, , , , : , ( , , , ); , - ; . n 2 n-1 . . .
19. 1983 . . , , (). , , '- , . . , , . , , , . - -, , .
:
:
-, , .
, .
- , . , , Thermus aquaticus (Taq -), Pyrococcus furiosus (Pfu -), Pyrococcus woesei (Pwo -), Thermus thermophilus (Tth -) .
(dATP, dGTP, dCTP, dTTP).
Mg2+, .
, , . , .
|
|
, 1830 . .
([11]), - (. ).
(Tm) -. , . , 80 C.
:
GC- ~ 4060 %;
Tm ( , 5 C);
[13] [14];
, 3- , ,
2035 , .
- 9496 C ( 98 C, ) 0,52 , . (), . , 25 .
, , . . 5 , . ( ), ( ). 30 , , . 60 C , 6072 C.
- , . . 3'- , , , 5' 3' . . Taq Pfu 72 C. -, . . , . 710 .
|
|
( ) 2n 2n, n [15]. 100 %, P ~ (1+E)n, P , .
, , .
, , . , .
20. - :
- , , ;
- /;
- ;
- .
- : ( ), , , , , (), ().
- ( ). , , , (, , ), . , , . (, ), -.
/ . - / , , - . /, - . - / !
-, / , . . - -.
/ - - - /.
, -. . . , .
. .
- , , . - .
|
|
- - . - . - .
. , , , , . . , . . . - . - .
, . - (), , , , , . dNTP, , . , ( PRINS - . polymerase reaction in situ). ( - ; ), , . GAWTS - , 7--, -, 7--.
(10 ). , Taq - ( , ), 3'-5' , Pfu . , , , Taq - . Pfu . 50:1 100:1, Taq - 25100 Pfu -.
. - - ; Sybr Green I ( SYTO 13), . Sybr Green I - . SYBR Green I . SYBR Green I . SYBR Green I 494 . , 290 380 . SYBR Green I 521 ()
|
|
21. . , - (Real-Time PCR) [4]. . , . , , / , , - . . , - .
, , , .