Метод Коха

Расплавляют в кипящей водяной бане 20 мл ранее приготовленной стерильной глюкозо-пептонной среды (глюкоза – 40,0 г; пептон – 10,0 г; агар – 35,0 г; вода водопроводная 1000 мл). Среду стерилизуют при давлении 1,5 атм от 20 до 30 мин и разливают ее в три стерильные чашки Петри около пламени горелки. Когда среда застынет, делают высев из полученной от преподавателя культуры дрожжей Saccharomyces cerevisiae для определения числа живых клеток. С этой целью готовят разведения исходной культуры согласно п. 2.1.1. Производят посев только разведений 1:1000, 1:10000, 1:100000 путем нанесения каждый раз новой стерильной пипеткой по 0,1 мл суспензии (предварительно тщательно размешанной) на поверхность среды в чашках Петри. Посевной материал тщательно распределяют по поверхности агаризованной среды стерильными шпателями.

Чашки Петри, засеянные дрожжами, помещают в термостат при температуре 30 ºС на время от 3 до 5 суток. Чашки Петри инкубируют в термостате крышками вниз.

На следующем занятии подсчитывают число колоний S. сerevisiae в чашках Петри, и делают пересчет для определения общего числа живых клеток в 1 мл суспензии по формуле в п. 2.1.3.

Результаты работы оформляют в виде таблицы 3.

Таблица 3 – Количественный учет дрожжей по методу Коха

Разведение	Количество колоний, выросших на чашке Петри	Среднее число колоний а	Количество микроорганизмов в 1 мл исследуемой суспензии М
повторность
n	n
10-3
10-4
10-5