Химические свойства аминокислот

 

* Реакции аминокислот в водных растворах

1. На универсальную индикаторную бумагу пипеткой наносят по 1 капле растворов глицина, глутаминовой или аспарагиновой кислоты и аргинина.

2. Отмечают развивающуюся окраску индикатора во всех трех случаях и делают заключение о реакции среды.

3. Записывают уравнения реакций, описывающих поведение данных аминокислот в водных растворах.

 

* Взаимодействие аминокислот с сахарами

1. В две пробирки вносят по 2 мл 5% раствора фруктозы в 2.5% растворе борной кислоты.

2. В первую пробирку добавляют 2 мл 3% раствора аргинина, а во вторую – 2 мл дистил-лированной воды.

3. В третью пробирку вносят 2 мл 3% раствора аргинина и 2 мл 2.5% раствора борной кислоты.

4. Все три пробирки инкубируют в течение 5 мин в кипящей водяной бане.

5. Отмечают различие во времени появления окраски и ее интенсивности в каждой из проб.

 

 

Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге.

 

1. На полосе хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1.5 см от края бумаги), а также места нанесения стандартных растворов аминокислот и анализируемой смеси.

2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 20 мкл раствора каждой аминокислоты. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.

3. Точки старта высушивают.

4. Параллельно готовят 20 мл растворителя, состоящего из н-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 12:3:5. К растворителю добавляют несколько кристаллов нингидрина для окрашивания хроматограммы во время проявления.

5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения парами.

6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Проявление заканчивают когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски (2-3 см от края).

7. Хроматограмму высушивают.

8. Определяют значения R_f аминокислот. Идентифицируют аминокислоты, содержащиеся в анализируемой смеси.

 

Тема II.

Качественные реакции на аминокислоты.

 

* Приготовление 1% раствора белка для проведения качественных реакций

1. Отделяют белок куриного яйца от желтка, считая, что масса белка в одном яйце в среднем составляет 30г, а его концентрация ~10%.

2. Белок помещают в мерный цилиндр и добавляют девятикратный объем дистиллированной воды.

3. Полученный раствор тщательно перемешивают и фильтруют через нейлоновое сито.

 

* Нингидриновая реакция

1. В четыре пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.01% раствора глицина, 2 мл 0.01% раствора b-аланина и 2 мл воды, соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 10 капель 0,1% раствора нингидрина.

3. Растворы перемешивают и оставляют в водяной бане при 70˚С на 5 минут.

4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

 

* Ксантопреновая реакция

1. В четыре пробирки наливают 1 мл 1% раствора белка, 1 мл 0.01% раствора триптофана, 1 мл 1% раствора желатина и 1 мл воды соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 5-6 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают.

3. После охлаждения в пробирки осторожно (по стенке) приливают избыток 10% раствора NaOH.

4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

 

* Реакция Фоля

1. В три пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.02% раствора цистеина и 2 мл 1% раствора желатина, соответственно.

2. Во все пробирки добавляют по 1 мл 10% раствора NaOH.

3. Пробирки осторожно нагревают до кипения, кипятят в течение 2 мин.

4. Далее в каждую пробирку добавляют по 3 капли раствора Pb(CH₃COO)₂.

5. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.

 

* Качественные реакции на триптофан

Реакция с формальдегидом

1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 2 капли раствора формалина.

3. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H₂SO_{4 (конц.)}, следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивались.

4. Наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.

Реакция Адамкевича

1. В первую пробирку вносят 5 капель 0.01% раствора триптофана, во вторую – 5 капель 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 2 мл концентрированной CH₃COOH.

3. В случае выпадения осадка пробирки осторожно нагревают до его растворения, после чего охлаждают.

4. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H₂SO_{4 (конц.)}, следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивалась.

5. Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.

Реакция Гопкинса-Коле

1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.

2. В обе пробирки добавляют по 1 мл глиоксалевой кислоты и по 10 капель 0.04 М раствора сульфата меди (II).

3. Далее в обе пробирки приливают небольшими порциями (по несколько капель) 2 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку каждый раз в ванночке со льдом.

4. Оставляют на 10 мин при комнатной температуре и ставят на 5 мин в кипящую водяную баню.

5. Отмечают появление окраски.