Определение качественного состава бактерий по культуральным и морфологическим признакам

Из каждой группы колоний, выросших на плотных средах, го­товят препарат и определяют по форме клеток, к какому роду микроорганизмов они относятся.

Из общего числа микроорганизмов, развивающихся на МПА, можно выделить следующие роды: Pseudomonas, Flavobacterium, Bacillus, Micrococcus, Sarcina, Mycobacterium, Actinomyces.

Род Pseudomonas. На МПА микроорганизмы этого рода формируют колонии: круглые, неправильной формы, плоские и выпуклые, слизистые и пастообразные, просвечивающие, бесцветные или пигментированные (грязно-белые, синие, сине-зеленые, красные, желтые, бурые и черные).

Характерная особенность представителей рода - образование сине-зеленого или желто-зеленого флуоресцирующего пигмента. Некоторые колонии удается наблюдать только в ультрафиолетовых лучах. У других видов пигменты диффундируют в среду, окрашивая ее в соответствующий цвет. Образование определенного пигмента зависит от состава и реакции среды.

Клетки Pseudomonas прямые или слегка изогнутые, часто с заостренными концами. Они располагаются одиночно, парами или короткими цепочками. Размеры клеток 1,5-4 0,5-1 мкм. Двигаются эти организмы при помощи жгутиков (монотрихи или лофотрихи), не образуют чехлов; для них неизвестны стадии покоя. Бактерии Pseudomonas - аэробы, но ванаэробных условиях способны использовать для дыхания кислород нитратов. Клетки грамотрицательные.

Род Flavobacterium. На МПА дают выпуклые или слабо выпуклые округлые колонии диаметром 2-3 мм с цельным краем, чаще гладкие и блестящие, прозрачные, желтого цвета за счет каротиноидных пигментов, не диффундирующих в среду, встречаются желтовато-оранжевые колонии, иногда и красные.

Клетки палочковидной формы (0,5 1,0-3,0 мкм) с закругленными концами, неподвижны. Располагаются флавобактерии одиночно, парами и в виде коротких цепочек, иногда - в виде нити. Эндоспор не образуют. Грамотрицательные.

Род Micrococcus. На МПА, как правило, образуют колонии мелких и средних размеров (диаметр 2-4 мкм). Колонии могут быть: матовые, блестящие, маслянистые; гладкие, выпуклые, плоские; зернистые, мелкоскладчатые; пастообразной слизистой консистенции, иногда встречаются сухие плотные; цвет колоний возможен белый, серый, реже колонии бесцветные, встречаются буроватые, обычно - желтые, розовые или красные. Пигменты в среду не диффундируют. Клетки мелкие (диаметр 0,2-1,5 мкм), одиночные, могут встречаться пары, тетрады или скопления неправильной формы. Клетки неподвижные, не образуют эндоспор. Грамположительные.

Род Sarcina. Колонии средних размеров, круглые, компактные, выпуклые, плоские; гладкие, бугристые или складчатые, зернистой структуры; матовые или жирно-блестящие; желтые, лимонно-желтые, иногда розовые, красные, белые. Клетки сферические (диаметр 1,8-3 мкм), соединены в пакеты. Пакет объемный - куб, состоит из 8 клеток, поскольку образуется при делении клетки в трех взаимно перпендикулярных плоскостях. Под микроскопом пакет выглядит состоящим из четырех клеток (одна сторона куба). Есть сарцины, у которых пакеты уложены упорядоченно по четыре, и под микроскопом они смотрятся как большие тюки, состоящие из четырех пакетов.

Род Mycobacterium. Относится к группе микобактерии. На МПА микобактерии растут медленно или очень медленно. Они образуют мелкие, круглые компактные колонии, иногда приподнятые; мягкие, пастообразной или слизистой консистенции (растекающиеся по субстрату), бывают сухие крошащиеся, бугристые складчатые; матовые, блестящие, бесцветные или окрашенные (розовые, оранжевые, желтые, зеленые, синие, бурые, черные). Пигмент в среду не выделяют. Молодые клетки - ветвистые или угловатые с неправильными контурами (3,0-7,0 0,7 мкм); с возрастом у большинства видов клетки распадаются на кокки и палочки. Большинство видов грамположительные.

Род Bacillus. Палочковидные бактерии, способные образовывать более или менее термоустойчивые споры. Во время формирования споры палочковидная форма клеток сохраняется. По характеру роста колоний на МПА (или МПА + сусло-агар) можно иногда определить видовую принадлежность бацилл. Клетки грамположительные. Аэробы.

В. megaterium - земляная палочка (от лат. terra — земля, почва). Колонии гладкие, белые, выпуклые, жирно-блестящие, редко - складчатые (рис. 3 ); края колоний резко очерчены или волнисто-бахромчатые. Споры овальные или цилиндрические, не шире материнской клетки, в поперечнике достигают 2 мкм. Длина клеток – 5-7 мкм и более.
Рис. 3 Bacillus megaterium. Колонии на МПА (верхний рисунок), клетки культуры под микроскопом (верхний рисунок)

В. subtilis (от лат. sub — внутри или под, tilia — липа, трава, впервые выделена из сена) - сенная палочка. Колонии сухие мелкоморщинистые, бархатистые; бесцветные или розовые; срастающиеся с агаром; край колоний волнистый или слегка волнистый. Палочки короткие тонкие – 3-5 0,9 мкм. Споры овальные (0,9 0,6 мкм), расположены не строго центрально, на некоторых средах - ближе к центру. Клетки подвижные (перитрихи).

В. mesentericus - картофельная палочка. Название связано не с картофелем, а с картофельной болезнью хлеба, которую она вызывает. Появляется картофельная палочка на качественном пшеничном хлебе при хранении его в течение нескольких дней в теплом месте при повышенной влажности, вызывая разрушение белковых веществ и крахмала. При ее интенсивном развитии внешние признаки мякиша изменяются: при разломе он становится тянущимся и липким, появляется затхло-гнилостный, иногда с примесью сладковатого, запах. Колонии на МПА тонкие, сухие, морщинистые, серовато-белые. Палочки тонкие, длинные и короткие; подвижные (3-10 0,5-0,6 мкм); иногда они соединены в длинные нити. Споры овальные и продолговатые (0,9-0,5 мкм). При формировании спор клетки не меняют палочковидной формы. Прорастание спор экваториальное.

В. mycoides - грибовидная палочка. Образует колонии, напоминающие рост гриба: ризоидные или мицелевидные, стелющиеся по поверхности агара(рис. 4). Пучки нитей отходят от края колоний, создавая иллюзию ветвления; нити изгибаются направо или налево, образуя право- или левовращающиеся формы колоний. Клетки в поперечнике - 0,8-1,2 мкм, по длине в зависимости от среды – 5-7 мкм, часто 10 мкм и более. Цитоплазма вакуолизирована, с гранулами запасных питательных веществ. Формы подвижные (перитрихи). Вид имеет много вариантов. Клетки грамположительные.
Рис. 4 Bacillus mycoides. Колонии на МПА (верхний рисунок), клетки культуры под микроскопом (верхний рисунок)

В. cereus (от лат. с еra - восковой) — колонии восковидные, толстые, компактные, матовые со складчатым центром и ризоидными волнистыми краями; иногда мелкобугристые, с бахромчатыми краями, от которых отходят тонкие сплетения нитей. Клетки толстые, диаметром 1-1,5 мкм, длиной 3- 5 мкм, иногда и более; одиночные или соединены в цепочки, нити. Споры овальные (1,2-1,5 0,9 мкм), расположены субтерминально, прорастают полярно.

В. idosus (от лат. idos - образ, вид) - колонии сухие, матовые, плоские, мелкоморщинистые, легко и целиком снимающиеся иглой с поверхности агара. Клетки - тонкие прямые палочки (2-3 0,6 мкм), подвижные. Споры овальные, чаще образуются в центральной части клеток.