Преаналитический этап ферментативных исследований

Основным биологическим материалом для исследования активности ферментов является свежая негемолизированная сыворотка крови или плазма, иногда свежая капиллярная или венозная кровь.

· Забор крови проводится с 7 до 9 ч утра, натощак;

· Перед анализом обследуемый должен исключить прием алкоголя, курение, физические нагрузки, прием лекарств;

· Сдавливание сосудов при наложении жгута должно быть минимальным и не превышать 30 с;

· В качестве антикоагулянта используют гепарин и его соли;

· Исследование активности ферментов в сыворотке или плазме проводят в день взятия биоматериала, гепаринизированную кровь исследуют в течение 1 часа, свежую кровь – в течение 3 минут;

· Следует помнить, что на активность ферментов влияет температура, наличие активаторов и ингибиторов, рН среды, поэтому все исследования проводят в сухих чистых пробирках, при 37⁰С, строго соблюдая оптимальную рН исследуемого фермента;

· Повторное оттаивание и замораживание сыворотки крови не допустимо.

Использование ферментов в медицине.

Использование ферментов в медицине возможно по трем направлениям:

1. Энзимопатология – изучает нарушения активности ферментов в развитии заболевания.

Энзимопатии – заболевания, характеризующиеся нарушением содержания того или иного фермента в организме. Они классифицируются:

· Наследственные, связанные с полным нарушением биосинтеза какого-либо фермента;

· Токсические, связанные с избирательным угнетением активности отдельных ферментов;

· Алиментарные, вызванные дефицитом витаминов, белка, микроэлементов;

2. Энзимодиагностика – измерение активности или изоферментов в крови и моче для диагностики заболеваний, сопровождающихся разрушением клеток. Либо это применение ферментов для определения различных веществ в биологических жидкостях – ферментативный метод является наиболее специфичным и точным.

Требования к ферментам, используемым в клинико-биохимических исследованиях:

· Органоспецифичность;

· Низкая активность в крови в норме;

· Выход в кровь только при повреждении соответствующего органа;

· Высокая стабильность в крови;

· Доступная методика определения активности фермента.

3. Энзимотерапия – использование ферментов в качестве лекарственных средств.

· Использование пищеварительных ферментов (фестал, мезим) при лечении нарушений пищеварения.

· Фибринолизин применяют при лечении незаживающих ран, пролежней, для рассасывания тромбов.

· Лидаза используется после операций для предотвращения образования грубых рубцов.

· Трасилол, будучи ингибитором протеолитических ферментов, эффективен при лечении острых панкреатитов.

 

Практическая работа

«Обнаружение действия и специфичности ферментов».

Цели практической работы:

· усвоить представления о диагностическом значение определения ферментов;

· научиться обнаруживать действие и специфичность амилазы слюны.

 

Задание для самостоятельной работы:

1. Законспектируйте методику проведения практической работы.

2. Подготовьте рабочее место для исследования.

3. Проведите определение действия и специфичности амилазы слюны.

4. Сделайте выводы по работе и рисунки.

5. Ответьте на дополнительные вопросы.

 

Принцип:

Фермент слюны амилаза при определенных условиях производит гидролиз крахмала до мальтозы.

_{амилаза амилаза мальтаза}

(С₆Н₁₀О₅)_у-----------(С₆Н₁₀О₅)_х-------------уС₁₂Н₂₂О₁₁-----------nС₆Н₁₂О₆

^{крахмал декстрины мальтоза глюкоза}

Реактивы: 1. 1% раствор крахмала. 2. 2% раствор сахарозы. 3. 1% раствор йода. 4. 5% раствор сульфата меди. 5. 10% раствор гидрооксида натрия. 6. Амилаза слюны. 7. Дистиллированная вода.

Оборудование: 1. Штатив с пробирками (7 шт). 2. Пипетки глазные. 3. Воронка. 4. Стаканчик. 5. Термостат. 6. Спиртовка. 7.Фильтровальная бумага.