Дифференциально-диагностические

Консервирующие

Требования к условиям культивирования бактерий

N Питательные потребности

простые – растут на универсальных питательных средах

сложные – растут на специальных питательных средах

N Температура культивирования

≈ 37°С – мезофилы

6 – 20°С – психрофилы

50 – 60°С – термофилы

N Реакция среды (рН)

кислая – ацидофилы

нейтральная – большинство патогенных бактерий

щелочная – алкалифилы

N Условия аэрации

не принимают во внимание – факультативные анаэробы

↓ О2 – микроаэрофилы

↑ СО2 – капнофилы

без доступа воздуха – анаэробы

с обязательным доступом воздуха – облигатные аэробы

9. Характер роста бактерий на искусственных питательных средах. Жидкие питательный среды

диффузная муть – большинство бактерий

плёнка – «коховские бактерии»

придонный или пристеночный рост – стрептококки

плёнка со спускающимися вниз «сталактитами» – Yersinia pestis

10. Колония – видимое невооруженным глазом скопление бактерий одного вида, являющееся потомством одной клетки. Колонии бактерий разных видов отличаются:- формой;- величиной;- прозрачностью;- цветом;- высотой;- характером поверхности и краев;- консистенцией.

Характер роста бактерий на искусственных питательных средах

Плотные питательные среды

S-форма колоний («гладкая»)кокки

Г– палочки, кроме Yersinia pestis

R-форма колоний («шероховатая»)

Г + палочки

Yersinia pestis

Характер роста бактерий на искусственных питательных средах

Жидкие питательный среды

диффузная муть – большинство бактерий

плёнка – «коховские бактерии»

придонный или пристеночный рост – стрептококки

плёнка со спускающимися вниз «сталактитами» – Yersinia pestis

11. Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по фер­ментативной активности.
В основе всех метаболических реакций в бактериальной клетке лежит деятельность ферментов, которые принадлежат к 6 клас­сам: оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лигазы, лиазы, изомеразы. Ферменты, образу­емые бактериальной клеткой, могут локали­зоваться как внутри клетки — эндоферменты, так и выделяться в окружающую среду — экзоферменты. Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки доступными для проникновения внутрь ис­точниками углерода и энергии. Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в окружающую среду, расщепля­ют крупные молекулы пептидов, полисаха­ридов, липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются ферментами агрессии. Некоторые ферменты локализо­ваны в периплазматическом пространстве бактериальной клетки. Они участвуют в про­цессах переноса веществ в бактериальную клетку.

12.методы определения е активности бактерий. Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и — в некоторых слу­чаях — для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности поль­зуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзофермен­тов можно определить при помощи диффе­ренциально-диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред.
Идентификация бактерий по фер­ментативной активности.
Наиболее ча­сто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз, используя специальные методы и среды.
Для определения протеолитической активности мик­роорганизмы засевают в столбик желатина уколом. Че­рез 3—5 дней посевы просматривают и отмечают харак­тер разжижения желатина. При разложении белка некоторыми бактериями могут выделяться специфические продукты — индол, сероводород, аммиак. Для их опреде­ления служат специальные индикаторные бумажки, ко­торые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ или (и) пептонной водой, засеянными изучаемыми микроорганизмами. Индол (продукт разло­жения триптофана) окрашивает в розовый цвет полоску бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты. Бумага, пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии сероводорода чернеет. Для определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.
Для многих микроорганизмов таксономическим при­знаком служит способность разлагать определенные углеводы с образованием кислот и газообразных продук­тов. Для выявления этого используют среды Гисса, со­держащие различные углеводы (глюкозу, сахарозу, маль­тозу, лактозу и др.). Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив Андреде, который изменяет свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,2—6,5, поэтому набор сред Гисса с ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».
Для обнаружения газообра­зования в жидкие среды опускают поплавки или исполь­зуют полужидкие среды с 0,5% агара.
Для того чтобы оп­ределить интенсивное кислотообразование, характерное для брожения смешанного типа, в среду с 1% глюкозы и 0,5% пептона (среда Кларка) добавляют индикатор метиловый красный, который имеет желтый цвет при рН 4,5 и выше, и красный — при более низких значениях рН.
Гидролиз мочевины определяют по выделению ам­миака (лакмусовая бумажка) и подщелачиванию среды.
При идентификации многих микроорганизмов исполь­зуют реакцию Фогеса — Проскауэра на ацетоин — проме­жуточное соединение при образовании бутандиола из пировиноградной кислоты. Положительная реакция свиде­тельствует о наличии бутандиолового брожения.
Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешива­ния микробных клеток с 1 % раствором перекиси водоро­да.
Для определения цитохромоксидазы применяют ре­активы: 1) 1% спиртовый раствор сс-нафтола-1; 2) 1% водный раствор N-диметил-р-фенилендиамина дигидрохлорида. О наличии цитохромоксидазы судят по синему окрашиванию, появ­ляющемуся через 2—5 мин.
Для определения нитритов используют реак­тив Грисса: по­явление красного окрашивания свидетельствует о нали­чии нитритов.