Микробиологическая диагностика натуральной оспы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В препаратах из исследуемого материала (мазки, соскобы, биоптаты) в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие базофиль-ных включений (телец Гварниери), имеющих округлую или серповидную форму и располагающихся в околоядерной зоне цитоплазмы.

Вирусоскопическое исследование. Вирусы в исследуемом ма­териале (отделяемом высыпных элементов, мазках, соскобах, биоптатах) могут быть обнаружены методом электронной мик­роскопии. Методом негативного контрастирования в препаратах выявляют крупные (до 300 нм) вирионы овальной или прямо­угольной формы, покрытые внешней оболочкой. На поверхности вирусной частицы отчетливо видны непараллельно расположен­ные микротубулы. Необходимо помнить, что метод не позволяет дифференцировать вирус натуральной оспы от других предста­вителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.).

Вирусологическое исследование. Для выделения чистой куль­туры вируса натуральной оспы из исследуемого материала при-

меняют различные типы однослойных клеточных культур при­матов (Vero, эмбриональные диплоидные клетки человека, пер­вичные культуры клеток почки обезьян и др.), а также куриные эмбрионы. Индикацию вируса производят по ЦПД, которое обычно развивается на 2—3-й день. Характерно появление очагов избыточного роста клеток, приводящего к образованию бляшек диаметром 1—3 мм, изменение формы (округление) клеток с последующей дегенерацией и слущиванием монослоя. В зараженных клетках выявляются характерные включения (см. выше). Для индикации применяют также реакцию гемад-сорбции. При заражении куриных эмбрионов материал нано­сят на поверхность хорион-аллантоисной оболочки. В положи­тельном случае через 72 ч наблюдается появление характерных беловатых непрозрачных выпуклых бляшек (оспин), имеющих диаметр 1 мм, правильную округлую форму, ровные края и гладкую поверхность, без кровоизлияний. Для идентификации используют методы ИФ, РТГА, ИФА, РИА, РН и др., позво­ляющие обнаружить вирусные антигены в зараженной куль­туре.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках маз­ков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом ма­териале может быть выявлено с помощью чувствительных се­рологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в крови используется для подтверждения диа­гноза натуральной оспы. Наличие антител в крови определяют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РН, ИФА, РИА и др. Необходимо иметь в виду, что методы серодиагностики не позволяют дифференцировать вирус нату­ральной оспы от других представителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.) по причине их антигенного сходства.

• Микробиологическая диагностика оспы обезьян МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Лабораторная диагностика оспы обезьян проводится анало­гично диагностике натуральной оспы (см. выше). Главным методом, позволяющим дифференцировать возбудителей, яв-

ляется вирусологическое исследование. Основой является ха­рактер ЦПД: типично образование бляшек более крупных раз­меров (2—6 мм), наличие цитоплазматических мостиков между зараженными клетками, присутствие особых эозинофильных включений в цитоплазме, представляющих собой скопления вирусных белков, быстрая дегенерация клеточного пласта. • Микробиологическая диагностика контагиозного моллюска

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Гистологическое исследование. В гистологических препара­тах из исследуемого материала в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие характерных эо­зинофильных включений (телец моллюска) в цитоплазме эпи­телиальных клеток.

Экспресс -методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Вирусные НК в исследуе­мом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных ви­русами простого герпеса 1-го и 2-го типов (HSV-\, HSV-2)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы, отделяемое с пораженных слизистых оболочек, конъюнктивы; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС); кровь, моча (при висцеральной и генерализованной формах).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках — наличие гигантских многоядерных кле­ток, вакуолизация цитоплазмы, изменения ядра — увеличение и слияние ядер между собой, фрагментация и агрегация хро­матина, уплотнение кариолеммы, часто присутствуют внутри­ядерные включения (тельца Каудри). Метод обладает сравни­тельно низкой специфичностью и используется как ориенти­ровочный.

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики герпетической инфекции. Вирусы простого гер­песа легко удается культивировать в клеточных культурах при­матов {HeLa, эмбриональные фибробласты человека, клетки почек кролика и др.), а также в куриных эмбрионах. Индика-

цию вируса производят по характерному ЦПД (см. выше), которое обычно развивается на 1—3-й день и впоследствии приводит к дегенерации и слущиванию монослоя. Для иден­тификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в клетках зараженной культу­ры. Основным методом, дающим возможность дифференциро­вать вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типа между собой, является рестрикционный анализ ДНК-фрагментов генома, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические и биохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (анти­генов) в исследуемом материале может быть выявлено с помо­щью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др. Присутствие вирусспецифических ферментов (тимидин-кина-зы и др.) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью соответствующих биохимических реакций.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является информативной только при первичной герпетической инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания. Метод применя­ют преимущественно для эпидемиологического анализа. Ис­ключение составляют случаи герпетического энцефалита, когда высокие титры противовирусных антител в спинномозговой жидкости являются косвенным признаком инфекции ЦНС. Наличие антител в крови и спинномозговой жидкости (при поражениях ЦНС) определяют с помощью различных сероло­гических реакций, включая РСК, РН, ИФА, РИА, непрямой ИФ и др.

• Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясы­вающего лишая

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы из носоглотки; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках, аналогичные ЦПД вирусов простого гер-

песа (см. выше). Метод обладает сравнительно низкой специ­фичностью и используется как ориентировочный.

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала применяется редко, что оп­ределяется его нестабильностью (легко инактивируется при транспортировке) и низкой скоростью репродукции in vitro. Вирус удается культивировать в культурах эмбриональных фиб-робластов человека. Признаки ЦПД появляются не ранее чем через 10 дней и сходны с ЦПД вирусов простого герпеса (см. выше). Для идентификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в заражен­ной культуре, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнару­живают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Антитела в крови обычно присутствуют в низком титре. Для их выявления применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Диагноз ста­вят на основании выявления специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об ак­тивной инфекции. Присутствие последних в крови новорож­денных является показателем внутриутробного заражения. Че­тырехкратное нарастание титра специфических антител, выяв­ляемое методом парных сывороток, свидетельствует о рецидиве (опоясывающем лишае).

• Микробиологическая диагностика цитомегаловирусной ин­фекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча, слюна и другие секреты, испражнения, мокрота, биоптат пораженного органа; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы, Папани-колау или гематоксилин-эозином. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД — присутствие увеличен­ных "цитомегалических клеток", имеющих гигантские размеры (до 30 мм), содержащих плотное базофильное внутриядерное включение ("совиный глаз").

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры

вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики цитомегаловирусной инфекции. Вирус удается культивировать в культурах диплоидных эмбриональных фиб-робластов человека. При низком содержании возбудителя в материале признаки ЦПД (см. выше) могут появляться только через 4—6 нед. Поэтому для заражения обычно применяют метод "амплификации в культуре": исследуемый материал центрифугируют совместно с клетками культуры. При этом вирусные частицы оседают на поверхность клеточных мем­бран, и заражение происходит более эффективно. На 3-й день после заражения в клетках культуры определяют присутствие сверхранних и ранних вирусных антигенов методом ИФ. Для идентификации используют также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках ис­следуемого материала может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является информативной только при пер­вичной цитомегаловирусной инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания.

• Микробиологическая диагностика внезапной экзантемы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку­лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие белков (антигенов) вирусов-возбудителей (HHV-6, HHV-1) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических ре­акций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Наличие специфических противовирусных IgM, выявляемых методом ИФА, свидетельствует об активной инфекции.

• Микробиологическая диагностика инфекционного мононук-
леоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В мазках крови при инфекци­онном мононуклеозе обнаруживают атипичные лимфоциты (не менее 10 %), которые являются наиболее ранними маркерами этой инфекции. Атипичные лимфоциты могут присутствовать в крови и при других заболеваниях, но в значительно меньшем количестве.

Вирусологическое исследование. Применяют редко в связи со сложностью культивирования. Чистую культуру вируса Эпш-тейна—Барр выделяют из исследуемого материала путем зара­жения первичных культур В-лимфоцитов, полученных из пу­почного канатика. С целью идентификации в клетках культуры определяют присутствие вирусспецифических антигенов мето­дом ИФ. Для идентификации используют также рестрикцион-ный анализ, ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса Эпштейна— Барр в клетках крови может быть выявлено методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Для инфекционного мононуклеоза харак­терно появление "гетерофильных" антител. Наиболее часто с диагностической целью определяют наличие антител к антиге­нам бычьих и бараньих эритроцитов (диагностический титр в РА 1:64). Для выявления противовирусных антител к антигенам капсида (УСА) и неструктурным раннему (ЕА) и ядерному (EBNA) антигенам применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Для острой инфекции харак­терно наличие антител к УСА (IgM). Антитела к EBNA свиде­тельствуют о перенесенной и хронической латентной инфек­ции. В период реактивации вируса в крови присутствуют анти­тела всех трех типов.