Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


—хематичное представление теории  ошланда




 

1.3 —ѕ≈÷»‘»„Ќќ—“№ јћ»Ћј«џ

‘ерменты обладают очень высокой специфичностью. Ёта специфичность обусловлена особой формой молекулы фермента, точно соответствующей форме молекулы субстрата. Ёту гипотезу называют гипотезой Уключа и замкаФ: субстрат сравниваетс€ в ней с ключом, который точно подходит к замку, т.е. к ферменту. ƒалее на основании этой гипотезы уже в 1959 году новую интерпретацию гипотезы Уключа и замкаФ предложил  ошланд. ќн делает вывод о гибкости активных центров ферментов. —огласно этому предположению, субстрат соедин€€сь с ферментом, вызывает изменени€ в структуре последнего. ѕодход€щей аналогией в этом случае может служить перчатка, котора€ при надевании на руку соответствующим образом измен€ет свою форму.

јмилазы различного происхождени€ имеют много общих свойств: хорошо раствор€ютс€ в воде или в сильно разбавленных растворах солей. Ѕолее концентрированные растворы солей (например 20-30% - ные растворы сульфата аммони€) вызывают осаждение этих ферментов. јмилаза легко раствор€ютс€ в разбавленных растворах этилового спирта, но осаждаютс€ при его концентрации в среде свыше 60%. Ѕелок амилаз обладает слабокислыми свойствами; изоэлектрическа€ точка ферментов колеблетс€ в пределах рЌ 4,2 - 5,7. ћолекул€рна€ масса солодовой амилазы 60000, амилаз микроскопических грибов - 45000-50000. ћногие из амилазы получены либо в высокоочищенном, либо в кристаллическом виде. »оны кальци€ оказывают стабилизирующее действие на амилазу. Ёто впервые было обнаружено ¬оллерштейном, затем подтверждено Ќакамурой. ¬ насто€щее врем€ это €вление отмечено почти дл€ всех амилаз. ќднако теоретически этот вопрос применительно к промышленному гидролизу крахмала до сих пор не разработан.

9 вопрос

ƒ л € о п р е д е л е н и € к о л и ч е с т в а б е л к а в о б р а з ц е и с п о л ь з у е т с € р € д м е т о д и к:

1.Ѕиуретовый метод

2.ћикробиуретовый метод

3.ћетод Ѕредфорда

4.ћетод Ћоури

5.—пектрофотометрический метод

Ѕ и у р е т о в ы й м е т о д.ќснован на образовании биуретового комплекса (имеет фиолетовый цвет) пептидных св€зей белков с двухвалентными ионами меди. ¬ методе используют т. н. биуретовый реактив, состо€щий из KOH, CuSO4 и цитрата натри€ (или тартрата натри€). ¬ образовавшемс€ комплексе медь св€зана с 4 азотами координационными св€з€ми, а с 2 кислородами Ч электростатическими. ѕолноценный комплекс образуетс€ лишь с пептидами, состо€щими более чем из 4 остатков.

»нтенсивность окраски раствора пр€мо пропорциональна концентрации белка в сыворотке и определ€етс€ фотометрически.

  достоинствам метода стоит отнести его низкую чувствительность к посторонним веществам, невысокую погрешность.

ћ и к р о б и у р е т о в ы й м е т о д основан на образовании окрашенного в фиолетовый цвет комплекса, образующегос€ в результате взаимодействи€ пептидных св€зей с Cu2+ в щелочной среде.   0,2 мл ѕћ лимфоцитов, сыворотки или плазмы добавл€ли 3,5 мл раствора NаќЌ и 0,2 мл реактива Ѕенедикта. ¬ыдерживали 15 мин при комнатной температуре и спектрофотометрировали на —‘ Ч 46 при 330 нм. ѕостроение калибровочного графика проводили по стандартному раствору белка.

ћ е т о д Ѕ р э д ф о р д а один из наиболее попул€рных методов, используемый дл€ определени€ концентрации белка в растворе. ћетод определени€ концентрации белка по Ѕрэдфорд успешно используетс€ в случае измерени€ растворов с низкой концентрацией белка и растворов, содержащих компоненты, также обладающие значительным поглощением при 280 нм. ћетод определени€ концентрации белка по Ѕрэдфорд, так же, как и метод Ћоури и BSA, требует построени€ стандартной калибровочной кривой перед измерением концентрации неизвестного белка.

”ниверсальность метода и его гибкость позвол€ют создавать модификации процедуры измерений дл€ различных целей и типов измерений.

ћетод Ѕрэдфорд основан на сдвиге спектра поглощени€ кумасси (Coomassie Blue) в сторону значений 595 нм пр€мо пропорционально концентрации содержащегос€ в растворе белка.  умасси образует комплекс с белком; этот комплекс измер€ют при длине волны 595 нм. абсорбционна€ фотометри€ комплекса кумасси / белок имеет очень высокую чувствительность и эффективна даже в случае следовых концентраций белков.

ћ е т о д Ћ о у р и. ћетод количественного определени€ белка, основанный на измерении концентрации окрашенных продуктов, образующихс€ в результате сочетани€ двух химических реакций: биуретовой реакции на пептидную св€зь и взаимодействи€ реактива ‘олина-„окалтеу с ароматическими аминокислотами.

— п е к т р о ф о т о м е т р и ч е с к и й м е т о д. —пектрофотометри€ (абсорбционна€) Ч физико-химический метод исследовани€ растворов и твЄрдых веществ, основанный на изучении спектров поглощени€ в ультрафиолетовой (200Ч400 нм), видимой (400Ч760 нм) и инфракрасной (>760 нм) област€х спектра. ќсновна€ зависимость, изучаема€ в спектрофотометрии зависимость интенсивности поглощени€ падающего света от длины волны. —пектрофотометри€ широко примен€етс€ при изучении строени€ и состава различных соединений (комплексов, красителей, аналитических реагентов и др.), дл€ качественного и количественного определени€ веществ (определени€ следов элементов в металлах, сплавах, технических объектах).





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-05-05; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 626 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќаука Ч это организованные знани€, мудрость Ч это организованна€ жизнь. © »ммануил  ант
==> читать все изречени€...

2032 - | 1846 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.01 с.