Нефелометрический метод

Плотность клеток S. сerevisiae в жидкой среде определяют нефелометрически (ФЭК), используя кювету с длиной оптического пути
0,5 см и зеленый светофильтр (λ= 540 нм). Результаты измерений оптической плотности каждой суспензии (контролем служит вода) записывают в таблицу 4. На основании данных таблицы 4 строят калибровочную кривую, откладывая на оси абсцисс количество клеток дрожжей, а на оси ординат оптическую плотность соответствующей суспензии. Калибровочную кривую строят для быстрого определения количества клеток определенного вида микроорганизмов по показаниям ФЭК.

 

Таблица 4 – Количество клеток дрожжей в суспензиях, установленное с помощью камеры Горяева, и соответствующие показания ФЭК

Разведе-ние	Количество клеток микроорганизмов в большом квадрате счетной камеры	Среднее число клеток в малом квадрате а	Количество клеток М, млн/мл	Показа-ния ФЭК

 

5.2.4 Определение количества клеток дрожжей высевом
в жидкие среды

Работу проводят согласно методики, описанной в п. 2.2. В качестве питательной среды для выращивания дрожжей используют солодовое (пивное) сусло. В каждую пробирку со средой вносят по 1 мл суспензии дрожжей различных разведений, закрывают ватными пробками и помещают в термостат при температуре 30 ºС на трое суток.

После инкубации регистрируют рост микроорганизмов и определяют вероятное количество клеток дрожжей в единице объема исходной суспензии (см. таблицу 1). Результаты оформляют в таблицу.

5.2.4.1 Приготовление солодового сусла

Зерна ячменя замачивают в холодной воде и проращивают при температуре 35 ºС. После того как ростки станут вдвое длиннее зерен, последние высушивают до воздушно-сухого состояния (можно при слабом подогреве), получая солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и смешивают с водой (250 г солода на 1 л воды). Затем нагревают до температуры 50 ºС и поддерживают эту температуру в течение 30 мин, непрерывно помешивая смесь, чтобы избежать образования комков. Далее, для лучшего выделения фермента амилазы температуру поднимают до 57 ºС и поддерживают ее на этом уровне до исчезновения реакции на крахмал (синего окрашивания с йодом). Пробы на осахаривание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости. При указанном режиме происходит также гидролиз белков до аминокислот и пептидов.

Полученное сусло отфильтровывают через вату или бумажный фильтр. Такое сусло содержит от 10 до 20 % сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавляют водой до концентрации сахара 6…8 % и стерилизуют 30 мин при температуре 115 ºС и давлении 0,5 атм.

5.3 Лабораторная работа № 3. Определение количества
микроорганизмов в смыве с поверхности предметов.
Санитарно-микробиологический контроль воздуха (6 часов)

Цель работы:

1. Освоить методы санитарно-бактериологического контроля технического оборудования и инвентаря микробиологической лаборатории.

2. Изучить седиментационный метод оценки санитарного состояния воздуха закрытых помещений.

Задания:

1. Приготовить смывы с поверхности посуды, оборудования и столов, пользуясь специальными трафаретами.

2. Сделать посевы на МПА для определения общего количества микроорганизмов.

3. Приготовить мазки из смывов, зафиксировать термическим методом и окрасить по Грамму. Промикроскопировать, зарисовать и сделать заключение.

4. Определить содержание микроорганизмов в воздухе лабораторных помещений методом седиментации.

5. Заполнить протокол бактериологического исследования и сделать общее заключение по результатам исследований.

Оборудование и материалы:

– стерильные чашки Петри;

– МПА в колбах;

– пробирки;

– стерильные марлевые салфетки;

– пипетки градуированные на 1 мл;

– спиртовки;

– трафареты металлические;

– предметные стекла;

– бактериологические петли;

– пинцеты;

– микроскопы биологические;

– стерильная водопроводная вода;

– наборы реактивов для окраски по Грамму.