Стом. ф-т, 2006
ЗАНЯТИЕ 28
Тема: Лабораторная диагностика парентеральных вирусных гепатитов В, С, D.
Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов гепатитов В, С, D, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.
Знать:
1. Классификацию, морфобиологическую характеристику вирусов гепатитов В, С, D.
2. Экологию, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.
3. Материал и методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.
4. Специфическую профилактику гепатита В.
5. Неспецифическую профилактику гепатитов В, С, D в стоматологической практике.
Уметь:
1. Учитывать и оценивать результаты ИФА для выявления серологических маркеров вирусов гепатитов В, С, D.
Контрольные вопросы:
1. Классификация вирусов гепатитов В, С, D.
2. Морфология, антигенное строение, культивирование, резистентность вирусов гепатитов В, С, D.
3. Источники инфекции, пути передачи, особенности патогенеза и иммунитета при вирусных гепатитах В, С, D.
4. Материал и методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов В, С, D.
5. Специфическая профилактика гепатита В.
6. Неспецифическая профилактика гепатитов В, С, D в стоматологической практике.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести диагностику парентеральных гепатитов В, С:
1.1.Учесть и оценить результаты ИФА с сыворотками обследуемых на НВs-антиген.
1.2. Учесть и оценить результаты ИФА с сыворотками обследуемых на антитела к вирусу гепатита С (анти-НCV).
2. Охарактеризовать биопрепараты: Engerix B, Н-В-Vax II и ознакомиться с тест-системами ИФА для определения серологических маркеров вирусов гепатитов В, С.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Проведите диагностику парентеральных гепатитов В и С, для чего:
1.1. Учтите и оцените результаты ИФА для выявления НВsАg в сыворотках крови обследуемых:
- А, В, С – наркоманы, использующие внутривенное введение наркотиков;
- D – лицо, занимающееся коммерческим сексом;
- Е – стоматолог, стаж работы 3 года;
- F– протезировался 5 мес назад;
- G, Н – контроли (К+, К-).
Наличие при гепатите В в крови больных и / или носителей вирусов (вирусемия) и его антигенов (антигенемия) является основой лабораторной диагностики данной инфекции. Наличие различных маркеров НВV зависит от периода и формы заболевания, что позволяет не только диагносцировать заболевание, но и прогнозировать его исход, оценивать эффективность проводимой терапии (таблица 1).
Таблица 1
Серологические маркеры гепатита В
| Форма, период болезни | HBsAg | анти-HBs | HВеAg* | анти-HBе | HBc | HBV-ДНК* | |
| IgM* | IgG | ||||||
| Острый гепатит Инкубационный период Клинически выраженный гепатит: - ранний период; - поздний период Реконвалесценция Постинфекционный период Хронический гепатит: - репликативная форма; - интегративная форма Активная иммунизация | + + + -/+ - + + - | - - - + + - - + | + + - - - + - - | - - + + + - - - | - + +/- - - + +/- - | - + + + + + + - | + + +/- - - + +/- - |
Примечание: * - маркеры репликации вируса
Основным маркером HBV при скрининговых исследованиях с целью диагностики гепатита В и при проверке донорской крови является HВsAg. Он обнаруживается через 3-5 недель после заражения и за 4-5 недель до клинических симптомов. Для его выявления используют ИФА (см. занятие №11). В лунки полистироловых панелей с антителами к HВsAg вносят исследуемые сыворотки, инкубируют и отмывают от несвязавшегося антигена. Затем в лунки вносят антитела к HВsAg, меченные пероксидазой (конъюгат), инкубируют; несвязанный конъюгат отмывают. Добавление субстракта (ортофенилендиамина-ОФД) позволяет учесть результаты реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет, учитывается как положительная реакция.
Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей HВsAg (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей HВsAg (К-).
1.2. Учтите и оцените результаты ИФА с сыворотками тех же обследуемых на антитела к вирусу гепатита С (анти-НCV).
Подобно гепатиту В, гепатит С сопровождается длительной вирусемией. Но, в отличие от HBV, вирус гепатита С может быть выявлен только путем определения РНК, т. к. концентрация вирусных частиц и антигенов ниже порога чувствительности современных иммунохимических реакций. Поэтому основными маркерами НСV являются антитела, как суммарные (анти-НСV), так и к компонентам вируса (core-Ag, E1/E2, NS). Диагностическое, прогностическое и для контроля терапии имеет значение определение класса Ig (IgM, IgG).
Для определения анти-НCVс помощью ИФА в лунки полистироловых панелей с адсорбированными рекомбинантными / синтетическими HСV-пептидами вносят сыворотки обследуемых и инкубируют. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием буферным раствором. Затем в лунки вносят антитела к иммуноглобулинам человека, меченные пероксидазой. Если в исследуемой сыворотке присутствовали искомые антитела, то на данном этапе они, выступая в качестве антигенов, прореагируют с меченными античеловеческими антителами. Добавление после промывания субстрата (ОФД) позволяет учесть результат реакции. Образование продукта, окрашенного в желто-коричневый цвет учитывается как положительная реакция.
Критерием достоверности являются контроли: с сывороткой, заведомо содержащей анти-HСV (К+) и с сывороткой, заведомо не содержащей анти-HСV (К-).
На основании полученных результатов сделайте вывод, заполните бланк-направление и бланк-ответ из серологической лаборатории.
