Определение подлинности ЛРС микрохимическими и гистохимическими методами

Методика.

1. Поперечный срез или порошок сухого сырья помещают на предметное стекло, прибавляют один из реактивов и накрывают покровным стеклом.

2. Препарат помещают на предметное стекло, накрывают его по­кровным стеклом, а реактив капают рядом с покровным стеклом.

Затем под­носят фильтровальную бумагу к противоположному углу стекла. При этом жидкость засасывается под стекло, а элементы клеток или клеточное содер­жимое вступает в химическое взаимодействие с реактивом. При использо­вании второго метода под микроскопом можно наблюдать за ходом реакции.

Природу клеточной оболочки можно установить реакциями на целлюло­зу и на лигнин (одревеснение).

Целлюлоза (клетчатка). Поперечный срез или порошок (соскоб) сухого сырья помещают на предметное стекло и прибавляют один из следующих реактивов:

а) хлор-цинк-йод — окрашивает клетчатку в сине-фиолетовый цвет; проб­ка и кутикула могут принимать окраску от желтой до коричневой;

б) йод с кислотой серной — окрашивает целлюлозу в синий цвет; окрас­ка интенсивнее, когда в клеточной оболочке больше целлюлозы и меньше других компонентов (лигнина, кутиноподобных веществ и др.);

в) аммиачный раствор меди (II) оксида — под его влиянием клетчатка медленно разбухает и растворяется, кутикула остается нерастворенной;

г) раствор Люголя (0,5 %-ный раствор йода в 1 %-ном растворе калия йодида) — окрашивает целлюлозу в желтый цвет.

Одревесневшие или лигнифицированные стенки клеток. Срез корня алтея помещают на предметное стекло в 1 %-ный спиртовый раствор флороглюцина.

Реактив удаляют фильтровальной бумагой, а на срез наносят каплю кислоты хлористоводородной концентрированной и через 1 минуту при­бавляют каплю глицерина. Срез накрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом при м/у. Одревесневшие оболочки клеток приобретают вишневое окрашивание.

Крахмал. Поперечный срез корня алтея помещают на предмет­ное стекло и добавляют 1—2 капли раствора Люголя.

Крахмальные зерна окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Для опреде­ления формы, типа и размеров крахмальных зерен препарат готовят в воде или 30 %-ном растворе глицерина.

Слизь. Поперечный срез корня алтея или порошок семян льна помещают на предметное стекло и прибавляют один из перечисленных ниже реактивов.

Реакция с метиленовым синим. Срез помещают на несколько минут в спир­товый раствор метиленового синего (1:5000), затем переносят в глицерин. Слизь окрашивается в голубой цвет.

С меди сульфатом и щелочью. Срез помещают на 5—10 мин в насыщен­ный раствор меди сульфата, промывают водой и переносят в 50 %-ный ра­створ калия гидроксида. Слизь окрашивается в голубой цвет (растения сем. мальвовых) или в зеленый (растения сем. лилейных).

Реакция с тушью. Порошок сырья помещают на предметное стекло в каплю свежеприготовленного раствора туши (1:10) и перемешивают иголкой.На темно-сером фоне выделяются беловатые клетки со слизью, не окрашенные тушью (слизь препятствует проникновению туши).

Инулин.

Поперечный срез корня одуванчика или девясила помещают в 1—2 капли раствора α-нафтола (или тимола) и вводят 1 каплю кислоты серной концентрированной, появляется розово-фиолетовое окрашивание (α-нафтол) или карминово-красное (ти­мол).

Крахмал вступает в указанные реакции, поэтому его присутствие надо исключить, проведя предварительно реакцию с йодом.

Видоизмененная реакция: помещают сырье на 10 минут в 96% этиловый спирт и делают микропрепарат. Обработка микропрепарата спиртом усиливает формирование сферокристаллов инулина, а обработка водой – их растворение.

Эфирное масло. Поперечный срез аира помещают на 2—3 мин в раствор Судана III, а затем просматривают в воде или 30 %-ном растворе глицерина. Клетки, содержащие эфирное масло, окрашиваются в зеленый цвет.

Жирное масло. Срез семян льна помещают на 2—3 мин в рас­твор Судана III, затем реактив удаляют фильтровальной бумагой, а срез про­мывают 50 %-ным спиртом и переносят в глицерин. Капельки жирного масла окрашиваются в оранжево-красный цвет.

Гидроксиантрахиноны. Поперечный срез коры крушины поме­щают на предметное стекло в каплю 5 %-ного раствора натрия гидроксида или аммония гидроксида, прибавляют каплю глицерина, накрывают покров­ным стеклом и наблюдают под микроскопом красное или фиолетово-крас­ное окрашивание тканей, в которых локализуются антраценпроизводные.

Дубильные вещества. Поперечный срез коры дуба или ко­ры калины помещают в каплю 1 %-ного раствора железа (III) хлорида или 1 %-ного раствора железоаммониевых квасцов, реактив удаляют фильтро­вальной бумагой, на предметное стекло наносят каплю воды, глицерина или хлоралгидрата, накрывают покровным стеклом и наблюдают окрашивание препарата под микроскопом. Ткани, содержащие дубильные вещества, окра­шиваются в черно-синий или черно-зеленый цвет.