Механизмы действия и биотрансформация. В организме человека тиамин фосфорилируется в печени с образованием моно-, ди- и трифосфорных эфиров

В организме человека тиамин фосфорилируется в печени с образованием моно-, ди- и трифосфорных эфиров.

Кокарбоксилаза представляет собой сложный эфир тиамина и дифосфорной кислоты - тиаминдифосфат:

Кокарбоксилазу получают синтетическим путем. Синтетический аналог тиамина - бенфотиамин содержит раскрытый тиазоловый цикл:

По своим фармакологическим свойствам бенфотиамин близок к витамину В₁ и кокарбоксилазе, легко проникает через клеточные мембраны, устойчив к действию тиаминазы. Его назначают при авитаминозе и аритмиях. При замене метильной группы в пиримидиновом цикле на этильную, пропильную или изопропильную витаминная активность сохраняется, тогда как замещение на водород приводит к значительному снижению активности.

Фармакопейными препаратами тиамина являются тиамина бромид и тиамина хлорид. Оба препарата очень схожи по химическим свойствам и фармакологическому действию (см. табл. 10.16).

Контроль качества

В связи с идентичностью химической структуры тиамина хлорид и тиамина бромид мало отличаются между собой по свойствам.

Определение подлинности. Определение подлинности тиамина проводят методами ИК- и УФ-спектроскопии. ИК-спектр тестируемого образца сравнивают со спектром стандартного образца тиамина. Перед определением образцы высушивают при температуре 105 °С в течение 2 ч.

УФ-спектр водного раствора тиамина хлорида (1:100 000) имеет два максимума поглощения (при 240 и 262 нм) и минимум поглощения при 212 нм (рис. 10.8).

 

Рис. 10.8. УФ-спектр водного раствора тиамина хлорида (1:100 000)

Определение подлинности тиамина основано на реакциях с общеалкалоидными реактивами, образовании окрашенных продуктов окисления, определении хлорид- и бромид-ионов. Атом серы можно обнаружить по выделяющемуся SO₂ при окислительной термической деструкции ЛВ.

Среди окислительно-восстановительных реакций особенно известна реакция образования тиохрома, протекающая в водном растворе. Например, при воздействии гексацианоферрата(Ш) калия в щелочной среде появляется желтое окрашивание.

Для проведения тиохромной пробы в 10 мл воды растворяют около 20 мг ЛВ, добавляют разведенную уксусную кислоту и 1,6 мл 1 моль/л раствора натрия гидроксида. Раствор нагревают на водяной бане в течение 30 мин и оставляют охлаждаться. Затем добавляют 5 мл разбавленного 2 моль/л раствора натрия гидроксида, 10 мл 5% раствора железа феррицианида и 10 мл бутанола, перемешивают содержимое колбы. Спиртовой слой имеет интенсивную светло-голубую флуоресценцию при облучении УФ-светом (λ = 365 нм):

Для отличия галогенводородных солей тиамина проводят реакцию окисления раствором хлорамина в кислой среде в присутствии хлороформа. В случае тиамина бромида наблюдается желтое окрашивание слоя органического растворителя в результате выделения молекулярного брома (см. приложение 4).

После сплавления с щелочами возможно определение сульфид-ионов по появлению красно-фиолетового окрашивания с раствором натрия нитропруссида.

Испытания на чистоту. Раствор тиамина (5%), приготовленный на свободной от углекислого газа дистиллированной воде, должен быть прозрачным и по цветности не превышать стандартный раствор. Цветность раствора тиамина хлорида определяют также методом УФ-спектроскопии.

Для определения нитратов к 0,4 мл раствора (1:10) добавляют 2 мл серной кислоты и охлаждают. Затем осторожно добавляют 2 мл 80 г/л раствора сульфата железа(П). Не должно появляться коричневое кольцо. При наличии нитрат-ионов в растворе результатом окислительно-восстановительной реакции с ионом железа Fe+² будут нитрит-ионы, которые в кислой среде окисляются до диоксида азота - паров красно-бурого цвета.

Методом газовой хроматографии определяют присутствие летучих органических веществ. Хроматографическую чистоту препарата оценивают, сравнивая хроматограммы исследуемой пробы и стандартного образца.

Содержание тяжелых металлов не должно превышать 20 мкг/мл, содержание сульфатов не должно превышать 300 мкг/мл.

Количественное определение. Количественное определение тиамина в лекарственных средствах проводят методами кислотно-основного титрования в неводной и водной средах, а также аргентометрически. Методы алкалиметрического и аргентометрического титрования могут быть использованы в качестве экспресс-методов количественного определения тиамина в ЛС.

Возможно также количественное осаждение тиамина кремневольфрамовой, фосфорно-вольфрамовой кислотами и другими осадительными реактивами с последующим гравиметрическим или нефелометрическим определением тиамина.

Кислотно-оснОвное титрование проводят с потенциометрическим контролем точки эквивалентности. Для этого 0,150 г субстанции растворяют в смеси из 5,0 мл 0,01 моль/л раствора HCl и 50 мл спирта этилового. Раствор субстанции титруют 0,1 моль/л раствором NaOH.

1 мл 0,1 моль/л раствора NaOH соответствует 16,86 г C₁₂H₁₈Cl ₂N₄OS. Содержание тиамина хлорида в лекарственной субстанции должно быть не менее 98,5 и не более 101,5%.