Реакція наростання титру бактеріофага

Результат реакції:

____________________________________

Титрування бактеріфага за методом Граціо

Титрування фага за Граціо дозволяє провести точне врахування активності препарату, тобто кількість фагових частинок в 1 мл досліджуваної рідини.

Цей метод полягає у такому. До бульйонної культури стафілокока (0,5 мл) додають 1 мл бактеріофага в розведенні 10^-4, ретельно перемішують і залишиють на 5 хвилин для адсорбції бактеріофага на бактеріальній клітині. Потім 0,5 мл розплавленого напіврідкого агару (0,7%) додають до суміші двох культур, перемішують і виливають другим шаром у чашку Петрі з 1,5% агаром. Коли агар застигає, чашку ставлять у термостат при температурі 37⁰ С на 7-8 годин.

Далі потрібно підрахувати кількість негативних колоній, кожна з яких виникла в результаті розмноження однієї фагової частки. Для визначення титру бактеріофага за Граціо потрібно отриману кількість негативних колоній помножити на розведення. Наприклад, якщо фаг (в об‘ємі 1 мл) з розведенням 10^-4 дав на чашці 7 негативних колоній, то титр фага = 7х10^-4 фагових часток в 1 мл нерозведеного субстрату.

Результат досліду занести до протоколу, зробити висновок.

Рисунок

Результат досліду, висновок

___________________________________________________ ______________________________________________________ _____________________________________________________ ______________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ ____________________________________________________ ____________________________________________________ ____________________________________________________

Фаготипування бактерій:

Фаготипування за Фішером

Рисунок	Принцип методу	Висновок
	Поставлення цього досліду полягало у такому. Дно чашки Петрі з МПА розкреслювали на квадрати. Проводили посів досліджуваної культури бактерій газоном. Через 5-10 хвилин після посіву на підсушену поверхню живильного середовища у певні квадрати наносили завись стандартних бактеріофагів по 1 краплі	_________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________

Фаготипування за Фюртом

Рисунок	Принцип методу	Висновок
	1 мл бактеріофага вносили в 20 мл розплавленого та охолодженого до 450С МПА. Суміш стерильно вилили в чашку Петрі і залишили для застигання. Поділили дно чашки склографом на чотири сектори. У кожний сектор засіяли одну з чотирьох досліджуваних бульйонних культур бактерій. Чашку поставили в термостат при 370С на 18-24 години. Після 24 годин інкубації треба обчислити результат. Відсутність росту бактерій в якомусь із секторів свідчить про співвідношення стандартного бактеріофага дослідної культури і про належність культури до даного фаготипу	_________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________

Метод Отто

Рисунок	Принцип методу	Висновок
	У чашку Петрі налили 1,5% МПА. Після застигання чашку засіяли густим газоном 16-18-годинної бульйонної культури, гомологічної вихідному фагу, і через 16-18 хвилин посіву на висушену поверхню живильного середовища наносили краплями дослідний фільтрат (фаг). На одній чашці можна поставити декілька проб. Для цього чашку поділили на сектори і в кожний сектор вносили по одній краплі фільтрату. Після того як фаг дифундує в середовище, чашки перевернули вверх дном, підписали, поставили в термостат при температурі 370 С на 18-24 години. Обчислення досліду проводили за: а) повної відсутності росту культури в місці нанесення краплі фільтрату (активний бактеріофаг); б) наявності дрібних стерильних плям-колоній бактеріофага (бактеріофаг слабкої активності)	_________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________