Микробиологическая диагностика ВИЧ-инфекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, лейкрциты пе­риферической крови, пунктат лимфатических узлов и костного мозга. Вирус также может быть обнаружен в отделяемом сли­зистых оболочек генитального тракта, сперме, слюне, слезной жидкости, грудном молоке, спинномозговой жидкости, в труп­ном материале.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусологический метод (схема 22.1.1). Выделение вируса из крови и лейкоцитов в связи со сложностью культивирования в клинической практике используется редко. Основным пока­занием к применению является раннее обнаружение вируса у новорожденных от ВИЧ-инфицированных матерей. Вирус вы­деляют путем совместного культивирования мононуклеарных лейкоцитов периферической крови пациента с лейкоцитами здоровых доноров в присутствии IL-2 для стимуляции роста Т-лимфоцитов. ЦПД проявляется образованием синцития и лизисом зараженных клеток. Метод позволяет выявить латент­ную инфекцию. О присутствии вируса судят по результатам определения специфических антигенов ВИЧ (р24, обратной транскриптазы) в культуральной среде и зараженных клетках. Культивирование ВИЧ требует соблюдения специальных усло­вий безопасности при работе.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические методы. Иммунохимические иссле­дования. Обнаружение вирусных антигенов (р24) в крови и лимфоцитах с помощью ИФА. Следует учитывать, что р24 в достаточном для выявления количестве присутствует в крови только при первичной инфекции и на поздних стадиях забо­левания.

Молекулярно-биологические исследования. Об­наружение РНК вирусов в крови методом RT-ПЦР. Метод основан на преобразовании вирусной РНК в комплементарную ДНК (кДНК) с использованием фермента обратной транс­криптазы (RT) и амплификации полученной кДНК методом ПЦР — применяется для определения уровня вирусемии. Чув­ствительность метода позволяет обнаруживать вирус в малых концентрациях.

Серодиагностика. Обнаружение антител к вирусным антиге­нам (поверхностным белкам gpl20) — методы ИФА — приме­няют для массового обследования. В случае положительного результата с целью верификации осуществляют поиск антител к индивидуальным вирусным белкам методом иммуноблоттин-га, непрямой ИФ и другими методами.

Метод иммуноблоттинга ("вестерн-блот") — тестирование сыворотки на наличие антител против отдельных вирусных

антигенов сердцевины и поверхностной оболочки ВИЧ. Вирус­ные белки с помощью электрофореза в вертикальном блоке полиакриламидного геля разделяют по молекулярной массе и переносят на нитроцеллюлозную мембрану, где антитела сы­воротки реагируют с индивидуальными вирусными белками. Образующиеся иммунные комплексы выявляются авторадио-графически или с помощью ИФА.

Для косвенного подтверждения диагноза СПИД могут быть использованы методы оценки иммунного статуса: определение общего количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, соотношения CD4⁺/CD8⁺ Т-лимфоцитов, количества натуральных килле­ров, уровней сывороточных иммуноглобулинов. Для СПИД характерно развитие Т-клеточного дефицита: снижение коли­чества Т-лимфоцитов, преимущественно Т-хелперов CD4⁺ (менее 500/мм³), снижение уровня показателя CD4⁺/CD8⁺ ниже 1,0; уменьшение количества натуральных киллеров; уме­ренная поликлональная гипергаммаглобулинемия с увеличени­ем содержания IgG.