К исследуемой жидкости добавить 1-2 капли раствора Люголя. При наличии крахмала отметьте появление темно-синего окрашивания.
Реакция Троммера
К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO4 и нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. Полученный результат занести в таблицу.
| № п/п | Субстрат | Фермент | Температура | Реакция на крахмал с йодом | Реакция Троммера | Выводы |
| 1. | ||||||
| 2. |
Сделайте вывод о субстратной специфичности фермента.
Термолабильность ферментов.
Большинство ферментов термолабильны - при нагревании до 60-80о утрачивают каталитическую активность. Степень инактивирования зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа снижается. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия ферментов слюны: амилазы и мальтазы.
Порядок выполнения работы
В чистую пробирку отливают небольшое количество разведенной слюны (2-3мл) и кипятят ее в течение 5-8 минут, после чего охлаждают В 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В 1 пробирку добавляют 10 капель слюны, разведенной в 5 раз, во 2-ю 10 капель прокипяченной слюны, в 3-ю 10 капель воды (качестве контроля). Все пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре 38она 10 минут. После этого проделывают качественные реакции на крахмал и реакцию Троммера на продукты расщепления.
Реакция на крахмал. К 5 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора йода в йодистом калии. В присутствии крахмала появляется синее окрашивание. Полученный результат занести в таблицу.
| № п/п | Субстрат | Фермент | Температура | Реакция на крахмал с йодом | Реакция Троммера | Выводы |
| 1. | ||||||
| 2. | ||||||
| 3. |
Влияние реакции среды (оптимум рН) на действие ферментов слюны.
Для проявления максимальной каталитической активности ферментов требуются определенные условия, в том числе оптимальная концентрация водородных ионов. Каждый фермент наиболее активен в пределах довольно узкой зоны рН, называемой оптимум рН. Активность ферментов уменьшается, если рН меняется в любую сторону от оптимального значения. Отклонение рН от оптимума влияет на степень ионизации фермента и субстрата, может нарушить связь между белковой частью фермента и их простетическими группами, может влиять на связывание субстрата с ферментами.
Оптимальное значение рН для некоторых ферментов
| Фермент | рН |
| Пепсин | 1,5-2,5 |
| Трипсин | 8,0-9,0 |
| Сахараза кишечная | 6,2 |
| Амилаза слюны | 6,9-7,0 |
| Липаза желудочного сока | 6,0 |
| Липаза панкреатическая | 7,0-8,5 |
| Каталаза | 7,0 |
Порядок выполнения работ
В 7 предварительно пронумерованных пробирок наливают 0,2 м раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 м раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 100 раз. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38о на 5-10 минут (в зависимости от индивидуальных особенностей активности слюны).
Влияние рН среды на активность амилазы
| № п/п | Кол-во 0,2 м р-ра Na2HPO4, мл | Кол-во р-ра лимонной к-ты, мл | рН смеси | Кол-во 0,5% р-ра крахмала на 1% р-р NaCl | Кол-во разведенной слюны(1:100), мл | Окрашивание с йодом |
| 1. | 0,58 | 0,42 | 5,6 | по 10 капель | по 10 капель | |
| 2. | 0,63 | 0,37 | 6,0 | |||
| 3. | 0,69 | 0,31 | 6,4 | |||
| 4. | 0,77 | 0,23 | 6,8 | |||
| 5. | 0,87 | 0,13 | 7,2 | |||
| 6. | 0,94 | 0,06 | 7,6 | |||
| 7. | 0,97 | 0,03 | 8,0 |
Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калии, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно. В зависимости от активности слюны ее можно разводить не в 100, а в 50 или 10 раз.
10. Определить содержание витамина С в моче, шиповнике, картофеле, проводить качественные реакции на витамины А, Д, Е, B1, B2, РР
