Серологические маркеры гепатита В

Стом. ф-т, 2006

ЗАНЯТИЕ 28

 

Тема: Лабораторная диагностика парентеральных вирусных гепатитов В, С, D.

 

Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов гепатитов В, С, D, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.

 

Знать:

1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вирусов гепатитов В, С, D.

2. Экологию, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.

3. Материал и методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.

4. Специфическую профилактику гепатита В.

5. Неспецифическую профилактику гепатитов В, С, D в стоматологической практике.

Уметь:

1. Учитывать и оценивать результаты ИФА для выявления серологических маркеров вирусов гепатитов В, С, D.

 

Контрольные вопросы:

1. Классификация вирусов гепатитов В, С, D.

2. Морфология, антигенное строение, культивирование, резистентность вирусов гепатитов В, С, D.

3. Источники инфекции, пути передачи, особенности патогенеза и иммунитета при вирусных гепатитах В, С, D.

4. Материал и методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов В, С, D.

5. Специфическая профилактика гепатита В.

6. Неспецифическая профилактика гепатитов В, С, D в стоматологической практике.

 

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести диагностику парентеральных гепатитов В, С:

1.1.Учесть и оценить результаты ИФА с сыворотками обследуемых на НВs-антиген.

1.2. Учесть и оценить результаты ИФА с сыворотками обследуемых на антитела к вирусу гепатита С (анти-НCV).

2. Охарактеризовать биопрепараты: Engerix B, Н-В-Vax II и ознакомиться с тест-системами ИФА для определения серологических маркеров вирусов гепатитов В, С.

 

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите диагностику парентеральных гепатитов В и С, для чего:

1.1. Учтите и оцените результаты ИФА для выявления НВsАg в сыворотках крови обследуемых:

- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;

- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;

- Е – стоматолог, стаж работы 3 года;

- F– протезировался 5 мес назад;

- G, Н – контроли (К+, К-).

 

Наличие при гепатите В в крови больных и / или носителей вирусов (вирусемия) и его антигенов (антигенемия) является основой лабораторной диагностики данной инфекции. Наличие различных маркеров НВV зависит от периода и формы заболевания, что позволяет не только диагносцировать заболевание, но и прогнозировать его исход, оценивать эффективность проводимой терапии (таблица 1).

 

Таблица 1

Серологические маркеры гепатита В

 

Форма, период болезни	HBsAg	анти-HBs	HВеAg*	анти-HBе	HBc	HBV-ДНК*
IgM*	IgG
Острый гепатит Инкубационный период Клинически выраженный гепатит: - ранний период; - поздний период Реконвалесценция Постинфекционный период Хронический гепатит: - репликативная форма; - интегративная форма Активная иммунизация	+     + + -/+ -     + + -	-     - - + +     - - +	+     + - - -     + - -	-     - + + +     - - -	-     + +/- - -     + +/- -	-     + + + +     + + -	+     + +/- - -     + +/- -

Примечание: * - маркеры репликации вируса

 

Основным маркером HBV при скрининговых исследованиях с целью диагностики гепатита В и при проверке донорской крови является HВsAg. Он обнаруживается через 3-5 недель после заражения и за 4-5 недель до клинических симптомов. Для его выявления используют ИФА (см. занятие №11). В лунки полистироловых панелей с антителами к HВsAg вносят исследуемые сыворотки, инкубируют и отмывают от несвязавшегося антигена. Затем в лунки вносят антитела к HВsAg, меченные пероксидазой (конъюгат), инкубируют; несвязанный конъюгат отмывают. Добавление субстракта (ортофенилендиамина-ОФД) позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет, учитывается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей HВsAg (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей HВsAg (К-).

 

1.2. Учтите и оцените результаты ИФА с сыворотками тех же обследуемых на антитела к вирусу гепатита С (анти-НCV).

Подобно гепатиту В, гепатит С сопровождается длительной вирусемией. Но, в отличие от HBV, вирус гепатита С может быть выявлен только путем определения РНК, т. к. концентрация вирусных частиц и антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому основными маркерами НСV являются антитела, как суммарные (анти-НСV), так и к компонентам вируса (core-Ag, E1/E2, NS). Диагностическое, прогностическое и для контроля терапии имеет значение определение класса Ig (IgM, IgG).

 

Для определения анти-НCVс помощью ИФА в лунки полистироловых панелей с адсорбированными рекомбинантными / синтетическими HСV-пептидами вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела к иммуноглобулинам человека, меченные пероксидазой. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигенов, прореагируют с меченными античеловеческими антителами. Добавление после промывания субстрата (ОФД) позволяет учесть результат реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет учитывается как положительная реакция.

Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей анти-HСV (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-HСV (К-).

На основании полученных результатов сделайте вывод, заполните бланк-направление и бланк-ответ из серологической лаборатории.