Клинико-диагностическое значение определения общего белка

Гипопротеинемии (снижение уровня общего белка в крови) встречаются:

· при недостатке белковой пищи (голодании, недоедании);

· сужении пищевода, нарушениях работы ЖКТ (например, воспалительного характера - при энтеритах);

· воспалительных процессах печени, при которых подавляется биосинтез белка (цирроз печени, интоксикации);

· врожденные нарушения в синтезе отдельных белков (анальбуминемия, болезнь Вильсона-Коновалова);

· при повышенном распаде белков (ожоги, злокачественные опухали, гиперфункции щитовидной железы);

· при беременности и лактации;

· при увеличении количества воды в кровеносном русле (например, при уменьшении диуреза, прекращении выделения мочи), внутривенном введении большого количества глюкозы, выделение в кровь большого количества антидиуретического гормона гипоталамуса.

Гиперпротеинемия (увеличение уровня общего белка в крови) бывает 2 видов:

Абсолютная гиперпротеинемия(не связанная с нарушением водного баланса) - встречается редко. Значительное возрастание концентрации общего белка (до 120 г/л) встречается при миеломной болезни. Менее выраженная гиперпротеинемия отмечается при хроническом полиартрите.

Относительная гиперпротеинемия (вызвана уменьшением содержания воды в русле крови) возникает из-за потери жидкости организмом больных, страдающих тяжелыми ожогами, генерализованным перитонитом, непроходимостью кишечника, неукротимой рвотой, поносом, несахарным диабетом, хроническим нефритом. Она может отмечаться при усиленном потоотделении.

 

Ответьте на вопросы:

1. Что понимают под определение «общий белок крови»?

2. Расскажите о строении белков.

3. Расскажите о свойствах белков.

4. Почему растворы белков устойчивы?

5. *Почему белки способны двигаться в электрическом поле? Ответ поясните на примере пептида МЕТ – ТРИ – ИЗОЛЕЙ – ПРО - АРГ.

6. *Что такое изоэлектрическая точка? Ответ поясните на примере пептида АРТ – ЦИС – ФЕН – АСП.

 

Практическая работа

«Определение альбумина в сыворотке крови

по биуретовой реакции».

Цели практической работы:

· закрепить знания о промежуточном обмене белков;

· научиться исследовать содержание альбуминов в сыворотке крови.

 

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

При добавлении к пробам сыворотки крови эталонного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) определенной концентрации альбумин, в отличии от других белков, не подвергается осаждению, оставаясь в подкисленном спиртовом растворе, что позволяет установить его содержание методом, основанном на биуретовой реакции.

 

Реактивы. 1. Изотонический раствор. 2. 0,2 н раствор едкого натра. 3. Биуретовый реактив. 4. Стандартный раствор альбумина. 5. Спиртовой раствор ТХУ.

Оборудование: 8. Центрифуга. 9. ФЭК с кюветами на 1 см. 10. Пробирки. 11. Центрифужные пробирки. 12. Пипетки на 1, 5 и 0,1 мл. 13. Стеклянная палочка.

 

Ход определения:

· В центрифужную пробирку вносят 0,75 мл раствора ТХУ и 0,25 сыворотки крови, перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 10 минут при комнатной температуре.

· Центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин.

· 0,2 мл центрифугата (должен быть совершенно прозрачным) переносят в другую пробирку и добавляют 5,0 мл рабочего раствора биуретового реактива.

· Параллельно определяют содержание общего белка, для чего к 0,1 мл сыворотки добавляют 5,0 мл рабочего раствора биуретового реактива.

· Пробы оставляют для окрашивания на 30 - 60 минут.

· Фотометрируют при зеленом светофильтре 540-560 нм (546 нм) в кювете на 1 см. В качестве контроля берут биуретовый реактив.

 

Расчет.

Расчет ведут по калибровочной кривой. Для его построения из основного раствора белка готовят рабочие стандартные растворы.

Стандартный раствор белка, мл	Изотонический раствор, мл	Концентрация альбумина, г/л
0,2	0,8
0,3	0,7
0,4	0,6
0,5	0,5
0,6	0,4
0,7	0,3

На основании построенной кривой находят фактор пересчета F (для этого концентрацию делят на экстинцию F = C / А).

Для определения количества альбумина применяют формулу:

С (г/л) = Аоп * F * 2

 

Норма альбумина в сыворотке крови 35-55 г/л.