Методика проведения исследования

Дополнительно к планшетам ММТ-Е1 и Е2 необходимы сте­рильная дистиллированная вода, реактивы для тестов: фенилаланин, индол, нитраты, стерильное вазелиновое масло и отечественный стандарт мутности на 10 единиц.

Выделение культуры и приготовление бактериальной

суспензии. Используют чистую культуру грамотрицательных палочек со среды Эндо или кровяного агара. Ставят тест на ферментацию глюкозы (О/F-тест) на среде Хью-Лейфсона для установления прина­длежности выделенной культуры к группе ферментирующих микро­организмов и тест на оксидазу для дифференциации энтеробактерий от вибрионов и других оксидазоположительных культур. Готовят суспензию в стерильной свежеприготовленной дистиллированной воде (при хранении рН воды снижается, что может повлиять на ре­зультаты биохимических реакций). Конечная мутность суспензии должна соответствовать указанному выше стандарту.

   Инокуляция планшетов и их инкубация

   Приготовленную суспензию инокулируют по 0,15 мл в каждую лунку соответствующих горизонтальных рядов планшетов. После ино­куляции в лунки №1,3, 4, 5, 7 (тесты: сероводород, лизин, индол, орнитин, уреаза соответственно) планшета ММТ-Е1 и в лунку № 1 (аргинин) планшета ММТ-Е2 добавляют по две капли вазелинового масла. План­шеты инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 35-37 °С.

Учет результатов и идентификация

  По окончании инкубации добавляют реактивы в следующие лунки: ММТ-Е1 - № 4 - две капли реактива на индол, № 10 - одну каплю реактива на фенилаланин; ММТ-Е2 - № 12 - реактивы на нитраты: одну каплю раствора соляной кислоты и затем одну каплю раствора риванола.

    Учитывают результаты планшетных тестов визуально с помо­щью таблицы «Интерпретация реакций» и заносят их в бланки (учет результатов теста на бета-галактозидазу проводят дважды: через 3-5 часов и через 18-24 часа, так как у некоторых штаммов желтое окрашивание к конечному сроку инкубации исчезает).

Таблица 1 - Интерпретация реакций

Идентификацию проводят с помощью таблиц «Биохимичес­кая характеристика энтеробактерий» с учетом данных микроскопии, характера роста, О/F-теста, оксидазной активности, подвижности, наличию пигмента, источника изоляции и др.

   Применение микротест-систем ЭНТЕРОтест 24

  ЭНТЕРОтест 24 предназначен для определения биохимичес­кой активности и идентификации наиболее важных для патологии человека и животных микроорганизмов семейства энтеробактерий и дифферен­циации их от некоторых представителей семейства вибрионов в течение 18-24 часов. Система представляет собой стриппированный планшет, содержащий четыре трехрядных вертикальных стрипа для определения 24 биохимических тестов: индол, сероводород, лизин, орнитин, уреаза, аргинин, цитрат Симмонса, малонат натрия, фе-нилаланин, бета-галактозидаза, инозитол, адонитол, целлобиоза, сахароза, трегалоза, маннитол, ацетоин (реакция Фогеса-Проскауэ-ра), эскулин, рамноза, сорбитол, мелибиоза, раффиноза, дульцитол, глюкоза. Набор ЭНТЕРОтест 24 содержит 10 пластинок и позволяет провести идентификацию 40 культур.