При сборе большого объема материала (3 мл и более) анаэробные бактерии могут оставаться жизнеспособными в течение 24 ч при комнатной температуре (18—20 °С).

ББК 51.9

 

© Роспотребнадзор, 2006

© Федеральный центр гигиены
и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2006

Содержание

1. Область применения. 5

2. Общие положения. 6

3. Общие требования к сбору проб биологического материала для микробиологического исследования 6

4 Общие требования к доставке проб биоматериала в микробио­логическую лабораторию 8

5. Пробы различных видов биоматериала и среды, окружающей больного. 12

6. Правила и техника получения проб различных видов био­логического материала для микробиологического исследования 21

6.1. Пробы крови. 21

6.2. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах центральной нервной системы (ЦНС) 24

6.3. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах глаз. 25

6.4. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах уха. 29

6.5. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах дыхательных путей (мокрота) 30

6.6. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах мочеполовой системы 37

6.7. Пробы диализата у больных, находящихся на постоянном амбулаторном диализе 53

6.8. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах желудочно-кишечного тракта и желчевыводящих путей 54

6.9. Пробы у пациентов, получающих в качестве медицин­ской помощи перитонеальный диализ 63

6.10. Пробы стерильных жидкостей тела (кроме крови, лик­вора, мочи) 64

6.11. Пробы при инфекциях кожи и подкожной клетчатки. 65

6.12. Пробы из инфицированных глубоких ран, абсцессов, мягких тканей. 70

6.13. Пробы при инфекциях в стоматологии (десны, перио­донтальные, перианикальные и стоматиты Винсента) 71

6.14. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах костей и суставов. 71

6.15. Пробы для определения обсемененности сосудистого катетера при подозрении на катетер-ассоциированную инфекцию 73

6.16. Пробы материала при аутопсии. 73

7. Пробы биоматериалов для определения наличия анаэробов, вирусов, простейших 75

7.1. Пробы биоматериала для определения наличия анаэробов. 75

7.2. Пробы биоматериала для определения наличия вирусов. 78

7.3. Пробы биоматериала для определения наличия простей­ших. 83

8. Пробы биоматериала и иммуносерологические методы опре­деления возбудителей инфекционно-воспалительных процессов 94

8.1. Общие положения. 94

8.2. Иммуносерологическое обследование. 95

8.3. Методы исследования, применяемые в иммуносеро­логии. 97

8.4. Сбор и хранение образцов для ПЦР-диагностики. 99

8.5. Сбор проб для диагностики сифилиса. 102

9. Библиографические данные. 116

Приложение.  Клинические проявления заболеваний, вызываемых некоторыми бактериями, патогенными амебами, простейшими, гельминтами.............................................................................................................. 117

 

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

23 декабря 2005 г.

Дата введения: 1 июля 2006 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Техника сбора и транспортирования
биоматериалов в микробиологические
лаборатории

Методические указания
МУ 4.2.2039—05

1. Область применения

1.1. В методических указаниях изложены правила сбора и транспортирования биологических материалов в микробиологические лаборатории в целях повышения качества результатов лабораторных исследований и организации противоэпидемических и профилактических мероприятий, а также профилактики внутрибольничных инфекций у медицинского персонала и пациентов.

1.2. Методические указания предназначены для использования органами и организациями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут использоваться органами и организациями здравоохранения.

2. Общие положения

2.1. Получение достоверных данных о выявлении источников заражения необходимо для своевременной и эффективной организа­ции противоэпидемических и профилактических мероприятий, оценки уровня пораженности населения при проведении эпидемио­логического надзора.

2.2. Разработанная техника сбора и транспортирования биологических материалов в микробиологические лаборатории позволит снизить уровень преаналитической ошибки и повысить качество работы лабораторий по объективизации результатов.

2.3. Методические указания определяют правила предохранения медицинского персонала и пациентов от инфицирования при сборе и доставке в лаборатории проб биоматериалов, которые могут быть обсеменены бактериями, грибами, вирусами, паразитами.

2.4. Методические указания могут применяться при проведении эпидемиологического надзора за антимикробной резистентностью выделенных и идентифицированных в лаборатории возбудителей инфекции, оптимизации применения антимикробных препаратов и мероприятий в области профилактики, контроля и сдерживания резистентности на локальном, региональном и национальном уровнях.

3. Общие требования к сбору проб биологического
материала для микробиологического исследования

3.1. Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при сборе проб биоматериалов и доставке его в лабораторию необходимо:

¨ не загрязнять наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;

¨ не загрязнять сопроводительные документы (направления);

¨ свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;

¨ использовать стерильные одноразовые или разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке контейнеры (емкости) для сбора, хранения и доставки проб;

¨ транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами;

¨ соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;

¨ собирать пробы в стерильную одноразовую или стеклянную посуду (не загрязненную биоматериалом, не испорченную трещинами, отколотыми краями и другими дефектами).

3.2. Пробы биоматериала необходимо собирать следующим образом:

¨ до начала антибактериальной терапии, при отсутствии такой возможности – непосредственно перед повторным введением (приемом) препаратов;

¨ в количестве (вес, объем), необходимом для выполнения анализа, т. к. недостаточное для исследования количество биоматериала приводит к получению ложных результатов;

¨ с минимальным загрязнением материала нормальной микрофлорой, т. к. ее наличие приводит к ошибочной трактовке результатов, полученных, например, при исследовании мокроты, проб из носа, глотки (зева), гениталий и др.

3.3. При сборе пробы следят за тем, чтобы в лаборатории при вскрытии емкости с биоматериалом не образовывался аэрозоль: пробы крови и других жидкостей организма аккуратно без образования пены переносят из шприца в сухую и/или наполненную средой (антикоагулянтом) посуду.

3.4. В направлении на исследование указывают: фамилию, имя, отчество больного; год рождения; отделение, в котором он находится; номер истории болезни (амбулаторной карты); диагноз; материал, посылаемый на исследование, и задачи исследования; дату и время взятия материала (часы); антибактериальные (иммунные) препараты, если проба сдается на фоне антибиотико- и/или иммунотерапии; фамилию, имя, отчество лечащего врача (консультанта), направляющего пробу на исследование. При направлении биоматериалов, полученных при вскрытии, указывают также отделение, в котором умер больной.

3.5. Перед сбором пробы, особенно при применении инвазивных методов, учитывается вероятность риска для пациента и пользы, а также значимость именно данного вида биоматериала для целей объективизации клинического диагноза и оценки проводимых или планируемых лечебных мероприятий.

4. Общие требования к доставке проб биоматериала
в микробиологическую лабораторию

4.1. Все собранные пробы отправляют в микробиологическую лабораторию немедленно после получения, за исключением случаев использования емкостей с транспортировочными средами, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке.

Это необходимо для:

¨ сохранения жизнеспособности возбудителей и возможности выделения микроорганизмов, требующих особых условий культивирования (Haemophylus и др.);

¨ предотвращения избыточного роста быстрорастущих и активных микроорганизмов;

¨ поддержания соотношения исходных концентраций изолятов при наличии в пробе микробных ассоциаций;

¨ сокращения времени контакта пробы с некоторыми антисептиками, используемыми местно, которые могут обладать антибактериальной активностью;

¨ объективизации клинического диагноза инфекционно-воспали­тельного заболевания и оценки результатов терапии.

4.2. Допускается использование альтернативных методов для увеличения сроков доставки биоматериала в лабораторию.

Пробы хранят в холодильнике при температуре 2—8 °С, за исключением нижеперечисленных случаев.

4.2.1. Когда пробу хранят в специализированной транспортировочной емкости (транспортировочная система), разрешенной к применению в установленном порядке, представляющей собой стерильную одноразовую пробирку с агаризованной или жидкой транспортировочной средой и зондом-тампоном, вмонтированным в пробку и стерильно упакованным вместе с пробиркой. В таких емкостях пробы хранят при комнатной температуре (18—20 °С). Транспортировочные среды, специальные плотные с активированным углем и без него, позволяют обеспечить сохранение жизнеспособности микроорганизмов, требующих особых условий культивирования, в течение 48—72 ч.

Для проб на анаэробы и для фекальной флоры используют специальные емкости с транспортировочной средой, пробирки со средами для выделения кампилобактерий и хеликобактера, разрешенные к применению в установленном порядке. Такие среды создают анабиотическую атмосферу для микроорганизмов, что способствует снижению их метаболизма, сдерживанию роста, препятствует их высыханию и накоплению продуктов жизнедеятельности.

Каждую пробу, собранную в жидкую среду, тщательно перемешивают со средой.

4.2.2. Когда кровь культивируют в бульоне, тогда после получения пробу хранят в термостате при температуре 35—37 °С.

Если пробы собирают в специальные емкости для последующего исследования с двухфaзной средой, их следует хранить при комнатной температуре (18—20 °С).

4.2.3. Когда при возможном наличии температурозависимых микроорганизмов (Neisseria sp.) пробы оставляют при комнатной температуре (18—20 °С).

4.2.4. Когда пробу хранят в емкостях с соответствующими питательными средами, подготовленных в лаборатории или разрешенных к применению в установленном порядке при проведении:

¨ бактериологических исследований – в пробирках с вмонтированными зондами-тампонами или без них со средой, состоящей из забуференного физиологического раствора с глицерином для определения энтеробактерий семейства Кишечных («на дизгруппу») и аэромонад. При работе с тампонами, вмонтированными в ватно-марлевую пробку, следят за тем, чтобы не замочить (не загрязнить) пробку средой и/или собранным материалом. Собранную пробу тщательно перемешивают со средой. Используют также готовые пробирки со специальной плотной средой, разрешенные к применению в установленном порядке;

¨ вирусологических исследований – в специальных емкостях с жидкой средой, разрешенных к применению в установленном порядке;

¨ паразитологических исследований – пробу тщательно смешивают с консервантом.

Пробы ликвора хранят при комнатной температуре (18—20 °С), а при проведении в лаборатории вирусологических исследований – в термостате при 35—37 °С.

4.3. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие аэробов и факультативных анаэробов, используют:

¨ одноразовые стерильные сухие пробирки с вмонтированным зондом-тампоном (тубсеры) или емкости с транспортировочной средой, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; допускается использование стерильных стеклянных пробирок, укупоренных газопроницаемой пробкой с вмонтированным зондом-тампоном, приготовленных в лаборатории;

¨ одноразовые стерильные емкости с завинчивающейся крышкой (допускаются стеклянные с газопроницаемой пробкой) – для сбора проб мочи, мокроты, фекалий, бронхо-альвеолярного лаважа, биопсийного (кусочки ткани) материала;

¨ стерильные одноразовые с завинчивающейся пробкой или стеклянные пробирки – для сбора стерильных жидкостей, бронхо-альвео­лярного лаважа, отделяемого из дренажей или соскобов;

¨ стерильные чашки Петри – для сбора проб волос или для транспортирования соскобов с маркировкой дна чашки;

¨ специальные стерильные носоглоточные и урогенитальные зонды-тампоны с осью из алюминия (диаметр оси – 0,9 мм) и маленьким тампоном из хлопка или вискозы на кончике (диаметр тампона – 2,5 мм), вмонтированным в пробку, укупоривающую стерильную одноразовую стеклянную пробирку – для проб из носоглотки на B. рertusis и из уретры у мужчин.

4.4. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие анаэробов, используют емкости со специальными транспортировочными средами и пробирки с тиогликолевой средой; пробирки со средами для выделения кампилобактерий и хеликобактера, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке. Пробу, собранную в жидкую среду, тщательно с ней перемешивают. Для получения проб рекомендуются следующие приемы:

¨ отделяемое дренажей, используемых для активной аспирации полостей, отсасывают стерильным шприцем с плотным поршнем в объеме 2—4 мл; на заполненный шприц надевают стерильную иглу, закрытую стерильным ватным тампоном, удаляют из шприца избыток воздуха; ватный тампон сбрасывают в дезинфицирующий раствор; конец иглы вкалывают в стерильную резиновую пробку и в таком виде шприц с материалом доставляют в лабораторию;

¨ содержимое очагов инфекции и полостей, получаемое путем их пунктирования, собирают в объеме 2—4 мл с помощью 2-, 5-, 10-миллилитровых шприцев с плотным поршнем; из шприца удаляют избыток воздуха, закрыв иглу стерильным ватным тампоном, который затем сбрасывают в дезинфицирующий раствор; иглу дезинфицируют протиранием тампоном, смоченным 70 %-м этиловым спиртом; для герметизации конец иглы вкалывают в стерильную резиновую пробку и в таком виде шприц с материалом доставляют в лабораторию.

При сборе большого объема материала (3 мл и более) анаэробные бактерии могут оставаться жизнеспособными в течение 24 ч при комнатной температуре (18—20 °С).

Если отделяемого всего несколько капель, его переносят из шприца в небольшую емкость или в пробирку с транспортировочной средой немедленно после получения (емкости с транспортировочными средами накануне получают в лаборатории).

Кусочки тканей (биопсийный материал) при подозрении на анаэробную инфекцию собирают в стерильные одноразовые емкости с завинчивающейся крышкой (допускается – в стеклянную посуду с притертой крышкой) и доставляют в лабораторию немедленно.

4.5. Для транспортирования проб, исследуемых на наличие вирусов, используют специальные емкости с жидкой средой для сохранения вирусов.

5. Пробы различных видов биоматериала
и среды, окружающей больного

Таблица 1

Посуда, используемая
для доставки проб в лабораторию

Источник и вид клинического материала	Изделия, используемые для доставки пробы
Кровь	Специальные транспортировочные емкости со средой, с нейтрализаторами антибиотиков и реагентами, разрушающими форменные элементы крови, или без них, разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; двухфазная среда во флаконах
Центральная нервная система
Ликвор	Стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой
Материал при абсцессах мозга и биопсийный материал при воспалительных процессах в центральной нервной системе	Шприц с иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку; пробирка с тиогликолевой средой, закрытая стерильной резиновой пробкой; транспортировочные емкости со средой для сохранения анаэробов
Нижние дыхательные пути
Биопсийный материал легких и трахеи; мокрота, естественно откашливаемая и индуцированная; соскоб с бронхов	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой (для сбора мокроты); подготовленная в лаборатории стерильная стеклянная емкость
Аспират трахеи, бронхо-альвеолярный лаваж, смывы с бронхов	Стерильная одноразовая емкость для сбора мокроты с завинчивающейся крышкой; плотно закрывающаяся стерильная стеклянная пробирка
Аспират транстрахеальный и легких	Специальные транспортировочные емкости со средой для анаэробов; шприц с иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку; емкость с тиогликолевой средой; стерильная одноразовая пластиковая емкость с завинчивающейся крышкой; плотно закрывающаяся пробирка

 

Продолжение табл. 1
Верхние дыхательные пути
Мазки из носа, зева, носоглотки, наружного уха	Стерильный одноразовый зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер), или транспортировочная емкость с соответствующей средой; транспортировочный сосуд для вирусов; стерильная стеклянная посуда, смонтированная в лаборатории
Назальный смыв, назофагальный аспират	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; транспортировочный сосуд для вирусов
Жидкость, получаемая при тимпаноцентезе, аспират синуса, получаемые при аспирации иглой	Шприц с иглой, обеззараженной после проведения манипуляции с помощью тампона, смоченного 70 %-м этиловым спиртом, и воткнутой в стерильную резиновую пробку; можно перенести материал из шприца в стерильную одноразовую или стеклянную пробирки или специальный сосуд со средой для транспортирования анаэробов
Ткань, получаемая во время операции носа, глотки, уха	Стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой; пробирка с тиогликолевой или другой транспортировочной средой, плотно закрытая стерильной резиновой пробкой; плотно закрытая стерильная одноразовая пластиковая или стеклянная пробирка
Глаза
Соскобы с конъюнктивы уголка глаза	Мазки на стерильных обезжиренных предметных стеклах; материал, который отбирают в специальный транспортировочный контейнер со средой или засевают в питательную среду
Интраокулярная жидкость	Мазки на стерильных обезжиренных предметных стеклах; материал, который отбирают в специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов или шприц с предварительно обеззараженной 70 %-м этиловым спиртом иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку
Отделяемое, взятое стерильной стеклянной палочкой или стерильным	Стерильная одноразовая или стеклянная пробирка с сахарным бульоном, в которую вмонтирован зонд-тампон, или стерильная
ватным зондом - тампоном со слизистой оболочки нижней переходной складки, с края век, при язве – с роговицы (после обезболивания), при уголковом конъюнктивите – с уголков век	стеклянная палочка, используемые для взятия пробы; специальный транспортировочный контейнер со средой для вирусов
Секрет из слезного мешка	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер), или в стеклянную пробирку
Мочеполовая система
Моча
Средняя порция свободно истекающей мочи; из канала подвздошной кишки, использованного для создания искусственного мочевого пузыря; из катетера у реанимационных больных. Смыв из мочевого пузыря. Проба, полученная при билатеральной уретральной катетеризации	Стерильная одноразовая емкость для сбора мочи с завинчивающейся крышкой или стерильная одноразовая пробирка с крышкой; или специальная одноразовая пробирка для сбора мочи. При использовании стерильной стеклянной пробирки с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой следят за тем, чтобы не замочить пробку материалом (объем пробы 10—20 мл)
Проба, полученная при проведении надлобковой аспирации	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; стерильный шприц с иглой, предварительно обеззараженной 70 %-м этиловым спиртом и воткнутой в резиновую пробку
Материал из женских половых органов
Жидкости: амниотическая, фаллопиевых труб, бартолиновая	Специальная транспортировочная емкость со средой для анаэробов; шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; шприц с иглой, обработанной 70 %-м спиртом и воткнутой в стерильную резиновую пробку (объем пробы 1—2 мл)
Пробы из цервикального канала, уретры, влагалища	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер) или емкость транспортировочная со специальной средой;
	зонд-тампон, вмонтированный в целлюлозную или ватно-марлевую пробку стерильной стеклянной пробирки. Предметное стекло с приготовленным мазком для исследования бактериальных инфекций, передаваемых половым путем, и вирусов. Пробирка с транспортировочной средой с активированным углем для сохранения гонококков в течение 48 ч и более
Пробы материала из эндометрия	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой или пробирка, или емкость транспортировочная со средой для анаэробов; стерильная стеклянная посуда
Материал наружных половых органов	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; предметное стекло с мазком, закрытым покровным стеклом для определения T. рallidum; зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; специальная транспортировочная пробирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков и транспортировочные емкости для вирусов и хламидий; мазки на предметных стеклах для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Материал из мужских половых органов
Мазки из уретры	Зонд-тампон на алюминиевой оси (уретральный зонд-тампон), вмонтированный в стерильные одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирки; специальная транспортировочная пробирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков и транспортировочные сосуды для вирусов и хламидий; мазки на предметных стеклах для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Эякулят, сперма	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; стерильные пробирка или тубсер, одноразовые или стеклянные
Материал придатков яичка при эпидидимите	Специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов или емкость с тиогликолевой средой; стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой или стерильная стеклянная пробирка с целлюлозной или ватно-марлевой пробкой
Поражение пениса	Шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; предметное стекло с мазком на T. рallidum, покрытое покровным стеклом; зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; транспортировочные контейнеры для вирусов и хламидий; мазки для обнаружения других возбудителей инфекций, передаваемых половым путем
Материал при подозрении на наличие гонореи
Мазки из ануса, цервикального канала, уретры, влагалища	Зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную про­бирку; специальная транспортировочная про­бирка со средой с активированным углем для сохранения гонококков в течение 48 ч и более
Желудочно-кишечный тракт
Полость рта	Зонд-тампон, вмонтированный в стерильную одноразовую (тубсер) или стеклянную пробирку; стерильная одноразовая или стеклянная емкость для сбора смыва из ротовой полости
Желудочный лаваж или промывная жидкость; дуоденальный аспират; проба, получаемая при ректороманоскопии; ректальный биопсийный материал	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; специальный стерильный контейнер для сбора мокроты; стерильная стеклянная емкость; аспират – в стерильном шприце с иглой, предварительно обеззараженной и воткнутой в стерильную резиновую пробку
Ректальный мазок	Одноразовый стерильный зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер); или стерильная пробирка со специальной транспортировочной средой; зонд-тампон из нержавеющего материала, вмонтированный в целлюлозную или ватно-марлевую пробку стерильной стеклянной пробирки
Фекалии на наличие кишечных инфекций («дизгруппа»), хеликобактера, кампилобактера	Стерильная пробирка с тампоном в физиологическом растворе с глицерином; контейнер транспортировочный со средой для анаэробов в фекальных образцах, со специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylоbacter sp. и Helicobacter sp.; зонд-тампон в сухой стерильной одноразовой пробирке (тубсер); стерильная стеклянная пробирка, смонтированная с зондом-тампоном на металлической проволоке из титана, стали, алюминия. Не допускается использование тампона с деревянной осью
Фекалии на наличие дисбактериоза по родовому и видовому составу микробов («на флору»)	Специальный транспортировочный контейнер со средой для анаэробов в фекальных образцах, со специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylоbacter sp. и Helicobacter sp., разрешенные к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке; зонд-тампон в пробирке с физиологическим раствором с глицерином в стерильной одноразовой или стеклянной пробирке; специальный одноразовый стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой; стеклянная, смонтированная в лаборатории емкость
Фекалии на наличие дисбактериоза с количественным учетом выделенных иидентифицированных микробов («на дисбактериоз»)	Специальные стерильные одноразовые контейнеры с завинчивающейся крышкой и лопаточкой для сбора материала и отбора пробы для посева, имеющие стандартный вес; смонтированная в лаборатории специальная стерильная стеклянная емкость
Кожа и подкожные ткани
Язвы, узелки (узелковые утолщения), неглубокие, поверхностные раны (гнойные; ожоги); глубокие раны или абсцессы, кости	Специальные стерильные одноразовые контейнеры с завинчивающейся крышкой; стерильные пробирки с пробками одноразовые или стеклянные объемом 5 мл; емкости со специальными средами для анаэробов
Экссудат подкожной и мягких тканей; аспират мягких тканей	Стерильный шприц без иглы, закрытый стерильной резиновой пробкой; шприц с иглой, предварительно обеззараженной 70 %-м этиловым спиртом и воткнутой в резиновую пробку
Стерильные жидкости организма, за исключением крови, ликвора, мочи (см. выше)
Жидкости
Плевральная, перитонеальная, асцитическая, суставная, синовиальная	Стерильная одноразовая емкость с завинчивающейся крышкой; закрытый шприц без иглы или с иглой, предварительно обеззараженной 70 %-м этиловым спиртом и воткнутой в стерильную резиновую пробку
Биоматериал для ПЦР-диагностики
Кровь; другие жидкости организма	Стерильные одноразовые пробирки с пробкой объемом 1,5 мл с антикоагулянтом. Пробирку переворачивают 3—5 раз для смешивания пробы с антикоагулянтом. Доставка в лабораторию – в штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Биопсийный материал; соскобы; мокрота и другие виды биоматериала	Стерильные сухие одноразовые пробирки типа «Эппендорф» и другие аналогичные. Доставка в лабораторию – в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Пробы среды, окружающей больного
Воздух	Стерильные чашки Петри одноразовые (d = 90 мм) или стеклянные (d = 100 мм) с плотными питательными средами. Доставка в лабораторию в специальных контейнерах-переносках
Смывы с объектов среды, окружающей больного	Стерильные зонды-тампоны, вмонтированные в прозрачные пробирки с прозрачной бесцветной жидкой средой. Пробы доставляют в лабораторию в штативах из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Пробы для определения стерильности
Кровь и компоненты крови из отделения, занимающегося их заготовкой	Емкости с заготовленным материалом доставляют в лабораторию в специальных контейнерах-переносках
Смывы с медицинского инструментария, шлангов аппаратуры, используемой в реанимационных и анестезиологических отделениях, а также в операционных; рук медицинского персонала; белья	Стерильные зонды-тампоны, вмонтированные в прозрачные пробирки с прозрачной бесцветной жидкой средой. Пробы доставляют в лабораторию в штативах из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Хирургический материал: тампоны, салфетки, турунды, ватные тампоны на деревянной оси	Стерильные прозрачные пробирки с пробками, с прозрачной бесцветной жидкой средой с 3—5 стерильными стеклянными бусинками. Пробы доставляют в лабораторию в штативах из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Шовный материал: кетгут, хранящийся в операционной в спиртовом растворе йода	Стерильная пробирка (флакон с пробкой) с раствором нейтрализатора (гипосульфит натрия)
Шелк, капрон, мономерные синтетические нити, хранящиеся в операционной в спиртовом растворе	Стерильная пробирка с пробкой со стерильной дистиллированной водой в качестве смывной жидкости. Пробы шовного материала доставляют в лабораторию в штативах, подлежащих стерилизации в автоклаве
Смывы с операционного поля больного	До обработки поля: в прозрачные пробирки, наполненные прозрачной жидкой питательной средой. После обработки поля: стерильная пробирка (флакон с пробкой) с раствором нейтрализатора (гипосульфит натрия). Доставку материала в лабораторию осуществляют в штативах, подлежащих стерилизации в автоклаве
Пробы для определения иммунологических факторов системы антиинфекционной защиты (система антиинфекционной резистентности организма – САИР)
Кровь и другие жидкости организма для определения гуморальных факторов защиты	Одноразовые шприцы-пробирки (вакутайнеры); стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки со стерильными резиновыми, целлюлозными или ватно-марлевыми пробками. Пробы доставляют в лабораторию в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве. При использовании стеклянных пробирок с ватно-марлевыми пробками – не замочить их при транспортировании
Кровь и другие жидкости организма для определения клеточных факторов защиты	Стерильные одноразовые пробирки с завинчивающейся пробкой; стерильные стеклянные пробирки, плотно закрытые стерильной резиновой пробкой. Пробирки одноразовые с антикоагулянтом, подлежащие центрифугированию. Доставку в лабораторию осуществляют в специальном штативе из материалов, подлежащих стерилизации в автоклаве
Мазки для определения бактериальных и вирусных антигенов (например, при подозрении на наличие инфекций, передаваемых половым путем)	Стерильное обезжиренное предметное стекло; для T. pallidum – предметное стекло должно быть покрыто покровным стеклом. Доставку в лабораторию осуществляют в одноразовом контейнере или стерильных одноразовых или стеклянных чашках Петри в специальных контейнерах

Примечание. Пробы гноя, жидкости и тканей следует доставлять в лабораторию в специальных стерильных одноразовых контейнерах с завинчивающимися крышками. Зонды-тампоны – сухими в стерильных одноразовых пробирках (тубсерах) или в емкостях с транспортировочной средой, если материал нельзя доставить в лабораторию немедленно после взятия пробы. Для этих целей можно использовать транспортировочные среды, в т. ч. в одноразовых пробирках, упакованных вместе со стерильным зондом-тампоном, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке. Зонды-тампоны выпускают (готовят) с использованием ряда материалов: для самого тампона (ватно-марлевый, хлопковый, вискозный, дакроновый), для оси зонда-тампона (дерево, пластик, нержавеющий металл – титан, сталь, алюминий) и плотными агаризованными средами: с углем и без него для анаэробов.

Многие клинически значимые анаэробы, например, Clostridium рerfringens, Bacteroides fragilis достаточно толерантны к наличию кислорода и хорошо сохраняются в большом количестве гноя, пробах жидкостей и тканях организма, а также на зонде-тампоне в специальной транспортировочной или тиогликолевой средах.

Более чувствительные к кислороду (например фузобактерии) также хорошо сохраняются в пробе биологического материала, и если материал посеять в течение 2—3 ч от момента его сбора, то не требуется особого внимания к способу доставки. Анаэробы, требующие особых условий культивирования, не сохраняют жизнеспособность на зонде-тампоне в транспортировочной емкости со средой, не предназначенной для доставки анаэробов, за исключением емкостей со специальными транспортировочными средами или тиогликолевой.

Вместе с тем, эти микроорганизмы растут на 5—7 суток дольше времени, в течение которого большинство практических лабораторий инкубирует чашки, засеянные материалом для выделения и идентификации аэробов и факультативных анаэробов. По этой причине в обычных практических лабораториях представляется нецелесообразным рутинное исследование на наличие анаэробов с использованием специальных транспортировочных анаэробных емкостей со средами, и можно ограничиться пробирками с тиогликолевой средой.

Для сбора и транспортирования проб используют среды, емкости, инструменты и материалы, разрешенные к применению в Российской Федерации в установленном порядке.

6. Правила и техника получения проб
различных видов биологического материала
для микробиологического исследования

Получение у пациента любой пробы, требующей использования инвазивных методов, рекомендуется производить врачом (исключение – проба крови, которую может собирать процедурная медицинская сестра).

При необходимости сбора материала при помощи зонда-тампона на открытой операционной поверхности или в случае иного инвазивного вмешательства допустимо использование готовых зондов-тампонов с международным уровнем безопасности не ниже Class IIA, разрешенных к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке.

6.1. Пробы крови

Пробы для определения наличия в крови биологических агентов (бактериемия, виремия и др.) получают венопункцией периферических вен (чаще вены локтевого сгиба), артерий или из пятки у новорожденных.

Сбор пробы из постоянного внутривенного или внутриарте­риального катетеров допускается только в случаях подозрения на наличие катетер-ассоциированной инфекции или отсутствия возможности ее получения венопункцией.

6.1.1. При остром сепсисе, менингите, остеомиелите, артрите, острых нелеченных бактериальных пневмониях и пиелонефрите собирают 2 пробы из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии.

6.1.2. При подозрениях на наличие эндокардита и вялотекущего сепсиса с маленькой (10—30 КОЕ/мл) концентрацией возбудителя в циркуляции:

¨ при наличии острого процесса собирают 2 пробы из двух участков сосудов (различных сосудов) в течение первых 1—2 ч подъема температуры тела (не на пике температуры!) и до начала терапии;

¨ при подостром или вялотекущем течении собирают в первый день 3 пробы с интервалом 15 мин и более. Если все пробы отрицательны, на вторые сутки после посева собирают еще 3;

¨ у пациентов с эндокардитами, получающими антибиотики, собирают по 2 отдельные пробы в каждый из трех дней с положительной клинической динамикой терапии;

¨ для подтверждения клинического диагноза «инфекционный эндокардит» при невозможности получения у пациента необходимого количества проб крови для микробиологического анализа или при отрицательных результатах посевов пробы крови посылают на исследование иммунологических факторов системы защиты организма (системы антиинфекционной резистентности – САИР); доставку в лабораторию осуществляют в стерильных стеклянных или одноразовых пробирках с крышкой (пробкой), полученных накануне в лаборатории;

¨ если больной страдает врожденным пороком сердца (ВПС), следует помнить, что ВПС – продром инфекционного эндокардита, и в алгоритм обследования такого пациента включают определение иммунологических факторов САИР.

6.1.3. У больных, в комплекс терапии которых включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48 ч; пробы необходимо собирать непосредственно перед введением (приемом) следующей дозы препарата.

6.1.4. При наличии у больного лихорадки неясного генеза первоначально собирают 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24—36 ч еще 2 пробы на фоне повышения температуры тела (не на пике температуры!).

6.1.5. Техника получения пробы крови. Сбор проб крови для посева производят 2 человека у постели больного или в процедурной.

Для получения пробы необходимо выполнить следующее:

¨ участок кожи над выбранным для пункции сосудом продезинфицировать: обработать кожу тампоном, смоченным 70 %-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1—2 %-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с;

¨ подождать, пока высохнет обработанный участок. Не допускается пальпировать сосуд после обработки кожи перед введением иглы;

¨ при работе с флаконами с двойной средой: стерильным шприцем собрать у взрослых 10 мл крови, у детей – 5 мл; над пламенем спиртовки открыть флакон; внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу; обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой; осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.

При использовании готовых флаконов со средой и реагентами, нейтрализующими антибиотики и разрушающими форменные элементы крови, или без них, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке, у взрослых получают 10—30 мл крови, у детей – 0,5—3,0 мл.

При этом:

¨ параллельно с дезинфекцией участка кожи для пунктирования обрабатывают пробки флаконов 70 %-м этиловым спиртом (раствор йода не допускается использовать для обработки пробок при работе с бутылочками, например, Bactec, Vital и другими аналогичными, разрешенными к применению для этих целей в Российской Федерации в установленном порядке);

¨ кровь, получаемую от взрослых, в равных объемах, проколов при этом пробку емкости, вносят в «аэробную» и «анаэробную» емкости; кровь, полученную от детей, – в специальную «детскую» бутылочку, проколов при этом пробку емкости.

6.1.6. После венопункции и посева крови в емкости со средой для предотвращения возможного раздражения (ожога) с участка кожи пациента стирают остатки йода с помощью тампона, смоченного 70 %-м этиловым спиртом.

6.2. Пробы при инфекционно-воспалительных процессах
центральной нервной системы (ЦНС)

6.2.1. Ликвор. В микробиологическую лабораторию на исследование отправляют 4,0—5,5 мл ликвора, полученного при люмбальной пункции из субарахноидального пространства между позвонками L3—L4, L4—L5 или L5—S1, а также при пунктировании боковых желудочков мозга.

Сбор проб проводят медленным заполнением трех пробирок тремя порциями материала для исследования в лабораториях. Используют стерильные пробирки с плотно закрывающимися крышками (одноразовые с пробкой или стеклянные со стерильной резиновой пробкой).