Моноклональные антитела в промышленных масштабах получены

Сравнительно недавно. Как известно, нормальная иммунная система спо-

Собна в ответ на чужеродные агенты (антигены) вырабатывать до миллио-

На различных видов антител, а злокачественная клетка синтезирует только

Антитела одного типа. Миеломные клетки быстро размножаются. Поэтому

Культуру, полученную от единственной миеломной клетки, можно под-

Держивать очень долго. Однако невозможно заставить миеломные клетки

Вырабатывать антитела к определенному антигену. Эту проблему удалось

Решить в 1975 г. Цезарю Мильштейну. У сотрудников Медицинской на-

Учно-исследовательской лаборатории молекулярной биологии в Кем-

Бридже возникла идея слияния клеток мышиной миеломы с В-

Лимфоцитами из селезенки мыши, иммунизированной каким-либо специ-

Фическим антигеном. Образующиеся в результате слияния гибридные

клетки приобретают свойства обеих родительских клеток: бессмертие и

Способность секретировать огромное количество какого-либо одного ан-

титела определенного типа (рис. 4.5). Эти работы имели огромное значе-

Ние и открыли новую эру в экспериментальной иммунологии.

В 1980 г. Карло М. Кроче с сотрудниками (США) удалось создать ста-

Бильную, продуцирующую антигены, внутривидовую человеческую гиб-

Ридому путем слияния В-лимфоцитов миеломного больного с перифери-

Ческими лимфоцитами от больного с подострым панэнцефалитом.

Основные этапы получения гибридомной техники следующие. Мышей

Иммунизируют антигеном, после этого из селезенки выделяют спленоци-

Ты, которые в присутствии полиэтиленгликоля сливают с дефектными

Опухолевыми клетками (обычно дефектными по ферментам запасного

пути биосинтеза нуклеотидов – гипоксантина или тиамина). Далее на се-

Лективной среде, позволяющей размножаться только гибридным клеткам,

Проводят их отбор. Питательную среду с растущими гибридомами тести-

Антиген

Антиген

Антитело

Анти-

Сыворотка

Смесь

Антител

Моноклональные антитела

Антигенная

Детерминанта

Селезенка

Слияние

Лимфоциты

Лимфоциты

Миеломные

Клетки

Гибридные

Миеломные

Клетки

А Б

Клон 1 Клон 2 Клон 3 Клон 4

Рис. 4.5. Схема продукции моноклональных антител гибридомой,

Образованной лимфоцитами и миеломными клетками (по Г. Фаффу, 1984).

А – антиген с 4 антигенными детерминантами на поверхности; после инъекции антигена лимфоциты мыши

продуцируют 4 типа антител; антисыворотка из крови мыши содержит смесь антител; Б – лимфоциты

Сливаются с миеломными клетками; гибридные клетки (источник чистых антител) клонируют.

Руют на присутствие антител. Положительные культуры отбирают и кло-

Нируют. Клоны инъецируют животным с целью образования опухоли,

Продуцирующей антитела, либо наращивают их в культуре. Асцитная

жидкость мыши может содержать до 10–30 мг/мл моноклональных анти-

Тел.

Гибридомы можно хранить в замороженном состоянии, и в любое вре-

Мя вводить дозу такого клона в животное той линии, от которой получены

Клетки для слияния. В настоящее время созданы банки моноклональных

Антител. Антитела применяют в разнообразных диагностических и тера-

певтических целях, включая противораковое лечение (таблица 4.1).

Эффективным способом применения моноклональных антител в тера-

Пии является связывание их с цитоксическими ядами. Антитела, конъюги-

Рованные с ядами, отслеживают и уничтожают в макроорганизме раковые

Клетки определенной специфичности.

Таким образом, клеточная инженерия является эффективным способом

Модификации биологических объектов и позволяет получать новые цен-

Ные продуценты на органном и также клеточном и тканевом уровнях.

Т а б л и ц а 4.1

Возможные области и способы применения антител (по И. Хиггинсу, 1988)

Область медицины Способ применения

Анализ Структурные зонды для идентификации