1) Рассчитать среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках с отрицательным контрольным образцом.
2) На основании полученных данных вычислить «точку отсечения» – критическое значение оптической плотности (ОПкрит) по формуле:
ОПкрит = ОП(К–) + 0,05.
3) Среднее значение оптической плотности в лунках с отрицательным контрольным образцом не должно превышать 0,15 ед. опт. плотн. при использовании двухволнового режима измерения.
4) Среднее значение оптической плотности в лунках с положительным контрольным образцом должно быть не менее 0,8 ед. опт. плотн.
5) Результат анализа считают положительным, если оптическая плотность образца больше ОПкрит.
6) Результат анализа считают отрицательным, если оптическая плотность образца меньше ОПкрит.
7) Проводят протоколирование работы и делают заключение.
Таблица. Результаты иммуноферментного анализа определения цитотоксина C. difficile.
| A | K1(+) | K2(+) | ||||||||||
| B | K1(-) | K2(-) | ||||||||||
| C | ||||||||||||
| D | ||||||||||||
| Заключение |
ЗАНЯТИЕ №3
Тема: Возбудители острых кишечных инфекций: эшерихии, шигеллы
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Освоить лабораторную диагностику колиэнтерита и шигеллезов.
3. Изучить биопрепараты по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Общая характеристика и классификация семейства энтеробактерий.
2. Эшерихии: свойства, резистентность.
3. Энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные и энтерогеморрагические кишечные палочки. Факторы патогенности и патогенез эшерихиозов.
4. Лабораторная диагностика эшерихиозных инфекций.
5. Шигеллы – возбудители дизентерии, классификация, свойства, резистентность.
6. Факторы патогенности шигелл. Патогенез дизентерии, иммунитет.
7. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика шигеллезов.
8. Биопрепараты: поливалентная эшерихиозная ОКВ-сыворотка; типовые эшерихиозные ОК-сыворотки: О111К58, О55К59, О26К60; колибактерин, агглютинирующая дизентерийная сыворотка Зоне, Флекснера.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 193-202.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 120-123.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Микробиологическая диагностика колиэнтерита
| День | Материал исследования | Ход исследования | Результат исследования | ||||||
| 1. | Фекалии больного в консерванте | Посев фекалий на среду Левина | |||||||
| 2. | Учет роста на среде Левина. Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОКВ-сывороткой В-группы энтеропатогенных эшерихий. Посев колонии, давшей (+) реакцию с ОКВ сывороткой, на скошенный агар для выделения чистой культуры | ||||||||
| 3. | Учет роста на скошенном агаре, мазок, окраска по Граму, микроскопия. Постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с типовыми сыворотками О111К58, О55К59, О20К84, О26К60. Постановка развернутой реакции агглютинации с сывороткой О26К60 в 2 ряда: 1-й ряд – сыворотку развести до титра О-антител и добавить прогретую культуру, 2-ой ряд – сыворотку развести до титра К-антител и добавить живую культуру. Пересев культуры в планшет с тест-системой для изучения биохимических свойств | ||||||||
| 4. | Учет биохимических свойств | Л | С | Г | М | МН | H2S | индол | |
| Заключение: |
2. Демонстрация бактериологического метода диагностики дизентерии.
ЗАНЯТИЕ №4
Тема: Патогенные сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, сальмонеллезов
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:
1. Знать теоретический материал по теме занятия.
2. Уметь определять сальмонеллы по культуральным свойствам на средах Эндо, Левина, Ресселя, висмут-сульфит агаре.
3. Уметь дифференцировать сальмонеллы по биохимическим свойствам.
4. Научиться выделять гемокультуру при брюшном тифе и паратифах.
5. Изучить биопрепараты по теме занятия.
ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:
1. Сальмонеллы: таксономия, свойства, резистентность.
2. Антигенная структура, серологическая классификация Кауфмана-Уайта.
3. Факторы патогенности сальмонелл. Источник инфекции, пути передачи, патогенез брюшного тифа.
4. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Профилактика, лечение.
5. Серологический диагноз брюшного тифа и бактерионосительства. Фаготипирование.
7. Возбудители сальмонеллезов. Факторы патогенности, патогенез сальмонеллеза.
8. Лабораторная диагностика сальмонеллезной инфекции. Профилактика и лечение сальмонеллезов.
9. Биопрепараты: агглютинирующие адсорбированные О- и Н- сальмонеллезные сыворотки, неадсорбированные агглютинирующие брюшнотифозные и паратифозные сыворотки, люминесцирующая брюшнотифозная сыворотка, диагностикум брюшнотифозный О, диагностикум брюшнотифозный Н, эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум; брюшнотифозные Vi-бактериофаги.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Лекционный материал.
2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 202-210.
3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 115-120.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Ранний метод диагностики брюшного тифа. Выделение гемокультуры.
| День | Материал | Ход исследования | Результаты | ||||||
| Кровь больного | Посев 5 мл крови в 50 мл желчного бульона. Термостат 37оС на сутки | ||||||||
| Учет роста на желчном бульоне Пересев с желчного бульона на среду Левина. Термостат 37оС на сутки | |||||||||
| Учет роста на среде Левина. Пересев бесцветных колоний на среду Ресселя. Термостат 37оС на сутки | |||||||||
| Учет роста на среде Ресселя Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными Н- сыворотками брюшного тифа и паратифа В. Пересев культуры в планшет с тест-системой для изучения биохимических свойств. Термостат 37оС на сутки | |||||||||
| Учет биохимических свойств | Л | С | Г | М | МН | H2S | индол | ||
| Заключение: |
2. РПГА для серодиагностики брюшнотифозного бактерионосительства (демонстрация).
| Ингредиенты | Разведения сыворотки | ||||||||||
| 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | К | |||||||
| Физраствор | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | ||||||
| Сыворотка больного 1:5 |  0,1
| 0,1 | 0,1 | 0,1 | - | ||||||
| Эритроцитарный брюшнотифозный Vi-диагностикум | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | ||||||
| Термостат 370С на 1-1,5 часа | |||||||||||
| Результат | |||||||||||
| Заключение: | |||||||||||
3. Бактериологическое исследование остатков пищи при пищевой токсикоинфекции (демонстрация).
| День | Материал | Ход исследования | Результаты | ||||||
| Остатки пищи (колбаса) | Посев материала: 1. На среду Левина для обнаружения кишечной палочки и сальмонелл. 2. На молочно-солевой агар для выявления стафилококка. 3. На скошенный агар в конденсационную воду для обнаружения протея (по Шукевичу). 4. На среду Китта-Тароцци для обнаружения клостридий ботулизма | ||||||||
| Учет роста на среде Левина. Учет роста на молочно-солевом агаре. Учет роста протея на скошенном агаре. Учет роста на среде Китта-Тароцци. Пересев бесцветной колонии на среду Ресселя | |||||||||
| Учет роста на среде Ресселя. Приготовление мазка. Окраска по Граму, микроскопия. Постановка реакции агглютинации на стекле с адсорбированными сальмонеллезными H-сыворотками. Пересев культуры в планшет с тест-системой для изучения биохимических свойств | |||||||||
| -“- | Учет биохимических свойств | Л | С | Г | М | МН | Н2S | индол | |
| Заключение: |
ЗАНЯТИЕ № 5
