Занятие 31
Тема: Лабораторная диагностика натуральной оспы.
Лабораторная диагностика гриппа, парагриппа, аденовирусных инфекций.
Тема 1: Лабораторная диагностика натуральной оспы.
Цель: На основе знаний биологии вируса натуральной оспы (ВНО), особенностей его взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, специфическую профилактику вызываемого им заболевания.
Знать:
1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вируса натуральной оспы.
2. Особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при натуральной оспе.
3. Лабораторную диагностику натуральной оспы: материал, методы.
4. Специфическую профилактику натуральной оспы.
Уметь:
1. Вскрывать зараженный куриный эмбрион, проводить индикацию вируса натуральной оспы.
Контрольные вопросы:
1. Особенности вируса натуральной оспы, определяющие принадлежность вызываемого им заболевания к группе особо опасных, карантинных инфекций.
2. Классификация вируса натуральной оспы. Структура вириона и его антигенная характеристика.
3. Культивирование вируса натуральной оспы и методы индикации.
4. Особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при натуральной оспе.
5. Материал и методы лабораторной диагностики натуральной оспы.
6. Специфическая профилактика натуральной оспы. Глобальная ликвидация натуральной оспы. Вклад СССР в программу ВОЗ ликвидации натуральной оспы.
7. Вирус основакцины: его происхождение, использование в генной инженерии.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы, для чего: вскрыть куриный эмбрион, зараженный материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; провести индикацию вируса (макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром). Сделать вывод.
Методические указания, выполняемые в ходе УИРС:
1. Проведите вирусологическое исследование с целью диагностики натуральной оспы, для чего (начало исследования см занятие №30)
Вскройте куриный эмбрион, зараженным материалом от обследуемого с диагнозом «натуральная оспа»; проведите индикацию вируса (макроскопически, микроскопически при импрегнации серебром). Перед вскрытием скорлупу над воздушной камерой обработайте дезинфектантом (70% спирт), стерильными ножницами срежьте ее на 2-3 мм выше границы воздушной камеры. Пинцетом снимете белковую оболочку и подрежьте ножницами хорион-аллантоисную оболочку (ХАО) на границе с воздушной камерой. Содержимое эмбриона аккуратно вылейте в стерильную чашку Петри, а ХАО извлеките пинцетом в стерильную чашку Петри и с физ. раствором, расправьте и изучите макроскопически.
Если в исследуемом материале (содержимое везикул) имелся вирус натуральной оспы, то на ХАО через 72 ч инкубирования эмбрионов обнаруживаются мелкие, диаметром около 1 мм, белые, плотные, резко ограниченные бляшки.
При отсутствии следов поражения результаты исследования считаются отрицательными.
Для микроскопического исследования содержимого бляшек приготовьте препарат. Для этого ножницами вырежьте кусочек ХАО, поместите на предметное стекло и разотрите с помощью второго предметного стекла. Препараты высушите на воздухе и окрасьте по Морозову.
Техника окраски по Морозову.
1. Налить реактив №1 (фиксатор – жидкость Руге) на 1-3 минуты, тщательно промыть водой.
2. Налить реактив №2 (раствор танина), нагреть до отхождения паров, дать остыть, тщательно промыть водой.
3. Налить реактив №3 (раствор нитрата серебра), нагреть до отхождения паров, дать остыть, тщательно промыть водой.
Высушить и микроскопировать и иммерсионной системой. В случае положительного результата в препарате выявляют тельца Пашена.
На основании полученных результатов сделайте заключение, заполните бланк-направление и бланк – ответ из вирусологической лаборатории.
Для серологической идентификации полученной культуры вируса используют центрифугат суспензии ХАО и диагностическую сыворотку. Идентификацию проводят в реакции нейтрализации (РН), реакция торможения гемагглютинации (РТГА, РПГА.
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите свойство вируса натуральной оспы (ВНО), позволяющие обнаружить его в световом микроскопе.
2. Обоснуйте возможность использования вирусоскопической диагностики при натуральной оспе.
3. Назовите способы индикации ВНО при его культивировании в курином эмбрионе и культуру клеток ткани; какие свойства вируса лежат в их основе.
4. Кем и когда был предложен метод специфической профилактики натуральной оспы?
5. Назовите свойства вируса оспы коров, позволившие использовать его для специфической профилактики натуральной оспы у людей.
6. Назовите стратегию и тактику программы ВОЗ глобальной ликвидации натуральной оспы. Кем и когда впервые она была предложена.
7. В каком году был зарегистрирован в мире последний случай заболевания натуральной оспы и с какого года в России не проводиться плановая вакцинация?
8. Где сохраняются в настоящее время штаммы ВНО?
9. В чем заключается суть получения генно-инженерных вакцин на основе вируса осповакцины?
