Оценка устойчивости микобактерий туберкулеза к лекарственным препаратам

Биологический метод

Наиболее надежным методом выявления микобактерии туберкулеза в настоящее время является заражение морских свинок исследуемыми материалами. Содержащие постороннюю микрофлору исследуемые материалы обрабатывают 1% раствором серной кислоты в течение 20 мин (включая время центрифугирования), троекратно отмывают осадок физиологическим раствором. Мокроту, ткани предварительно гомогенизируют; мочу. промывные воды центрифугируют и для исследования берут осадок. Обработанный серной кислотой и отмытый материал эмульгируют в 1-2 мл физиологического раствора и вводят подкожно в область паха 2 морским свинкам массой 250-300 г. При малом количестве исследуемого материала животных заражают внутрнбрюшинно или интратестикулярно. Такой путь заражения повышает чувствительность метода, особенно в тех случаях, когда в материале содержатся слабовирулентные изониазидоустойчивые микобактерии туберкулеза.

Зараженных животных взвешивают каждые 5 дней; если заражение было подкожное, следует регулярно пальпировать лимфатические узлы в месте заражения. В положительных случаях у свинок уменьшается масса тела, к концу месяца пальпируются увеличенные лимфатические узлы, могут появиться свищи или язвы.

Активный процесс у подопытных животных выявляется аллергической пробой. Для постановки пробы необходимо удалить шерсть с наружной поверхности бедра и внутрикожно ввести туберкулин 1:10 в объеме 0,1 мл. Результаты реакции определяют через 24 и 48 ч. На месте введения туберкулина появляются гиперемия, папула и некроз - положительная реакция; умеренная гиперемия с небольшой папулой или без нее - слабоположительная; гиперемия меньше 5 мм в диаметре - отрицательная.

Местные патологические изменения, положительная аллергическая реакция и истощение дают основание для вскрытия н исследования внутренних органов морских свинок.

В случаях, если патологических признаков нет, подопытных животных вскрывают через 3 мес.

В отдельных случаях применяют метод "слепых" пассажей: органами зараженного животного, у которого процесс не был обнаружен, заражают интактную морскую свинку; на 4-5-м пассаже удается обнаружить микобактерии туберкулеза. Идентификацию микобактерий туберкулеза из очагов в органах и тканях подопытных животных проводят бактериоскопическим и бактериологическим методами.

В последние годы все шире практикуют метод интрацеребрального заражения белых мышей.

Иммунологические методы

Используют РНГА, ИФА и реакцию потребления комплемента. Аллергический метод применяют с целью определения инфицирования населения туберкулезом, отбора лиц, которым необходима вакцинация против туберкулеза, эффективности иммунизации БЦЖ, оценки форм и динамики инфекционного процесса при туберкулезе, а также в научно-исследовательской работе.

Для выявления степени аллергизации организма используют туберкулин. Его специфическая активность связана с белковыми фракциями -протеинами, для которых липнды являются защитными субстанциями.

Внутрикожная проба Манту в настоящее время имеет преимущественное значение. В этой пробе используют туберкулин в стандартном разведении. Для постановки пробы берут "туберкулиновый" шприц объемом 1 мл и иглы с коротким срезом (№ 0415). Шприцы, пропускающие раствор между поршнем и цилиндром или через канюлю иглы, не пригодны к употреблению. Предварительно следует точно определить цену одного деления шприца на шкале цилиндра. Для каждого пациента необходимы стерильные шприц и игла.

Туберкулин вводят только внутрикожно в объеме 0,1 мл в область средней трети внутренней поверхности предплечья. Перед инъекцией кожу обрабатывают 75% этиловым спиртом, при уколе срез иглы должен быть направлен вверх.

Реакция характеризуется гиперемией, возникающей через 2-3 ч, затем формируется папула, она достигает максимального развития к исходу 48-72 ч после введения туберкулина. Папула исчезает через 4-7 дней, нередко оставляя небольшой участок пигментации.

Рекомендуется, чтобы результаты реакции определяли независимо и не одновременно два специалиста.

Диаметр папулы измеряют после пальпаторного определения ее края. В журнал учета и медицинскую книжку заносят среднюю величину ее.

В не инфицированном микобактериями организме реакция отрицательная - диаметр инфильтрата менее 1 мм. Если обнаруживается папула диаметром 2-4 мм - реакция сомнительная; инфильтрат более 5 мм - положительная.

В отдельных случаях возможны запоздалые реакции (96-120 ч).

Установлено, что риск заболевания туберкулезом лиц с туберкулиновой папулой диаметром 21 мм в несколько раз выше, чем с инфильтратом 1-14 мм.