Тема: Обмен нуклеиновых кислот

ЦЕЛЬ: Рассмотреть особенности обмена нуклеиновых кислот и ознакомиться с методом количественного определения мочевой кислоты.

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ.

1. Типы нуклеиновых кислот, их локализация в клетке. Компоненты нуклеиновых кислот.

2. Строение и уровни организации нуклеиновых кислот. Первичная структура ДНК и РНК. Представление об укладке ДНК в хроматине и хромосомах. Вторичная структура РНК (м-РНК, т-РНК, р-РНК).

3. Распад нуклеопротеидов в пищеварительном тракте. Нуклеопротеидный пул клеток, пути его пополнения и расходования.

4. Биосинтез пуриновых нуклеотидов: начальные стадии от рибозо-5-фосфата до 5-фосфорибозиламина, происхождение атомов пуринового ядра.

5. Распад пуриновых нуклеотидов. Концентрация мочевой кислоты в крови. Гиперурикемия. Подагра. Синдром Леша-Нихана.

6. Биосинтез и катаболизм пиримидиновых нуклеотидов. Биосинтез дезоксирибонуклеотидов. Регуляция этих процессов.

7. Соедините водородными связями комплементарные части дезоксиаденозина и тимидина; цитидина и гуанозина.

8. Напишите распад гуаниловой кислоты, включая образование мочевой кислоты.

9. Напишите распад цитидиловой кислоты, включая образование b-аланина.

10. У больного с мочой за сутки выделяется 1,5 г мочевой кислоты (норма до 0,7 г), повышено ее содержание и в крови. Врач назначил лечебный препарат гипоксантин (аллопуринол), рекомендовал ограничить мясную пищу. Какую болезнь Вы диагностируете? Принцип действия гипоксантина (аллопуринола).

Лабораторная работа.

Определение мочевой кислоты в моче

Клинико-диагностическое значение метода.

В норме у человека с мочой выделяется 1,6-3,54 ммоль/сут мочевой кислоты (270-600мг/сут), как конечного продукта обмена пуриновых оснований.

Гипоурикурия отмечается при подагре (обострение), нефрите, почечной недостаточности.

Гиперурикурия отмечается при подагре, усиленном распаде нуклеопротеидов, при большом поступлении нуклеопротеидов в организм с пищей. У детей выделяется относительно больше мочевой кислоты, чем у взрослых. При подагре соли мочевой кислоты (ураты) откладываются в хрящах, мышцах, суставах. Содержание мочевой кислоты в крови может быть повышено, а с мочой выделяться меньше, чем в норме.

Принцип метода. Метод основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовый реактив в фосфорно-вольфрамовую синюю, интенсивность окраски которой пропорциональна содержанию мочевой кислоты. Количество фосфорно-вольфрамовой синей определяется путем титрования красной кровяной солью. При действии последней синее окрашивание исчезает.

ХОД РАБОТЫ: В колбу к 1,5 мл мочи прибавить 1 мл 20% раствора карбоната натрия и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива Фолина, перемешать и титровать 0,01Н раствором красной кровяной соли до исчезновения синего окрашивания. Для расчета содержания мочевой кислоты в моче необходимо знать, какое количество мочевой кислоты соответствует 1 мл K₃[Fe(CN)₆]. Например, на титрование стандартной пробы, где к 1,5 мл прибавили 1 мл 20% раствора Na₂CO₃ и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, содержащего 0,5 мг мочевой кислоты в 1 мл, или 0,75 мг в 1,5 мл, пошло 0,81 мл феррицианида калия. Тогда 1 мл феррицианида калия (k) соответствует:

мг мочевой кислоты

Х=k´а´в/1,5 (мг/сут)

Расчет:

 

, где

х – содержание мочевой кислоты;

0,8 мг мочевой кислоты соответствует 1 мл красной кровяной соли;

а – количество красной кровяной соли, пошедшее на титрование (мл);

в – суточный диурез в мл.

ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:

1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 469-478, 498-503.

2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 521-544.

3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агенство, 2001, с. 339-350.

4. Северин Е.С., Алейникова Т.Л., Осипов Е.В. Биохимия: Учебник. –М.: Медицина, 2000, с. 151-154.

5. Лекционный материал.

Дополнительная литература:

1. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами /Под ред. Члена-корренспондента РАН, проф. Е.С. Северина, проф. А.Я. Николаева. М.: ГЭОТАР-МЕД. 2001. -448 с.: ил. – (XXI век).

2. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 2.