Качественная реакция на крахмал

К исследуемой жидкости добавить 1-2 капли раствора Люголя. При наличии крахмала отметьте появление темно-синего окрашивания.

Реакция Троммера

К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO₄ и нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. Полученный результат занести в таблицу.

№ п/п	Субстрат	Фермент	Температура	Реакция на крахмал с йодом	Реакция Троммера	Выводы
1.
2.

Сделайте вывод о субстратной специфичности фермента.

 

Термолабильность ферментов.

Большинство ферментов термолабильны - при нагревании до 60-80^о утрачивают каталитическую активность. Степень инактивирования зависит от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа снижается. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия ферментов слюны: амилазы и мальтазы.

Порядок выполнения работы

В чистую пробирку отливают небольшое количество разведенной слюны (2-3мл) и кипятят ее в течение 5-8 минут, после чего охлаждают В 3 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 1% раствора крахмала. В 1 пробирку добавляют 10 капель слюны, разведенной в 5 раз, во 2-ю 10 капель прокипяченной слюны, в 3-ю 10 капель воды (качестве контроля). Все пробирки помещают в термостат или водяную баню при температуре 38^она 10 минут. После этого проделывают качественные реакции на крахмал и реакцию Троммера на продукты расщепления.

Реакция на крахмал. К 5 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора йода в йодистом калии. В присутствии крахмала появляется синее окрашивание. Полученный результат занести в таблицу.

№ п/п	Субстрат	Фермент	Температура	Реакция на крахмал с йодом	Реакция Троммера	Выводы
1.
2.
3.

Влияние реакции среды (оптимум рН) на действие ферментов слюны.

Для проявления максимальной каталитической активности ферментов требуются определенные условия, в том числе оптимальная концентрация водородных ионов. Каждый фермент наиболее активен в пределах довольно узкой зоны рН, называемой оптимум рН. Активность ферментов уменьшается, если рН меняется в любую сторону от оптимального значения. Отклонение рН от оптимума влияет на степень ионизации фермента и субстрата, может нарушить связь между белковой частью фермента и их простетическими группами, может влиять на связывание субстрата с ферментами.

Оптимальное значение рН для некоторых ферментов

Фермент	рН
Пепсин	1,5-2,5
Трипсин	8,0-9,0
Сахараза кишечная	6,2
Амилаза слюны	6,9-7,0
Липаза желудочного сока	6,0
Липаза панкреатическая	7,0-8,5
Каталаза	7,0

 

Порядок выполнения работ

В 7 предварительно пронумерованных пробирок наливают 0,2 м раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 м раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 100 раз. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38^о на 5-10 минут (в зависимости от индивидуальных особенностей активности слюны).

Влияние рН среды на активность амилазы

№ п/п	Кол-во 0,2 м р-ра Na2HPO4, мл	Кол-во р-ра лимонной к-ты, мл	рН смеси	Кол-во 0,5% р-ра крахмала на 1% р-р NaCl	Кол-во разведенной слюны(1:100), мл	Окрашивание с йодом
1.	0,58	0,42	5,6	по 10 капель	по 10 капель
2.	0,63	0,37	6,0
3.	0,69	0,31	6,4
4.	0,77	0,23	6,8
5.	0,87	0,13	7,2
6.	0,94	0,06	7,6
7.	0,97	0,03	8,0

 

Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калии, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно. В зависимости от активности слюны ее можно разводить не в 100, а в 50 или 10 раз.

10. Определить содержание витамина С в моче, шиповнике, картофеле, проводить качественные реакции на витамины А, Д, Е, B1, B2, РР