Основные свойства возбудителей газовой гангрены, столбняка, ботулизма

Леч., пед. ф-ты, 2006

 

ЗАНЯТИЕ 24

 

Тема: Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных анаэробными возбудителями (клостридии газовой гангрены, столбняка, ботулизма, бактероиды).

 

Цель: На основе знаний биологии спорообразующих и неспорообразующих анаэробных бактерий, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом, уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.

 

Знать:

1. Особенности биологии спорообразующих и неспорообразующих анаэробных бактерий, определяющие их роль в инфекционной патологии человека.

2. Экологию спорообразующих и неспорообразующих анаэробных бактерий, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета, вызываемых ими заболеваний.

3. Материал и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробными бактериями.

4. Профилактику и терапию заболеваний, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробными бактериями.

 

Уметь:

1. Учитывать и оценивать результаты микроскопии исследуемого материала при подозрении на инфекцию, вызванную спорообразующими и неспорообразующими анаэробными бактериями.

2. Учитывать и оценивать результаты посева исследуемого материала на питательные среды с целью выделения и культивирования спорообразующих и неспорообразующих анаэробных бактерий (тиогликолевая среда, Китта-Тароцци и др.).

3. Проводить идентификацию исследуемой культуры с учетом морфотинкториальных (метод Грама), биохимических («пестрый ряд»), токсигенных (реакция нейтрализации) свойств.

 

Контрольные вопросы:

1. Классификация и морфобиологические свойства спорообразующих анаэробных бактерий – клостридий анаэробной газовой гангрены, столбняка, ботулизма.

2. Классификация и морфобиологические свойства неспорообразующих анаэробных бактерий – бактероиды, превотеллы, порфиромонады, фузобактерии.

3. Ведущий фактор вирулентности патогенных клостридий и метод его определения.

4. Факторы вирулентности неспорообразующих анаэробных бактерий и механизм их действия.

5. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза анаэробной газовой гангрены, столбняка, ботулизма.

6. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробными бактериями.

7. Материалы и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробными бактериями.

8. Ускоренная микробиологическая диагностика анаэробной газовой гангрены.

9. Ускоренная и экспресс-диагностика заболеваний, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробными бактериями.

10. Специфическая профилактика и терапия анаэробной газовой гангрены, столбняка, ботулизма.

11. Профилактика и терапия заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями.

 

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести микробиологическое исследование биоптата (аутоптата) из глубины раны больного с подозрением на анаэробную газовую гангрену с целью установления этиологии заболевания:

1.1. Промикроскопировать препарат из биоптата, окрашенный по Граму. Сделать заключение.

1.2. Учесть и оценить результаты посева биоптата в среду Вильсона-Блера и молоко с целью ускоренной диагностики. Сделать заключение.

1.3. Провести бактериологическое исследование по выделению предполагаемого возбудителя:

- изучить посев исследуемого материала в тиогликолевую среду (визуально, метод Грама);

- учесть и оценить результаты посева выделенной культуры на «пестрый ряд»;

- оценить результаты развернутой реакции нейтрализации (РН) на белых мышах центрифугата культуральной жидкости исследуемой культуры с противогангренозными антитоксическими сыворотками.

По результатам сформулировать окончательный ответ. Заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

2. Промикроскопировать препарат из чистой культуры, выделенной при подозрении на столбняк, окрашенный по Граму. Сделать заключение.

3. Учесть и оценить результаты развернутой РН на белых мышах центрифугата рвотных масс и промывных вод желудка обследуемого с клиническим диагнозом «пищевая токсикоинфекция. Ботулизм?»

4. Промикроскопировать препарат из биоптата флегмоны стопы, окрашенный по Граму. Сделать заключение.

5. Ознакомиться со средами, методами и приборами для создания анаэробиоза.

6. Биопрепараты: противогангренозные и противоботулинистические сыворотки диагностические и лечебно-профилактические, противостолбнячная сыворотка; АКДС, АДС, АДС-М.

 

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите микробиологическое исследование биоптата (аутоптата) из глубины раны больного с подозрением на анаэробную газовую гангрену, для чего:

1.1. Промикроскопируйте препарат из биоптата, окрашенный по Граму. Сделайте заключение.

Учитывая быстрое развитие клиники газовой гангрены и зависимость исхода заболевания от своевременности и целенаправленности специфического (иммунотерапия) и неспецифического лечения, важно использовать ускоренные методы диагностики.

К числу ускоренных методов микробиологической диагностики относится микроскопическое исследование мазков-отпечатков полученных биоптатов. Клостридии – крупные (0,4-1,2х3-10 мкм) грамположительные палочки, не образующие капсулы, за исключением C. perfringens. Обнаружение характерных микроорганизмов позволяет дать ориентировочный ответ о присутствии в исследуемом биоптате C. perfringens (капсульные бациллы) или других клостридий.

1.2. Учтите результаты посева биоптата в среду Вильсона-Блера и молоко. Сделайте заключение.

Посев на среды Вильсона-Блера и молоко позволяет получить ориентировочный ответ о наличии C. perfringens – основного возбудителя анаэробной газовой гангрены уже через 2-6 ч культивирования. На среде Вильсона-Блера отмечают почернение среды, на среде с молоком образуется губкообразный сгусток, пронизанный пузырьками газа («штормовая реакция»). Остальные клостридии также изменяют среду Вильсона-Блера (почернение и образование газа у газообразователей) и молоко (пептонизируют, как C. histolyticum, или свертывают), но происходит это медленнее по сравнению с C. perfringens.

1.3. Проведите бактериологическое исследование по выделению и идентификации предполагаемого возбудителя с целью установления этиологии заболевания.

На 1 этапе, помимо вышеуказанных исследований, производят посев исследуемого материала на среду для контроля стерильности (СКС) или какую-либо среду для выделения анаэробов (анаэробный кровяной агар, среда Китта-Тароцци и т. д.).

На 2 этапе изучите и оцените результаты посева исследуемого материала на СКС визуально и на основании микроскопии препаратов, окрашенных по Граму, сделайте вывод.

 

На среде СКС клостридии вызывают помутнение и газообразование. При микроскопии выявляют крупные грамположительные палочки, образующие споры, превышающие диаметр клетки и занимающие субтерминальное или центральное расположение. В случае получения накопительной культуры, соответствующей характеристике клостридий, осуществляется ее посев на плотную питательную среду с целью получения изолированных колоний. Чашки инкубируют в анаэробных условиях.

На 3 этапе характерные колонии отсевают на соответствующие питательные среды для выделения и накопления чистой культуры.

На 4 этапе полученная чистая культура подлежит идентификации. Укажите в протоколе свойства и методы, позволяющие определить видовую принадлежность.

На 5 этапе учтите результаты исследований, начатые на 4 этапе по идентификации выделенной культуры предполагаемого возбудителя, для чего:

- учтите результаты посева культуры на «пестрый ряд»; для оценки результатов используйте таблицу 1;

Таблица 1

Основные свойства возбудителей газовой гангрены, столбняка, ботулизма

В и д	Капсула	Подвижность	Лецитиназа	Ф е р м е н т а ц и я	Разжижение	Молоко
глюкозы	мальтозы	сахарозы	лактозы	маннита	желатины	свернут. сыв-ки
Cl. perfringens Cl. novyi (тип А) Cl. septicum Cl. histolyticum Cl. tetani Cl. botulinum	+   - - - -   -	-   + + + +   +	+   + - - -   +	кг   кг кг ± -   кг	кг   кг кг - -   ±	кг   - - - -   ±	кг   - кг - -   -	-   - - - -   -	+)   + ± + +)   +	-   - + + -   +	бурное св. (3-6 ч) медл. св. медл. св. пептониз. медл. св. или не св. пептониз.

Примечание: +) – медленно

- учтите и оцените результаты РН на белых мышах с центрифугатом культуральной жидкости и противогангренозными антитоксическими сыворотками (таблицы 2, 3).

Таблица 2

№№	Введено животным	Результат
культуральная жидкость	антитоксическая сыворотка
1.	+	противоперфрингенс	Мыши живы
2.	+	противонови	Мыши пали
3.	+	противосептикум	Мыши пали
4.	+	противогистолитикум	Мыши пали
5.	+	противосорделлии	Мыши пали
6.	+	--	Мыши пали

Таблица 3

№№	Введено животным	Результат
культуральная жидкость	антитоксическая сыворотка
1.	+	противоперфрингенс	Мыши пали
2.	+	противонови	Мыши пали
3.	+	противосептикум	Мыши пали
4.	+	противогистолитикум	Мыши живы
5.	+	противосорделлии	Мыши пали
6.	+	--	Мыши пали

Для определения токсигенности культуры путем постановки РН смесь центрифугата исследуемой культуры с антитоксическими сыворотками вводят подкожно белым мышам. В случае нейтрализации токсина животные остаются живыми; при отрицательной РН – животные погибают.

На основании полученных результатов определите видовую принадлежность выделенной культуры, занесите результаты в протокол, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.