Кулътурально-морфологические и биохимические свойства

   Морфология. E.coli - полиморфные палочки, короткие, относительно толстые с закругленными концами, длиной 1-3 мкм, шириной 0,3-0,6 мкм. Располагаются одиночно, реже попарно, в организме может принимать коккоподобную форму. Бактерии подвижны, перетрихи, спор не образуют, отдельные серовары образуют капсулу (О8, О9, О101), встречаются и неподвижные. Палочка грамотрицательная, хорошо красится обычными анилиновыми красителями, часто биполярна, особенно в тканях и экссудатах.

   Культуральные свойства. E.coli неприхотлива в отношении питательных сред, может расти в пределах от 15° до 55°С (температурный оптимум около 37°С). Это аэроб или факультативный анаэроб, рН 7,0-7,4. Хорошо растет на обычных питательных средах - МПА, МПБ, средах Эндо и Левина. На МПА через 24 часа образуются прозрачные с серовато-голубым отливом сочные колонии, легко сливающиеся между собой, с ровными краями и гладкой поверхностью (S-форма).В МПБ обильный рост при значительном и интенсивном помутнении среды и наличие сероватого, легко разбивающегося осадка при встряхивании. Пленка на поверхности бульона обычно не появляется. Может быть пристеночное кольцо. При посеве в желатин, разжижение среды не наступает. По уколу получается серовато-белый рост. Молоко свертывается, лакмусовое молоко быстро розовеет (образование кислоты) и коагулируется. Среда Эндо является дифференциальной средой на кишечную палочку. Образует 2 типа колоний: темно-вишневого цвета с металлическим блеском и малиново-красные с розовым ободком, диаметром 2-3 мм. На среде Левина колонии темно-фиолетовые или черные. Для культуры характерен фекальный запах.

  Биохимические свойства. E.coli - обладает высокой ферментативной активностью. Ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, маннит; сахарозу и дульцит ферментирует не постоянно; не изменяет адонит и инозит, образует индол, не образует сероводород, желатин не разжижает, на среде Симмонса не растет, положительная реакция с метил-рот (ярко-розового цвета), отрицательная реакция Фогеса-Проскауэра (среда желтого цвета), мочевину не расщепляет.

     5. ЭПИЗООТОЛОГИЯ

     Основными источниками возбудителя болезни являются больные и переболевшие колибактериозом животные, а также маточное поголовье - носители патогенных штаммов эшерихий. Заражение животных может происходить во время рождения через контаминированные возбудителем болезни наружные половые органы и шерстный покров задней части туловища матери, а также в первые часы и дни их жизни через корм, воду, посуду для кормления молодняка, руки и спецодежду обслуживающего персонала и все предметы помещения, загрязнённые фекалиями больных животных, с которыми соприкасается молодняк. Основной путь заражения - алиментарный, в отдельных случаях аэрогенный. Не исключается возможность внутриутробного заражения плодов. Заболевание животных колибактериозом возникает во все периоды года. Болеет чаще молодняк, в крови которых отсутствуют иммуноглобулины или имеется их недостаточное количество. Наиболее восприимчивы к естественному заражению щенки песцов и лисиц впервые 10 дней жизни, болеют колибактериозом и погибают преимущественно щенки 1-5- дневного (50,8 %) и 6-10- дневного (23,8 %) возраста. Щенки старшего возраста поражаются значительно реже. У нутрий аналогичное положение. Щенки норок и соболей устойчивы к естественному заражению. У них эта болезнь обычно регистрируется как секундарная или смешанная инфекция. У взрослых зверей колибактериоз может проявляться в период беременности или как местная инфекция, при которой поражаются отдельные органы (уроцистит, мастит). Способствующими и предрасполагающими к заболеванию условиями могут быть, кроме возрастного фактора, недоброкачественное и неполноценное кормление самок в период беременности и лактации, нарушение ветеринарно-санитарных, зоотехнических и зоогигиенических правил кормления и содержания беременных животных, а также новорожденного молодняка.

  Искусственное заражение лисиц, песцов, соболей, норок, речных бобров и нутрий удается методом внутривенного, внутрибрюшинного введения 1 мл свежевыделенной бульонной культуры E.coli. Звери при этом погибают в течение 24-48 ч. Введение культур кишечной палочки через рот очень редко приводит к заболеванию подопытных зверей.

Из лабораторных животных наиболее чувствительны к возбудителю колибактериоза морские свинки и кролики (дозы 0,2-0,5 мл суточной бульонной культуры). Внутрибрюшинное введение белым мышам патогенных для зверей культур E.coli в дозах 100 и 200 млн. микробов вызывает гибель в 80 % случаев. Некоторые штаммы E.coli проявляют высокую патогенность и даже при подкожном введении небольших доз культуры убивают мышей, кроликов и морских свинок.

 

6. КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ

  Инкубационный период продолжается от нескольких часов до суток. Заболевание начинается кратковременным повышением температуры на 0,5-1°С, затем наблюдаетсяслабость, потеря аппетита, угнетенное состояние животных, обезвоживание организма вследствие диареи. Такие животные быстро худеют и через 3-5 дней погибают. При энтеритной форме болезни возбудитель локализуется в кишечнике и регионарных брыжеечных лимфоузлах, основные симптомы болезни - диарея; при септической форме возбудитель находится в крови, внутренних органах и тканях, это проявляется появлением септических поражений в органах и тканях; при энтеротоксемической форме возбудитель локализуется в тонком отделе кишечника и брыжеечных лимфоузлах, это проявляется профузными поносами и гибелью нутрий от действия токсинов, выделяемых возбудителем.

 

7. ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ

  При вскрытии отмечают следующие изменения - легкие неравномерно окрашены. На розовом фоне их обнаруживают нередко очерченные отечные участки темно-красного цвета (геморрагическая пневмония, вызванная E.coli и P.aeruginosa почти неразличима). С поверхности разреза стекает светло-розовая, пенистая жидкость, которая содержится также в просвете бронхов и трахеи. Сердечная мышца светло-красного цвета, под эндокардом иногда находят точечные или полосчатые кровоизлияния, которые в тимусе отмечаются непостоянно. Сосуды сальника, брыжейки, серозной оболочки кишечника, почек сильно инъецированы. Печень желто-глинистой окраски, иногда содержит под серозным покровом точечные кровоизлияния. В некоторых случаях она переполнена кровью.

Почки серо-желтого цвета, иногда с фиолетовым оттенком. Под капсулой заметны кровоизлияния. Селезенка обычно не изменена, лишь изредка она увеличена в объеме, полнокровна. В просвете кишечника обнаруживают густую слизь или содержимое желто-зеленого цвета. Слизистая оболочка набухшая, гиперемирована и довольно часто усеяна точечными кровоизлияниями. Геморрагический энтерит регистрируется реже. В отдельных случаях кишечник истончен, анемичен и растянут газами. Лимфатические узлы брыжейки набухшие, поверхность разреза их темно-красного цвета, сочная.

При вскрытии головного мозга щенков, павших с признаками поражения центральной нервной системы, обращают на себя внимание деформация костей черепа, анемия, истощение, гиперемия мозга и кровоизлияния в мозг, а нередко и скопление гнойного экссудата или розовой жидкости в желудочках мозга. В мягкой мозговой оболочке во многих случаях содержатся очажки серо-белой окраски. Вещество мозга часто имеет пастозную консистенцию и серо-розоватый оттенок, на поверхности разреза заметны множественные очаги размягчения. Описанные изменения, соответствующие гнойному менингоэнцефалиту и гидроцефалии, встречаются преимущественно у щенков песцов и лисиц. Причем в отдельных хозяйствах от гнойного менингоэнцефалита колибактериозной этиологии погибает большое число щенков (до 15 % от общего количества павших зверей).

Как отличительную особенность патолого-морфологических изменений у нутрий следует отметить отечность суставов, кровянистый экссудат в грудной полости и слизистую пену в полости трахеи и бронхов.

 

   8. ДИАГНОСТИКА

  Диагноз на колибактериоз в хозяйстве (на ферме) устанавливают на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов бактериологического исследования материала от павших или больных диареей животных.

При подозрении на заболевание животных колибактериозом в ветеринарную лабораторию направляют нарочным 2-3 свежих трупа павших или убитых с диагностической целью больных животных (желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами) с сопроводительным документом. При невозможности послать трупы направляют сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов и аорты, долю печени с желчным пузырём, селезёнку, трубчатую кость, голову и в отдельном целлофановом пакете – отрезок поражённого участка тонкого кишечника, перевязанного с двух концов лигатурой, с регионарными брыжеечными лимфоузлами. В сопроводительной записке указывают вид и возраст животного, кому принадлежит, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения, цель бактериологического исследования.

     Для прижизненной бактериологической     диагностики колибактериоза в лабораторию направляют фекалии больных диареей животных (не менее чем от 5 с одной фермы), не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Проба фекалий массой 1-2 г от каждого больного животного берут во время дефекации или из прямой кишки в стерильные (прокипяченные) пробирки с помощью предварительно прокипяченного резинового катетера, обвертывают их ватой и вместе с сопроводительной запиской упаковывают в пенал, коробку или полиэтиленовый пакет. В случае невозможности быстрой доставки проб фекалии в лабораторию (через 3-4 часа после взятия), особенно в  теплое время года, их консервируют глицериновым раствором в соотношении 1:2 (последний готовят по прописи: глицерин нейтральный - 300мл, натрий хлористый-5 г, вода дистиллированная 700 мл, стерилизуют путем прогревания в водяной бане (100 С) в течение 30 - 40 мин).

  Бактериологическое исследование патологического материала проводят в соответствии с действующими «Методическими указаниями по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденными Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 27 июля 2000 года. На основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, серологических и биологических свойств возбудителя ставят диагноз на колибактериоз.

 

          8.1. Дифференциальная диагностика

        Эшерихиоз необходимо дифференцировать от острых расстройствах желудочно-кишечного тракта неинфекционной природы (отравления токсическими веществами различного происхождения), а также от сальмонеллёза, иерсиниоза, кампилобактериоза, анаэробной энтеротоксимии, вирусного гастроэнтерита.

   Типичные клинические признаки колибактериоза – острое течение и массовость заболевания, наличие поноса, кратковременное повышение температуры тела на 0,5-1°С. Из внутренних органов и тканей или только из мезентериальных лимфатических узлов и содержимого тонкого отдела кишечника павших   или вынужденно убитых животных выделяют культуры патогенных штаммов эшерихий.

Идентификация микроорганизмов семейства Е nterobacteri асеае на
базе планшетных фотометров фирмы «TERMO - Labsystems»,
                      «iEMS - Reader» и «Multican - Ascent»

Идентификацию микроорганизмов семейства Е nterobacteri асеае производят с использованием микротест-систем:

• ММТ-Е1 и ММТ-Е2

• ЭНТЕРОтест 24

• ЭНТЕРОтест 16

• ЭНТЕРО-Рапид 24

• ЭНТЕРО-Скрин

и диагностических полосок:

• КОЛИтест

• САЛМтест

 

  Применение систем мультимикротестов ММТ-Е1 и ММТ-Е2

Системы мультимикротестов ММТ-Е1 и ММТ-Е2 предназна­чены для определения биохимической активности и последующей идентификации наиболее распространенных представителей семейс­тва энтеробактерий и дифференциации их от некоторых бактерий из семейства вибрионов в течение 18-24 часов. Они представляют собой целиковые 96-луночные планшеты. Каждый планшет предназначен для проведения идентификациии восьми культур.

ММТ-Е1 позволяет определить двенадцать ключевых тестов: образование сероводорода, индола, наличие лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, уреазы, фенил аланиндезаминазы, утилизация цитрата натрия, малоната натрия, маннитола, сахарозы, лактозы и сорбитола.

ММТ-Е2 позволяет определить двенадцать дополнительных биохимических свойств, которые в сочетании с перечисленными ключевыми тестами служат для видовой идентификации энтеробак-терий: наличие аргининдегидролазы, бета-галактозидазы, нитратре-дуктазы; утилизация инозитола, дульцитола, арабинозы, рамнозы, мальтозы, адонитола, раффинозы, салицина, глюкозы.