Преаналитический этап исследований обмена углеводов

Основным показателем обмена углеводов в организме служит глюкоза. Её исследование проводят в цельной крови (капиллярной и венозной), сыворотке, плазме, моче. При заборе, хранении и транспортировке биологического материала нужно соблюдать ряд общих требований.

Подготовка обследуемых:

· Забор крови делают утром с 8 до 10 часов утра. В экстренных случаях взятие крови осуществляется в любое время дня.

· Кровь берут натощак, после 8-12-часового голодания.

· Воздержание от приема алкогольных напитков не менее 24 часов.

· Исключается физическое напряжение и эмоциональное возбуждение, для чего дают обследуемому отдохнуть 15 минут.

Получение и хранение биологического материала:

· Капиллярную кровь исследуют сразу же после забора материала.

· Для получения цельной крови или плазмы венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом (соли ЭДТА, гепарин, гепаринат чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом лития, натрия или аммония), стабилизатором или ингибиторолм гликолиза. В качестве ингибиторов гликолиза используют фторид натрия или калия. Соотношение кровь: антикоагулянт: стабилизатор = 1 мл: 2 мг: 2,5 мг. Центрифугирование проводят в обычном режиме.

· Для получения сыворотки крови венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку со стабилизатором гликолиза. Центрифугирование проводят в обычном режиме.

· Для исследования мочи используют утреннюю порцию. В экстренных случаях можно исследовать любую порцию мочи. Исследование проводят не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы. Для сбора мочи используют контейнеры из темного стекла, в которые предварительно добавляют ледяную уксусную кислоту, бензоат натрия или фторид натрия (ингибиторы гликолиза).

Условия хранения биологического материала:

· Биологический материал хранят в хорошо закрытых контейнерах.

· Капилярную кровь хранят 1 час. Исследования проводят в течение 10 минут от забора материала (после 10 минут отмечается снижение уровня глюкозы).

· Для хранения цельной крови в ней удаляют белки. В таком виде глюкоза стабильна в течение 8 часов при комнатной температуре и 3 дня в холодильнике при 4-6 С.

· Плазму и сыворотку отделяют от форменных элементов не позднее 30 минут после забора материала. Плазму и сыворотку можно хранить 12 часов в холодильнике при температуре 4-8 С.. При использовании ингибиторов гликолиза хранить можно: 1 день при комнатной температуре, 7 дней при 4-8 С, 1 месяц при –20 С.

· Глюкоза в моче стабильна при комнатной температуре и 4-8 С в течение 2 часов, при –20 С в течение 2 дней.

Примечания:

· Концентрация глюкозы в венозной крови на 10 % меньше, чем в капиллярной. Концентрация глюкозы в сыворотке и плазме на 10-13% выше, чем в цельной крови.

· Цитрат натрия мешает определению глюкозы.

· Повышение глюкозы в крови вызывают следующие факторы: курение, голодание, стресс, прием пищи, кофе, гипертермия, диета с низким содержанием жиров, ожирение, беременность, физические нагрузки, некоторые лекарственные препараты (кофеин, эстрогены, пероральные контрацептивы, диуретики).

· Понижение уровня глюкозы в крови вызывает прием алкоголя в больших дозах, длительное пребывание в положении лежа, тепловой стресс, лихорадка, очень тяжелые физические упражнения, сезонное снижение весной, некоторые лекарственные препараты (анаболические стероиды, ацетилсалициловая кислота, антигистаминные препараты).

 

Практическая работа

«Определение глюкозы в сыворотке крови

глюкозооксидазным методом».

 

Цели практической работы:

· закрепить знания о превращениях глюкозы в организме;

· изучить клинико-диагностическое значение глюкозы;

· научиться исследовать уровень глюкозы в крови ферментативным методом.

 

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

 

Принцип:

Определение глюкозы основано на реакции, катализируемой глюкозооксидазой:

Глюкоза + O2 глюкозооксидаза глюколактон + Н2О2

Образующаяся в ходе данной реакции перекись водорода вызывает окисление субстратов пероксидазы с образованием окрашенного продукта. Увеличение оптической плотности раствора пропорционально концентрации глюкозы в образце.

 

Реактивы: 1. Фосфатный буфер рН=7. 2. Глюкозооксидаза. 3. Пероксидаза. 4. Калибровочный раствор глюкозы 10 ммоль/л. 5.Сыворотка крови.

Оборудование: 1. Пробирки – 3 шт. 2. Фотоколориметр. 3. Термостат. 4. Пипетки на 5 мл. 4. Дозатор на 0.05 мл.

 

Ход определения:

Проведите исследование количества глюкозы в сыворотке крови согласно таблице.

Реактивы.	Контроль, мл.	Стандарт, мл.	Опыт, мл.
Сыворотка.	-	-	0,05
Стандарт.	-	0,05
Рабочий реактив.	2,50	2,50	2,50

· Реакционную смесь перемешайте и инкубируйте при 37°С не менее 15 минут.

· Через 5 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхните.

· После инкубации измерьте оптическую плотность опытной и стандартной проб относительно контроля в кювете на 5 мм при 500 нм.

 

Расчет к онцентрации глюкозы производят по формуле:

Сглюкоза = Еоп/Ест * 10 (ммоль/л)

 

Норма.

Норма глюкозы в цельной крови: 3,3 – 5,5 ммоль/л.

Норма глюкозы в сыворотке крови: 3,7 – 6,1 ммоль/л.

Сразу после рождения уровень глюкозы в крови детей соответствует её содержанию в плазме крови матери. Однако уже в первые часы жизни концентрация глюкозы в крови падает, достигая на вторые сутки 2,5 ммоль/л; к 5-6 суткам концентрация глюкозы крови увеличивается. Постепенное её возрастание происходит и в дальнейшем, но лишь к 15 годам концентрация глюкозы достигает значений, характерных для взрослого человека.