические органы иммунной системы: лимфатические узлы, селезенка, лимфоидные ткани, ассоциированные со слизистыми покровами. Строение органов и их характеристика.

d. Роль в иммунитете селезенки, лимфатических узлов, миндалин, пейеровых бляшек.

e. Слизистые ткани и кожа, их место в иммунной системе.

f. Объекты исследования в иммунологии. Биологические материалы для иммунологических исследований.

g. Методы разделения клеток периферической крови.

Вопросы для самоконтроля

1.Иммунная система. Иммунитет.

2.Центральные и периферические органы иммунитета.

3.Иммунокомпетентные клетки.

4.Апоптоз и некроз.

5.Филогенез и онтогенез иммунной системы

Основная и дополнительная литература к теме

1 Земсков В.М. Клиническая иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/- М.: ГОЭТАР-медиа, 2006 – 474с.

2.Р.М.Хаитов. Иммунология. Учебник для ВУЗов. Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2006 г;

Дополнительная литература.

- Ф.И.Ершов; О.И.Киселев. Интерфероны и их индукторы (от молекул

до лекарств). Москва; изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

- Справочник по иммунотерапии для практического врача.

Спб. Издательство «Диалог», 2002 г.

2. Тема занятия «Функциональная характеристика иммунокомпетентных клеток и ее оценки.» 4 часа.

1. Цель-. Познакомиться с функцией иммунокомпетентных клеток. Научиться технике проведения иммунологического метода диагностики

Задачи

· Определение значения иммуннокомпетентных клеток

· Освоить методы подсчета формулы крови и лейкоцитов в камере Горяева

1. Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы.

· Иммунокомпетентные клетки,

· Т- и В- лимфоциты,

· NK-натуральные киллеры,

· антигенпрезентирующие клетки (моноцитарно-макрофагальные клетки),

· медиаторные клетки.

Вопросы к занятию

· Стволовая кроветворная клетка. Происхождение, характеристика, маркеры, циркуляция в организме.

· Т-лимфоциты. Определение, характеристика, маркеры, рецепторы и их роль, распределение в организме.

· В-лимфоциты. Определение, характеристика, маркеры, рецепторы. Стадии развития В-лимфоцитов.

· Естественные киллеры (NK-клетки). Характеристика, маркеры, рецепторы. Происхождение, основные этапы развития в костном мозге и на периферии.

· Моноцитарно-макрофагальные клетки. Характеристика, маркеры, рецепторы. Роль в иммунных процессах. Этапы развития: костномозговой, циркуляторный, тканевой. Функциональные свойства макрофагов.

· Дендритные клетки. Характеристика, рецепторы, маркеры, распределение в организме.

· Медиаторные клетки в иммунном ответе. Нейтрофилы. Эозинофилы. Тучные клетки и базофилы. Роль фибробластов, эндотелия, тромбоцитов, эритроцитов и других нелимфоидных клеток в иммунных процессах

· Методы изучения функциональной активности клеток иммунной системы in vitro и in vivo. Оценка пролиферативной активности лимфоцитов. Оценка клеточной цитотоксичности. Оценка функциональной активности фагоцитов. Культура клеток in vivo.

Вопросы для самоконтроля

1.Иммунокомпетентные клетки.

2. Лимфоциты Т-и В-.

3.Натуральные киллеры.

4.Антигенпрезентирующие клетки. Моноциты и макрофаги.

5.Нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, тучные клетки,фибробласты эндотелия, тромбоциты и эритрофиты.

Основная и дополнительная литература к теме

Основная литература.

1 Земсков В.М. Клиническая иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/- М.: ГОЭТАР-медиа, 2006 – 474с.

i. Р.М.Хаитов. Иммунология. Учебник для ВУЗов. Издательская группа

«ГЭОТАР-Медиа», 2006 г;

Дополнительная литература.

- Ф.И.Ершов; О.И.Киселев. Интерфероны и их индукторы (от молекул

до лекарств). Москва; изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

- Справочник по иммунотерапии для практического врача.

Спб. Издательство «Диалог», 2002 г.;

Лабораторная работа: Подсчет формулы крови.

1. Приготовить мазок из крови с гепарином методом «стекло по стеклу».

2. Подсушить.

3. Зафиксировать смесью Никифорова.

4. Окрасить по Романовскому.

5. Подсчитать формулу: палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, эозинофилы, моноциты, лимфоциты, плазмоциты, базофилы.

Нормы лейкоцитарной формулы крови:

	Базофилы	Эозинофилы	Нейтрофилы
			Общие	Сегменто-ядерные	Палочко-ядерные
В %	0 – 1 %	1 – 4 %	5 58 – 73 %	57 – 67 %	1 – 6 %
В пересчете х 10⁹ кл/л	0 – 0,2	0 -0,45	1,8 – 7,7	1,8 – 7,0	0 -0,7
Абслютные числа	30 – 40	180 - 200		4020 - 5040	240 – 320

	Моноциты	Плазмо-циты	Лимфо-циты	Лейкоциты	Эритроциты
В %	4 – 8 %	0 – 0,5 %	23 – 40 %
В пересчете х 10⁹ кл/л	0 – 0,8		1,0 – 4,8
Абслютные Числа	360 – 640		1800 - 2400	6000-8000	4,5 – 5 мм в 1 куб. мм

	Ретикулоциты	Тромбоциты	Гемоглобин	Цветной показатель
В 1 куб. мм	0,6 – 0,8	250 – 400 тысяч	80 - 100	0,8 – 1

Подсчет формулы крови по мазку.

1. На предметное стекло наносим каплю крови с гепарином. В каплю ставим ребром под углом сошлифованное стекло и проводим стеклом по стеклу, распределяя каплю крови по поверхности предметного стекла как можно более равномерно.

2. Подсушиваем мазки.

3. Фиксируем смесью Никифорова в течение 20 минут.

4. Окрашиваем по Романовскому.

Окраска по Романовскому:

1). На стаканчик 50 мл: 45 мл воды +5 мл краски Романовского.

2). На ванночку 250 мл: 225 мл воды+25 мл краски Романовского.

3). На пробирку 10 мл: 9 мл воды+1 мл краски Романовского.

4). Держать мазок 30-40 минут, если краска свежая.

5). Обмыть проточной водой.

5. Далее подсчитываем формулу крови с помощью микроскопии.

Определяются: лимфоциты (Л), моноциты (М), базофилы (Б),

сегментоядерные нейтрофилы (С),

палочкоядерные нейтрофилы (П).

Подсчет производится на 100 клеток в поле зрения.

Содержание форменных элементов определяется в процентах. Например,

Л	Л	Э	П	Л	Л	Л	Л	М	Л
Л	Л	Л	Б	П	П	С	Л	Л	Л
Л	Л	Л	П	Л	Л	С	Л	Л	Л
Л	Л	Л	Л	Л	Л	Л	Л	Л	Э
Л	С	Л	Л	Л	С	Л	Л	Л	П
Л	Л	Л	П	Л	Л	Л	Л	С	Л
Л	Л	С	Л	Л	Л	П	Л	Л	Л
Л	Л	Л	Л	П	Л	Л	Л	П	Л
Л	Л	Л	Л	С	Л	Л	Л	С	Л
Э	Л	Л	Л	Б	Л	Л	Л	С	Л

Лимфоцитов - 76%; Базофилов - 2%; Палочкоядерных нейтрофилов - 9%; Сегментоядерных нейтрофилов - 9%; Моноцитов - 1%; Эозинофилов - 3%;

Для перерасчета процентов в абсолютные числа необходимо воспользоваться результатами лейкоцитоза. Например, лейкоцитов составил 5,7х10⁹ кл/л.

Тогда абсолютное число лифоцитов составит:

5,7 х 76 (%) = 4,33х10⁹ кл/л.

Аналогичным образом делается перерасчет остальных клеток крови.

Ответ по формуле крови выдается в относительных (%) и абсолютных (7х10⁹ кл/л) цифрах.

3. Тема занятия «Иммунный ответ. Межклеточные взаимодействия в иммунной системе. Рецепторы и маркеры клеток иммунной системы. » 6 часов.

1. Цель: Изучить межклеточные взаимодействия в иммунной системе. Рецепторы и маркеры клеток иммунной системы.

Задачи

· Определение значения иммунной системы и иммуннокомпетентных клеток

· Изучить роль рецепторов, маркеров, адгезивных молекул, хемокинов и медиаторов в межклеточном взаимодействии ИКК.

3.Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы (перечень понятий).

· Взаимодействие иммунокомпетентных клеток,

· адгезивные молекулы,

· хемокины,

· медиаторы,

Вопросы к занятию

· Физико- химическая структура рецепторов Т- и В-лимфоцитов, методы идентификации. Ко-рецепторы. Суперсемейство иммуноглобулинов. Т-клеточный рецепторный комплекс, строение, разнообразие.

· Функциональная роль. В-клеточный рецепторный комплекс, строение, разнообразие. Функциональная роль. Значение в иммунных реакциях. Методы определения преципитатов антител с антигенами в геле6 встречная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини. Иммуноэлктрофорез.

· Адгезивные молекулы, классификация, характеристика интегринов, селектинов, молекул иммуноглобулинового суперсемейства и других. Значение в миграции, развитии и взаимодействии клеток иммунной системы.

· Межклеточные взаимодействия в иммунной системе. Трехклеточная схема взаимодействия клеток. Роль рецепторов во взаимодействии.

· Функционирование иммунокомпетентных клеток: распознавание, активация, пролиферация, дифференцировка, регуляция. Переработка, транспортироваки, представление антигена специализированными антигенпредставляющими клетками. Внутриклеточная переработка антигенов, роль ферментов.

· Механизм образования комплекса пептид-молекула ГКГС. Пути представления антигенных пептидов на поверхность клетки. Значение молекул ГКГС 1 и 2 класса.

Вопросы для самоконтроля

Приводятся вопросы, которые соответствуют целям и задачам занятия.

1.Маркеры и рецепторы Т-лимфоцитов

2. Маркеры и рецепторы В-лимфоцитов.

3.Адгезивные молекулы: интегрины, селектины, молекулы иммуноглобулинов.

4.Взаимодействие клеток в иммунном ответе.

5.Функционирование ИКК.

Основная и дополнительная литература к теме

Основная литература.

1 Земсков В.М. Клиническая иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/- М.: ГОЭТАР-медиа, 2006 – 474с.

ii. Р.М.Хаитов. Иммунология. Учебник для ВУЗов. Издательская группа

«ГЭОТАР-Медиа», 2006 г;

Дополнительная литература.

- Ф.И.Ершов; О.И.Киселев. Интерфероны и их индукторы (от молекул

до лекарств). Москва; изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

- Справочник по иммунотерапии для практического врача.

Спб. Издательство «Диалог», 2002 г.;

4. Тема занятия «Процессы активации, пролиферации и дифференцировки ИКК» 6 часов.

1. Цель. Изучить механизмы активации, пролиферации и дифференцировки ИКК.

Задачи

· Определение значения активации иммуннокомпетентных клеток

· Определение пролиферации ИКК.

· Определение дифференцировки ИКК

Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы.

· Активация ИКК

· Пролиферация ИКК

· Дифференцировка ИКК

Вопросы к занятию

· Активация клеток иммунной системы: Т-, В-лимфоцитов, фагоцитов. Природа активирующих сигналов, механизмы их трансдукции. Значение ионов, белков, цитокинов в развитии процесса.

· Пролиферативная способность иммунокомпетентных клеток. Ф акторы роста и дифференцировки. Клеточные перестройки в процессе бласттрансфоомации под влиянием митогена и антигена.

· Пути дифференцировки иммунокомпетентных клеток. Дифференцировочные маркеры.

· Эффекторные клетки. Роль цитокинов на различных этапах развития. Современные представления об иммунорегуляторных клетках Т-, В-лимфоциты, моноцитарно-макрофагальные и др.). Регуляторная активность Т-хелперов 1 и 2 типа, их цитокинов. Регуляторная активность лимфоцитов с супрессорной функцией.

· Современные методы оценки способности иммунокомпетентных клеток к дифференцировке, распознаванию, активации, пролиферации, регуляции.

· Иммуноферментный и радиоиммунный анализы.

· Определение количества клеток, секретирующих тот или иной продкут,- метод ELISPOT

· Методы исследования внутриклеточных цитоплазматических и ядерных белков – фактор транскрипции, сигнальных молекул и др.

Вопросы для самоконтроля

1.Активация клеток в иммунном ответе.

2.Пролиферативные возможности ИКК..

3.Дифференцировка ИКК.

4.Иммунорегуляторные клетки.

5.Оценка способности ИКК к пролиферации, активации и дифференцировке.

Основная и дополнительная литература к теме

Основная литература.

1 Земсков В.М. Клиническая иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/- М.: ГОЭТАР-медиа, 2006 – 474с.

iii. Р.М.Хаитов. Иммунология. Учебник для ВУЗов. Издательская группа

«ГЭОТАР-Медиа», 2006 г;

Дополнительная литература.

- Ф.И.Ершов; О.И.Киселев. Интерфероны и их индукторы (от молекул

до лекарств). Москва; изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

- Справочник по иммунотерапии для практического врача.

Спб. Издательство «Диалог», 2002 г.;

5. Тема занятия «Нейроиммуноэндокринные взаимодействия» 4 часа

1.Цель. Изучить взаимоотношения между компонентами нервной, эндокринной и иммунной системами.

Задачи

· Оценить роль нейропептидов и гормонов в регуляции функции ИКК

· Действие цитокинов в нейроэндокриннорегуляторных механизмах функционирования ИС.

2.Основные понятия, которые должны быть усвоены студентами в процессе изучения темы.

· Нейропептиды и гормоны,

· Рецепторы гормонов и нейропептидов

· Цитоцины

· Регуляция

Вопросы к занятию

· Взаимоотношения между компонентами нервной, эндокринной, иммунной системами.

· Роль нейропептидов и гормонов в регуляции функции клеток иммунной системы.

· Рецепторы гормонов и нейропептидов.

· Глюкокортикоиды и иммунный ответ.

· Действие цитокинов. Методы оценки системы цитокинов

· Циркадные ритмы в иммунной системе.

· Иммунитет и стресс

· Генетические методы исследования в иммунологии: ПЦР, метод микрочипов, метод направленного мутагенеза

Вопросы для самоконтроля

1.Регуляторные механизмы нейро-эндокринно-иммунного взаимодействия.

2.Нейропептиды и гормоны в регуляции ИС.

3.Цитокины, определение, продукция и функциональная активность.

4.Иммунитет и стресс.

Основная и дополнительная литература к теме

Основная литература.

1 Земсков В.М. Клиническая иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/- М.: ГОЭТАР-медиа, 2006 – 474с.

2 Р.М.Хаитов. Иммунология. Учебник для ВУЗов. Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2006 г;

Дополнительная литература.

- Ф.И.Ершов; О.И.Киселев. Интерфероны и их индукторы (от молекул

до лекарств). Москва; изд. группа «ГЭОТАР-Медиа», 2005 г.

- Справочник по иммунотерапии для практического врача.

Спб. Издательство «Диалог», 2002 г.;